组合物及文库构建方法技术

本发明专利技术公开了一种组合物及文库构建方法。本发明专利技术通过在连接反应体系中引入增强剂，有效提升了连接效率，同时应用于核酸文库构建中，接头二聚体残留低，显著提升了测序有效数据量含量，减少了数据的浪费，一定程度上降低了测序成本。序成本。

【技术实现步骤摘要】
组合物及文库构建方法


[0001]本专利技术涉及分子扩增
，具体而言，涉及一种组合物及文库构建方法。

技术介绍

[0002]连接反应是核酸分子DNA或RNA的两端实现连接，例如平末端连接或粘性末端连接，通常连接反应过程需要连接酶的催化。连接反应广泛运用于分子克隆或检测中，例如在高通量测序文库构建上，通过连接反应将核酸分子与测序接头进行连接。因此，提高连接反应效率，增加文库浓度非常有意义。此外，目前文库构建方法均采用过量的接头序列和目的片段，比例通常在100
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400倍不等，过量的接头序列容易引起接头自身连接形成接头二聚体，因此，降低接头自连，提高有效数据量有很大益处。
[0003]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术意外地发现，连接反应中添加聚蔗糖和DMSO，能够实现以下至少一个效果：提高连接效率，增加文库浓度，接头二聚体含量低、测序数据量高。
[0005]本专利技术具有以下至少一种技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种用于核酸连接反应的组合物，包括聚蔗糖和DMSO。
[0007]在一些实施方式中，上述组合物还包括丙二醇。
[0008]在一些实施方式中，上述的丙二醇选自1,3
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丙二醇、1,2
‑
丙二醇中的至少一种。
[0009]在一些实施方式中，连接反应体系中丙二醇的体积百分比为1
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5％。
[0010]在一些实施方式中，连接反应体系中聚蔗糖的体积百分比为5
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15％。
[0011]在一些实施方式中，聚蔗糖的平均分子量为70000
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400000。
[0012]在一些实施方式中，聚蔗糖选自Ficoll400或Ficoll70。
[0013]在一些实施方式中，连接反应体系中DMSO的体积百分比为2
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20％。
[0014]在一些实施方式中，上述的组合物用于核酸文库构建的连接反应阶段。
[0015]在一些实施方式中，上述的组合物还包括连接酶。
[0016]在一些实施方式中，上述连接酶为DNA连接酶。
[0017]DNA连接酶选自T3 DNA连接酶，T4 DNA连接酶，T7 DNA连接酶，Taq DNA连接酶，DNA连接酶，大肠杆菌DNA连接酶中的至少一种。
[0018]本专利技术还提供了一种构建核酸文库的试剂盒，包括上述任一项的组合物。
[0019]在一些实施方式中，上述试剂盒还包括接头序列、连接反应缓冲液中的至少一种。
[0020]本专利技术还提供了一种核酸连接方法，包括：将上述的组合物与核酸片段混合，在允许连接的条件下进行连接。
[0021]本专利技术还提供了一种构建核酸文库的方法，包括使用上述的组合物、接头序列和连接反应缓冲液进行接头连接反应的步骤。
[0022]在接头连接反应前还包括对核酸片段进行末端修复和加A步骤。
[0023]在一些实施方式中，上述在接头连接反应后还包括PCR富集步骤。
[0024]在一些实施方式中，上述在接头连接反应后PCR富集前，构建核酸文库的方法还包括对纯化步骤。
[0025]在一些实施方式中，上述纯化的步骤包括磁珠纯化的步骤。
具体实施方式
[0026]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0027]本专利技术提供了一种用于核酸连接反应的组合物，包括聚蔗糖(Ficoll)和DMSO(二甲基亚砜)。本专利技术通过在连接反应体系中添加上述组合物，有效提升了连接效率；而接头二聚体含量低，进而提升了测序有效数据量，减少了数据的浪费，一定程度上降低了测序成本。
[0028]在一些实施方式中，上述组合物还包括丙二醇。丙二醇的加入可以在一定程度上进一步提高连接效率，提高文库浓度。
[0029]在一些实施方式中，上述丙二醇选自1,3
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丙二醇、1,2
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丙二醇中的至少任意一种。
[0030]在一些实施方式中，连接反应体系中丙二醇的体积百分比为1
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5％；例如可以是1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5、4％、4.5％或5％，但不限于此。
[0031]在一些实施方式中，连接反应体系中所述聚蔗糖的体积百分比为5
‑
15％；例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％，但不限于此。
[0032]在一些实施方式中，上述聚蔗糖的平均分子量为70000
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400000；例如可以是70000、100000、150000、200000、300000、400000，但不限于此。
[0033]在一些实施方式中，上述聚蔗糖例如为Ficoll400或Ficoll70。其中，Ficoll400的平均分子量为400000，Ficoll70的平均分子量为70000。
[0034]在一些实施方式中，连接反应体系中所述DMSO的体积百分比为2
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20％；例如可以是2％、4％、6％、8％、10％、12％、14％、16％、18％或20％，但不限于此。
[0035]需要说明的是，连接反应体系中含丙二醇、聚蔗糖或DMSO的体积浓度仅仅是溶液形式的添加量，在其他实施方式中，等同换算的摩尔数、质量份数、干粉形式的添加比例均在本专利技术的保护范围内。
[0036]在一些实施方式中，组合物用于核酸文库构建的连接反应阶段。
[0037]在一些实施方式中，组合物还包括连接酶。
[0038]在一些实施方式中，上述连接酶为DNA连接酶。
[0039]DNA连接酶选自T3 DNA连接酶，T4 DNA连接酶，T7 DNA连接酶，Taq DNA连接酶，DNA连接酶，大肠杆菌DNA连接酶中的至少一种。
[0040]连接反应体系中连接酶的添加量为0.006
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120单位/μL。在其他实施方式中，上述连接酶的添加量可以根据实际连接的需求进行添加。
[0041]一种连接反应缓冲液，包括上述任意一些实施方式中定义的组合物和缓冲成分。
[0042]一种构建核酸文库的试剂盒，其包括上述任意一些实施方式中的组合物。
[0043]在一些实施方式中，上述试剂盒还包括上述的接头序列、连接反应缓冲液中的至少任意一种。
[0044]其中，接头序列与测序平台相适应。在一些实施方式中，例如illumina平台，接头序列可以是U型接头或者Y型接头。
[0045]在一些实施方式中，接头序列的添加量为1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于核酸连接反应的组合物，包括聚蔗糖和DMSO。2.根据权利要1所述的组合物，其特征在于，还包括丙二醇；优选地，所述丙二醇选自1,3
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丙二醇、1,2
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丙二醇中的至少一种；优选地，连接反应体系中所述丙二醇的体积百分比为1
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5％。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，连接反应体系中所述聚蔗糖的体积百分比为5
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15％；优选地，所述聚蔗糖的平均分子量为70000
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400000；优选地，所述聚蔗糖选自Ficoll400或Ficoll70。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，连接反应体系中所述DMSO的体积百分比为2
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20％。5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括连接酶；优选地，所述连接酶为DNA连接酶；优选地，所述DNA连接酶选自T3 DNA连接酶，T4 DNA连接酶，T7 DNA连接酶，Taq DNA连接酶，连接...

【专利技术属性】
技术研发人员：商桂，李洪洲，关媛妹，
申请(专利权)人：广东菲鹏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：