一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法技术

本发明专利技术属于微生物发酵技术领域，公开了一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法。该方法通过在罗伊氏乳杆菌对数生长中期补加试剂，试剂为海藻糖、蔗糖、甘油、茶多酚、羟乙基淀粉、聚乙烯聚吡咯烷酮、二十二碳六烯酸、抗坏血酸棕榈酸酯和乳酸钠中的至少一种，提高了罗伊氏乳杆菌的冻干存活率，相应地，该罗伊氏乳杆菌经过37℃加速2个月和25℃常温1年储藏后的存活率也得到提高；进一步地，本发明专利技术还通过在罗伊氏乳杆菌对数生长后期进行热胁迫处理、和/或在罗伊氏乳杆菌对数生长后期进行低温胁迫处理、和/或在冷冻干燥前添加上清液，更进一步提高罗伊氏乳杆菌的冻干存活率。氏乳杆菌的冻干存活率。

【技术实现步骤摘要】
一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法


[0001]本专利技术属于微生物发酵
，具体涉及一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法。

技术介绍

[0002]益生菌是活的微生物，当宿主中摄入足量时，会产生健康益处。近年来在欧盟、美国、日本和中国等国家和地区的市场上，含有益生菌的产品种类逐年增多。大量的科学实验已经证实经常性的摄入益生菌及其制品能够保证肠道的健康。
[0003]要使益生菌产品可以发挥理想的益生效果，必须要保证产品中活菌的数量足够，所以，目前工业大部分是从益生菌菌生产工艺的后端来进行控制，如采用真空冷冻干燥的方法制备益生菌菌粉，同时添加合适的保护剂来提高益生菌冻干存活率以及保证其储藏稳定性。这种方法确实是在一定程度要可以提升益生菌菌粉的储藏稳定性，但因菌株的差异性，该方法有一定的局限性。而且，目前较少研发人员从前端(如发酵工艺的控制)来研究其益生菌的稳定性。

技术实现思路

[0004]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法。
[0005]本专利技术第二方面的目的，在于提供第一方面的方法得到的罗伊氏乳杆菌冻干。
[0006]本专利技术第三方面的目的，在于提供第一方面的方法和/或第二方面的罗伊氏乳杆菌冻干在制备产品中的应用。
[0007]本专利技术第四方面的目的，在于提供一种产品。
[0008]本专利技术第五方面的目的，在于提供一种试剂。
[0009]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种培养基。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0011]本专利技术的第一个方面，提供一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法，所述方法包括在罗伊氏乳杆菌对数生长中期补加试剂的步骤；
[0012]所述试剂为海藻糖、蔗糖、甘油、茶多酚、羟乙基淀粉、聚乙烯聚吡咯烷酮、二十二碳六烯酸、抗坏血酸棕榈酸酯和乳酸钠中的至少一种。
[0013]优选地，所述方法包括如下步骤：将罗伊氏乳杆菌菌液接种至培养基，培养，在罗伊氏乳杆菌对数生长中期补加试剂，在罗伊氏乳杆菌对数生长末期时进行固液分离，得到上清液和菌泥，将菌泥和与冻干保护剂混合，冷冻干燥，得到罗伊氏乳杆菌冻干。
[0014]优选地，所述罗伊氏乳杆菌菌液的接种量为所述培养基的1v/v％～5v/v％；进一步为1v/v％～2v/v％。
[0015]优选地，所述培养基为MRS液体培养基、NB液体培养基、LBS液体培养基以及本领域其他用于培养罗伊氏乳杆菌的常规培养基。
[0016]优选地，所述培养的温度为35～39℃；进一步为36～38℃；更进一步为37℃。
[0017]优选地，所述罗伊氏乳杆菌菌液的制备方法如下：将保存的罗伊氏乳杆菌活化，扩
大培养，得到罗伊氏乳杆菌菌液。
[0018]优选地，所述活化的步骤如下：取一环保存的罗伊氏乳杆菌，在活化培养基上划线，35～39℃培养46～50h，得到活化的罗伊氏乳杆菌。
[0019]优选地，所述活化培养基为MRS固体培养基、NB固体培养基、LBS固体培养基以及本领域其他用于活化罗伊氏乳杆菌的常规培养基。
[0020]优选地，所述扩大培养的步骤如下：取活化的罗伊氏乳杆菌接种至种子培养基中，35～39℃培养16～20h，得到罗伊氏乳杆菌菌液。
[0021]优选地，所述种子培养基为MRS液体培养基、NB液体培养基、LBS液体培养基以及本领域其他用于扩大培养罗伊氏乳杆菌的常规培养基。
[0022]优选地，所述试剂为(1)～(15)中任一种：(1)海藻糖；(2)蔗糖；(3)甘油；(4)茶多酚；(5)羟乙基淀粉；(6)聚乙烯聚吡咯烷酮；(7)二十二碳六烯酸；(8)抗坏血酸棕榈酸酯；(9)乳酸钠；(10)海藻糖和蔗糖；(11)海藻糖和甘油；(12)海藻糖和茶多酚；(13)海藻糖、茶多酚和二十二碳六烯酸；(14)海藻糖、茶多酚和抗坏血酸棕榈酸酯；(15)海藻糖、茶多酚、二十二碳六烯酸和抗坏血酸棕榈酸酯。
[0023]优选地，(1)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L；进一步为10g/L。
[0024]优选地，(2)中所述蔗糖的终浓度为5～25g/L；进一步为10g/L。
[0025]优选地，(3)中所述甘油的终浓度为10～25g/L；进一步为15g/L。
[0026]优选地，(4)中所述茶多酚的终浓度为1～10g/L；进一步为5g/L。
[0027]优选地，(5)中所述羟乙基淀粉的终浓度为1～15g/L；进一步为5g/L。
[0028]优选地，(6)中所述聚乙烯聚吡咯烷酮的终浓度为1～15g/L；进一步为5g/L。
[0029]优选地，(7)中所述二十二碳六烯酸的终浓度为0.5～5g/L；进一步为2g/L。
[0030]优选地，(8)中所述抗坏血酸棕榈酸酯的终浓度为0.1～1.5g/L；进一步为1g/L。
[0031]优选地，(9)中所述乳酸钠的终浓度为5～25g/L；进一步为10g/L。
[0032]优选地，(10)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述蔗糖的终浓度为5～25g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述蔗糖的终浓度为10g/L。
[0033]优选地，(11)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述甘油的终浓度为10～25g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述甘油的终浓度为15g/L。
[0034]优选地，(12)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述茶多酚的终浓度为1～10g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述茶多酚的终浓度为5g/L。
[0035]优选地，(13)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述茶多酚的终浓度为1～10g/L，所述二十二碳六烯酸的终浓度为0.5～5g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述茶多酚的终浓度为5g/L，所述二十二碳六烯酸的终浓度为2g/L。
[0036]优选地，(14)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述茶多酚的终浓度为1～10g/L，所述抗坏血酸棕榈酸酯的终浓度为0.1～1.5g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述茶多酚的终浓度为5g/L，所述抗坏血酸棕榈酸酯的终浓度为1g/L。
[0037]优选地，(15)中所述海藻糖的终浓度为5～20g/L，所述茶多酚的终浓度为1～10g/L，所述二十二碳六烯酸的终浓度为0.5～5g/L，所述抗坏血酸棕榈酸酯的终浓度为0.1～1.5g/L；进一步优选地，所述海藻糖的终浓度为10g/L，所述茶多酚的终浓度为5g/L，所述二十二碳六烯酸的终浓度为2g/L，所述抗坏血酸棕榈酸酯的终浓度为1g/L。
[0038]优选地，所述固液分离的方式为离心。
[0039]优选地，所述离心的条件为5000～8000r/min下离心15～25min。
[0040]优选地，所述冻干保护剂包括低聚木糖、菊粉、脱脂奶粉、海藻糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备罗伊氏乳杆菌冻干的方法，所述方法包括在罗伊氏乳杆菌对数生长中期补加试剂的步骤；所述试剂为海藻糖、蔗糖、甘油、茶多酚、羟乙基淀粉、聚乙烯聚吡咯烷酮、二十二碳六烯酸、抗坏血酸棕榈酸酯和乳酸钠中的至少一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将罗伊氏乳杆菌菌液接种至培养基，培养，在罗伊氏乳杆菌对数生长中期补加试剂，在罗伊氏乳杆菌对数生长末期进行固液分离，得到上清液和菌泥，将菌泥和与冻干保护剂混合，冷冻干燥，得到罗伊氏乳杆菌冻干。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在罗伊氏乳杆菌对数生长后期进行热胁迫处理，所述热胁迫处理为42～48℃处理30～60min。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在罗伊氏乳杆菌对数生长后期进行低温胁迫处理，所述低温胁迫处理为15～25℃处理30～60min。5.根据权利要求2～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在冷冻干燥前，添加所述上清液。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述上清液...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈则华，陈珂可，崔树茂，李文治，朱建国，宁初光，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：