一种麦角菌的培养与保存方法技术

本申请提供了一种麦角菌的培养与保存方法，先将麦角菌接种至斜面培养基上进行培养，然后当麦角菌生长成熟后刮下菌丝，然后将菌丝转移至无菌容器中，加适量无菌水，然后采用高速剪切混合的方法制成菌悬液，然后向菌悬液中加入甘油溶液，然后将甘油菌悬液分装至冷冻管中，然后冷冻保存；使用高剪切分散乳化机对麦角菌的菌丝团进行高效高速剪切，并混合制备均质的菌悬液，能够满足菌种的主菌种库和工作菌种库应为均质菌液的要求，解决了麦角菌的菌丝团硬度大、菌丝生长致密与不易分散的难题；生长速度提高了20%～30%，发酵代谢产物中麦角酸的含量提高了140%～170%；操作简易，成本低，原材料与设备来源广泛，适合大规模工业化生产。适合大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种麦角菌的培养与保存方法


[0001]本专利技术属于医药生产
，涉及麦角菌的传代培养方法，尤其是涉及一种麦角菌的培养与保存方法。

技术介绍

[0002]麦角菌(Claviceps purpurea)属于真菌界、子囊菌门、核菌纲、肉座菌目、麦角菌科、麦角菌属。麦角菌寄生在黑麦、小麦、大麦、燕麦、鹅冠草等禾本科植物上。麦角菌属于一种子囊菌，最喜寄生在黑麦、大麦等禾本科植物的子房里，发育形成坚硬、褐至黑色的角状菌核，人们把它叫做麦角。
[0003]麦角为名贵中药材，据分析其所含的生物碱多达12种，分为麦角胺、麦角毒碱、麦角新碱3大类，主要功能是引起肌肉痉挛收缩，故常用作妇产科药物，用作治疗产后出血的止血剂和促进子宫复原的收敛剂，广泛用于临床使用。
[0004]《药品生产质量管理规范》(GMP，2010年版)原料药中规定要“保证发酵产物和组分的批间一致性”，并且规定，主菌种库是从原始菌种库的菌种经过传代、增殖后混成均质菌液，定量分装于冻存管；工作菌种库是从主菌种库的菌种经过传代、增殖后混成均质菌液，定量分装于冻存管中。但是，麦角菌在斜面培养基上，菌丝致密，菌落硬度大，很难制备成混合均匀的菌悬液。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种麦角菌的培养与保存方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0007]一种麦角菌的培养与保存方法，包括以下依次进行的步骤：
[0008]1)将麦角菌接种至斜面培养基上进行斜面培养，当麦角菌生长成熟后，用接种针刮下菌丝，然后将菌丝转移至无菌容器中，然后加无菌水至无菌容器中；
[0009]2)采用高速剪切混合的方法制成菌悬液；
[0010]3)向菌悬液中加入甘油溶液，然后混合均匀，完成后制成甘油菌悬液；
[0011]4)将甘油菌悬液分装至冷冻管中；
[0012]5)将装有甘油菌悬液的冷冻管冷冻保存。
[0013]优选的，步骤1)中，斜面培养基的制备方法为：先称量30g～50g的马铃薯葡萄糖琼脂与0.3g～1.0g的酵母提取物，转移至烧杯中；
[0014]然后加500ml纯化水至烧杯中，煮沸，搅拌至溶解；
[0015]然后加水至1000ml；
[0016]然后调节pH至6.5～7.5；
[0017]然后定量分装60ml培养基至250mL茄瓶中，加塞，
[0018]然后湿热灭菌15分钟～30分钟，湿热灭菌中压力为0.12
±
0.02MPa，湿热灭菌中温度为121℃～124℃；
[0019]然后凝固，制成空白的斜面培养基。
[0020]优选的，所述酵母提取物为酵母粉和/或酵母浸膏。
[0021]优选的，步骤1)中，麦角菌在斜面培养基上培养的温度为25℃～30℃，培养时间为6
‑
10天。
[0022]优选的，步骤1)中，向无菌容器中加入20mL～50mL无菌水。
[0023]优选的，步骤2)中，高速剪切混合使用的是高剪切分散乳化机。
[0024]优选的，步骤2)中，高剪切分散乳化机的转速为20000rpm～28000rpm，剪切混合时间为1min～2min。
[0025]优选的，步骤3)中，甘油溶液的体积浓度为40％～60％。
[0026]优选的，步骤3)中，菌悬液与甘油溶液的配比为体积比1:1。
[0027]优选的，步骤5)中，冷冻保存的温度为
‑
70℃～
‑
90℃。
[0028]与现有技术相比，本专利技术取得了以下的有益的技术效果：
[0029](1).本专利技术是使用高剪切分散乳化机对麦角菌的菌丝团进行高效、高速剪切，并混合制备均质的菌悬液，能够满足《药品生产质量管理规范》要求的菌种的主菌种库和工作菌种库应为均质菌液的要求，解决了麦角菌的菌丝团硬度大、菌丝生长致密以及不易分散的难题，开拓了菌种保存的新路，对菌种发酵业生产的发展有积极意义。
[0030](2).经研究发现，采用本专利技术技术保存的麦角菌菌种，在相同培养条件下，菌种的生长速度更快，发酵代谢产物中麦角酸的含量更高，相比于现有技术，生长速度提高了20％～30％，发酵代谢产物中麦角酸的含量提高了140％～170％。
[0031](3).本申请中，麦角菌的保存方法操作简易、成本低，且原材料与设备来源广泛，适合大规模工业化生产，具有良好的经济效益和社会效益。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0033]本申请提供了一种麦角菌的培养与保存方法，包括以下依次进行的步骤：
[0034]1)将麦角菌接种至斜面培养基上进行斜面培养，当麦角菌生长成熟后，用接种针刮下菌丝，然后将菌丝转移至无菌容器中，然后加无菌水至无菌容器中；
[0035]2)采用高速剪切混合的方法制成菌悬液；
[0036]3)向菌悬液中加入甘油溶液，然后混合均匀，完成后制成甘油菌悬液；
[0037]4)将甘油菌悬液分装至冷冻管中；
[0038]5)将装有甘油菌悬液的冷冻管冷冻保存。
[0039]在本申请的一个实施例中，步骤1)中，斜面培养基的制备方法为：先称量30g～50g的马铃薯葡萄糖琼脂与0.3g～1.0g的酵母提取物，转移至烧杯中；
[0040]然后加500ml纯化水至烧杯中，煮沸，搅拌至溶解；
[0041]然后加水至1000ml；
[0042]然后调节pH至6.5～7.5；
[0043]然后定量分装60ml培养基至250mL茄瓶中，加塞，
[0044]然后湿热灭菌15分钟～30分钟，湿热灭菌中压力为0.12
±
0.02MPa，湿热灭菌中温度为121℃～124℃；
[0045]然后凝固，制成空白的斜面培养基。
[0046]在本申请的一个实施例中，所述酵母提取物为酵母粉和/或酵母浸膏。
[0047]在本申请的一个实施例中，步骤1)中，麦角菌在斜面培养基上培养的温度为25℃～30℃，培养时间为6
‑
10天。
[0048]在本申请的一个实施例中，步骤1)中，向无菌容器中加入20mL～50mL无菌水。
[0049]在本申请的一个实施例中，步骤2)中，高速剪切混合使用的是高剪切分散乳化机。
[0050]在本申请的一个实施例中，步骤2)中，高剪切分散乳化机的转速为20000rpm～28000rpm，剪切混合时间为1min～2min。
[0051]在本申请的一个实施例中，步骤3)中，甘油溶液的体积浓度为40％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种麦角菌的培养与保存方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：1) 将麦角菌接种至斜面培养基上进行斜面培养，当麦角菌生长成熟后，用接种针刮下菌丝，然后将菌丝转移至无菌容器中，然后加无菌水至无菌容器中；2) 采用高速剪切混合的方法制成菌悬液；3) 向菌悬液中加入甘油溶液，然后混合均匀，完成后制成甘油菌悬液；4) 将甘油菌悬液分装至冷冻管中；5) 将装有甘油菌悬液的冷冻管冷冻保存。2.根据权利要求1所述的一种麦角菌的培养与保存方法，其特征在于，步骤1)中，斜面培养基的制备方法为：先称量30g～50g的马铃薯葡萄糖琼脂与0.3g～1.0g的酵母提取物，转移至烧杯中；然后加500ml纯化水至烧杯中，煮沸，搅拌至溶解；然后加水至1000ml；然后调节pH至6.5～7.5；然后定量分装60ml培养基至250mL茄瓶中，加塞，然后湿热灭菌15分钟～30分钟，湿热灭菌中压力为0.12
±
0.02MPa，湿热灭菌中温度为121℃～124℃；然后凝固，制成空白的斜面培养基。3.根据权利要求2所述的一种麦角菌的培养与保存方法，其特征在于，所述酵母提取物为酵母粉和/或酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑召霞，阮健，张卫，葛翠凤，葛祥斌，叶晖，马少华，毛宁，
申请(专利权)人：福安药业集团烟台只楚药业有限公司，
类型：发明
国别省市：