一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法技术

本发明专利技术提供一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1，将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期；步骤2，将步骤1得到的菌液离心后舍弃上清液，先洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀；步骤3，将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在步骤2得到的混合液中，之后进行恒温干燥，最后在

【技术实现步骤摘要】
一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法


[0001]本专利技术属于菌种保藏
，具体涉及一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法。

技术介绍

[0002]微生物菌种是国家的重要生物资源，也是生产、教学和科学研究的基本材料。为确保菌种的质量和活力，正确的菌种保藏方法在微生物学研究及实际应用中至关重要。
[0003]目前，芽孢杆菌菌种的保藏方法存在一些缺陷，如操作复杂、菌种容易发生污染和退化，保藏所使用的冷冻保护剂经济成本高且不安全。

技术实现思路

[0004]针对现有蜡样芽孢杆菌菌种保藏存在的问题，本专利技术提供一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，以天然蓝藻材料(发菜、地木耳)为载体进行菌种保藏，菌种存活率高，操作简单易行，经济节约，安全性高。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案来实现：
[0006]一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，包括以下步骤：
[0007]步骤1，将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期；
[0008]步骤2，将步骤1得到的菌液离心后舍弃上清液，先洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀；
[0009]步骤3，将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在步骤2得到的混合液中，之后进行恒温干燥，最后在
‑
80℃～25℃下保藏，完成芽孢杆菌菌种的保藏。
[0010]优选的，步骤1将待保藏的芽孢杆菌先置于液体培养基中，之后在35～38℃和150～300rpm的条件下恒温震荡培养12～18h，作为种子菌。
[0011]进一步，步骤1将所得的种子菌按1％的接种量接种到液体培养基中，培养至OD
600
＝0.2～0.8。
[0012]优选的，步骤2将步骤1得到的菌液在5000～7000rpm下离心3～8min后舍弃上清液。
[0013]优选的，步骤2用浓度为0.01M、pH为7.0的PBS溶液洗涤菌体沉淀3～5次。
[0014]优选的，步骤2用与步骤1所述菌液等体积的PBS溶液重悬菌体沉淀，PBS溶液的浓度为0.01M、pH为7.0。
[0015]优选的，步骤3按如下过程对发菜或地木耳进行灭菌：
[0016]用质量分数为60％～80％的乙醇浸泡发菜或地木耳30～45s，之后用灭菌水进行漂洗，然后在紫外灯下照射0.5～1h，最后真空冷冻干燥，得到所述的发菜或地木耳。
[0017]优选的，步骤3中所述的发菜或地木耳与所述的混合液的比例为(0.01～0.1)g：1mL。
[0018]优选的，步骤3将灭菌后的发菜或地木耳在混合液中浸泡15～20min。
[0019]优选的，步骤3将浸泡后的发菜或地木耳在温度为20～30℃、相对湿度为40％～60％RH的恒温条件下干燥3～5天，再进行保藏。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：
[0021]本专利技术是一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，先将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期，之后可将得到的菌液离心，舍弃上清液后方便洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀，再将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在得到的混合液中，之后恒温干燥即可在
‑
80℃～25℃下保藏。发菜表面粗糙不平，由不规则的胶质块体堆积而成，厚薄不均，呈波浪状无规则皱折起伏，并有许多指状突起和裂隙。发菜特殊的形态结构有利于微生物的附着。在生长过程中，野生发菜在藻丝体表面分泌多糖并形成胶鞘，此胶鞘为附生微生物提供了可生存的场所，而地木耳的表面皱折不平，含有大量胶质物。这些胶质物呈片状堆积，形成许多大小不等的间缝，这种特殊的形态结构为微生物附着提供了环境。本专利技术操作简单、方便，菌种存活率高，利用天然蓝藻材料的自然形态结构特点用于芽孢杆菌菌种保藏，原料易得，适用范围广。此外，保藏温度(常温和低温)范围广，保藏过程不需要添加额外试剂，如DMSO、甘油和海藻糖等高成本、有毒的冷冻保护剂，可节约成本、降低环境污染，能够实现芽孢杆菌菌种的稳定保存，菌种变异或退化程度极小，菌种存活率高。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中发菜原植体形态图。
[0023]图2为本专利技术实施例5中地木耳原植体形态图。
[0024]图3为本专利技术实施例1中扫描电镜下发菜的表面结构图。
[0025]图4为本专利技术实施例1中扫描电镜下菌种在发菜表面的分布图。
[0026]图5为本专利技术实施例1中菌种的存活率图。
[0027]图6为本专利技术实施例2中菌种的存活率图。
[0028]图7为本专利技术实施例3中菌种的存活率图。
[0029]图8为本专利技术实施例4中菌种的存活率图。
[0030]图9为本专利技术实施例5中菌种的存活率图。
具体实施方式
[0031]以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0032]发菜，又名发状念珠藻，是一种生长在荒漠地带的陆生性蓝藻。发菜原植体外观为头发丝状，粗细不均；藻体表面粗糙不平，由不规则的胶质块体堆积而成，厚薄不均，呈波浪状无规则皱折起伏，并有许多指状突起和裂隙。发菜特殊的形态结构有利于微生物的附着。在生长过程中，野生发菜在藻丝体表面分泌多糖并形成胶鞘，此胶鞘为附生微生物提供了可生存的场所。
[0033]地木耳，又名地皮菜，分布于沙漠、干燥的草原和岩石表面。成熟的地木耳外观呈扁平皱折膜状或波状片体，有时边缘呈不规则撕裂状，有的有穿孔；地木耳的表面皱折不平，含有大量胶质物。这些胶质物呈片状堆积，形成许多大小不等的间缝，这种特殊的形态
结构为微生物附着提供了环境。
[0034]以下实施例中的发菜采集于宁夏回族自治区银川市，地木耳采集于甘肃省会宁县；所采用的菌种为蜡样芽孢杆菌，分离于野生发菜表面，通过16SrRNA测序结果鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌，基因组序列已提交于GenBank数据库中，序列编号为JAGKST000000000，并命名为Bacillus sp.strain WL1；所采用的仪器和试剂，如无特殊说明，均为常规生物公司购买。
[0035]本专利技术一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，包括如下步骤：
[0036](1)天然蓝藻材料的处理：
[0037]将野外采集的发菜和地木耳清洗干净，去除杂质，然后进行灭菌和干燥处理。
[0038]灭菌处理为质量分数为60％～80％的乙醇浸泡30～45s，然后用灭菌水快速漂洗，紫外灯照射0.5～1h，真空冷冻干燥备用。
[0039](2)菌种的活化：
[0040]采用平板划线法活化保藏于
‑
80℃的芽孢杆菌。
[0041](3)菌种的培养：
[0042]挑取芽孢杆菌单菌落置于液体培养基中，35～38℃、150～300rpm恒温震荡培养12～18h，作为种子菌，将接种量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期；步骤2，将步骤1得到的菌液离心后舍弃上清液，先洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀；步骤3，将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在步骤2得到的混合液中，之后进行恒温干燥，最后在
‑
80℃～25℃下保藏，完成芽孢杆菌菌种的保藏。2.根据权利要求1所述的一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，步骤1将待保藏的芽孢杆菌先置于液体培养基中，之后在35～38℃和150～300rpm的条件下恒温震荡培养12～18h，作为种子菌。3.根据权利要求2所述的一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，步骤1将所得的种子菌按1％的接种量接种到液体培养基中，培养至OD
600
＝0.2～0.8。4.根据权利要求1所述的一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，步骤2将步骤1得到的菌液在5000～7000rpm下离心3～8min后舍弃上清液。5.根据权利要求1所述的一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翔，郑涛，袁晓龙，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：