一种绞股蓝皂苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种绞股蓝皂苷的制备方法。所述方法包括取绞股蓝干燥全草，经拣选、洗涤后，粉碎，过筛后，经乙醇提取，树脂柱洗脱富集，硅胶柱分离，制备液相再次分离，最终制备得到了绞股蓝皂苷A以及绞股蓝皂苷XLIX，制得的各类绞股蓝功效苷纯品含量均能够达到药用标准。此外，本发明专利技术的制备方法简单，不需要复杂的设备，适用于工业化提取制备各类绞股蓝功效苷。适用于工业化提取制备各类绞股蓝功效苷。适用于工业化提取制备各类绞股蓝功效苷。

【技术实现步骤摘要】
一种绞股蓝皂苷的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种绞股蓝皂苷的制备方法，特别涉及一种绞股蓝皂苷A以及绞股蓝皂苷XLIX的制备方法，本专利技术属于医药化工


技术介绍

[0002]绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino]，葫芦科（Cucurbitaceae）绞股蓝属（Gynostemma BL.）多年生攀援草质藤本植物。绞股蓝性寒、味苦，其主要有效成分是绞股蓝皂苷，此外还含有甾醇类、黄酮类成分，以及维生素C、谷氨酸等17种氨基酸和铁、锌、铜等18种微量元素。由于其酸水解产物与人参皂苷的酸水解产物——人参二醇具有相同的理化性质，因而被称为“南方人参”。绞股蓝有清热解毒、止咳清肺祛痰、养心安神、补气生精之功效，可用于降血压、降血脂、护肝、促进睡眠以及肠胃炎、气管炎、咽喉炎的治疗，并用于多种癌症的抗癌临床治疗。绞股蓝是卫计委公布的可作为保健食品的中药，为益寿保健之品，并被卫生部批准作为新资源药食两用植物。
[0003]绞股蓝的主要活性成分为皂苷、黄酮，已知含有包括绞股蓝皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX等140余种绞股蓝皂苷以及商陆素、芦丁、槲皮素等10余种黄酮类成分，是目前所知非五加科人参属植物中唯一含有人参皂苷类成分的植物。
[0004]现代研究证明，绞股蓝皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX是一种重要的药物中间体，降血糖、降血脂、抗血栓、对心脑血管保护等作用疗效显著，市场开发前景广阔。但是绞股蓝皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX在天然植物中的含量很低，本专利技术采用的绞股蓝干燥全草的含量为天然植物中含量较高的，也仅为0.4
‰
。因其含量低，现有技术很难同时适用于提取制备各类绞股蓝功效苷的皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX且纯度达到98%以上的工业化生产。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的技术缺陷，提供一种绞股蓝皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX的制备方法，以解决现有技术无法同时适用工业化提取制备各类绞股蓝功效苷的问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：本专利技术的一种绞股蓝皂苷的制备方法，其包括以下步骤：（1）取绞股蓝干燥全草，经拣选、洗涤后，粉碎，过筛；（2）用质体比为1:8
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10的乙醇在60
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90℃下回流提取3次，合并提取液低温浓缩回收乙醇，浓缩后加水溶解；（3）水溶液过大孔树脂柱，先用水洗脱，再用50%w/w的乙醇溶液洗脱，浓缩富集的乙醇洗脱液；（4）低温浓缩回收完乙醇后，冷冻干燥；（5）取干燥后的绞股蓝皂苷粗品，加入体积比为10:2
‑
3.5的三氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，上硅胶层析柱，然后用相同混合比例的三氯甲烷
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甲醇混合溶剂洗脱；
（6）TLC跟踪监测收集含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，洗脱完成后，减压浓缩回收试剂，抽真空干燥，得到含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的胶状物；（7）步骤（6）得到的含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的胶状物用2%
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10%v/v的乙腈水溶液溶解，再采用制备液相再次分离，洗脱条件如下:21分钟后收集绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，低温浓缩，浓缩至少量析出晶体过滤后得到纯品绞股蓝皂苷XLIX；26分钟后收集绞股蓝皂苷A的洗脱液，低温浓缩，浓缩至少量析出晶体过滤后得到纯品绞股蓝皂苷A。
[0007]其中，绞股蓝皂苷XLIX结构式如下:绞股蓝皂苷A结构式如下:其中，优选的，步骤（1）中所述的绞股蓝干燥全草过筛时的目数为10目。
[0008]其中，优选的，步骤（2）中所述的低温浓缩的温度不能大于70℃。
[0009]其中，优选的，步骤（3）中所述的大孔树脂柱中的树脂型号为D101树脂，用水溶液体积5倍体积的水洗脱，再用5倍体积的50%w/w乙醇溶液洗脱。
[0010]其中，优选的，步骤（4）中所述的低温浓缩的温度控制在70℃以内，所述的冷冻干燥的真空度为150Pa以内、温度为
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40℃以下。
[0011]其中，优选的，步骤（5）中取干燥后的绞股蓝皂苷粗品，加入体积比为10:2的三氯
甲烷和甲醇混合溶剂溶解得到溶解液，拌以硅胶搅拌均匀后上样，硅胶与溶解液质量比为1:2。
[0012]其中，优选的，步骤（6）中所述的用TLC跟踪监测，指用薄层色谱硅胶板，展开剂为正丁醇与乙酸乙酯的混合水溶液，其中正丁醇：乙酸乙酯：水体积比=4:1:5，用10%v/v硫酸乙醇溶液显色。
[0013]其中，优选的，步骤（7）中乙腈水溶液的浓度为5%v/v，绞股蓝皂苷与乙腈水溶液的质体比为1:15。
[0014]其中，优选的，所述的制备液相采用北京创新通恒科技有限公司LC6000型制备高效液相色谱仪 ID200*650制备柱。
[0015]相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用绞股蓝干燥全草，经乙醇提取，树脂柱洗脱富集，硅胶柱分离，制备液相再次分离，制得的各类绞股蓝功效苷纯品含量能够达到药用标准。此外，本专利技术的制备方法简单，不需要复杂的设备，适用于工业化提取制备各类绞股蓝功效苷。
[0016]附图说明
[0017]图1为实施例1中步骤（6）制得的绞股蓝皂苷胶状物进行制备液相分离图谱，其绞股蓝皂苷胶状物中皂苷XLIX含量为25%；图2所得绞股蓝皂苷XLIX纯品HPLC图谱；图3所得绞股蓝皂苷A纯品HPLC图谱；图4为本专利技术所得绞股蓝皂苷XLIX纯品LC
‑
MS图谱；图5为本专利技术所得绞股蓝皂苷XLIX纯品IR图谱；图6为实施例2中步骤（6）制得的绞股蓝皂苷胶状物进行制备液相分离图谱，其绞股蓝皂苷胶状物中皂苷XLIX含量为33%。
[0018]具体实施方式
[0019]下面通过实验并结合实施例对本专利技术做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本专利技术的保护范围。
[0020]实施例1绞股蓝皂苷A、绞股蓝皂苷XLIX的制备方法包括以下步骤：（1）取500kg绞股蓝干燥全草，经拣选、洗涤后，粉碎，过10目筛；（2）加入4000L乙醇在65℃下回流提取3次，合并提取液，65℃下浓缩回收乙醇，浓缩至胶状后比重为1.3，加水溶解；（3）水溶液过D101大孔树脂柱，用水溶液体积5倍体积的水洗脱，再用5倍体积的50%w/w乙醇溶液洗脱，浓缩富集的乙醇洗脱液；（4）低温（60℃）浓缩回收完乙醇后，冷冻干燥，冷冻干燥的真空度为150Pa，温度为
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40℃；冷冻干燥剩余的水相得绞股蓝皂苷粗品5kg；（5）取干燥后的绞股蓝皂苷粗品4kg，加入体积比为10:2的三氯甲烷和甲醇混合溶
剂溶解，拌以硅胶搅拌均匀后上样，硅胶与溶解液质量比为1:2，然后用相同混合比例的三氯甲烷
‑
甲醇混合溶剂洗脱；（6）TLC跟踪监测收集含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，洗脱完成后，减压浓缩回收试剂，抽真空干燥至胶状后，得到含有绞股蓝皂苷A和绞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取绞股蓝干燥全草，经拣选、洗涤后，粉碎，过筛；（2）用质体比为1:8
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10的乙醇在60
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90℃下回流提取3次，合并提取液低温浓缩回收乙醇，浓缩后加水溶解；（3）水溶液过大孔树脂柱，先用水洗脱，再用50%w/w的乙醇溶液洗脱，浓缩富集的乙醇洗脱液；（4）低温浓缩回收完乙醇后，冷冻干燥；（5）取干燥后的绞股蓝皂苷粗品，加入体积比为10:2
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3.5的三氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解，上硅胶层析柱，然后用相同混合比例的三氯甲烷
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甲醇混合溶剂洗脱；（6）TLC跟踪监测收集含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，洗脱完成后，减压浓缩回收试剂，抽真空干燥，得到含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的胶状物；（7）步骤（6）得到的含有绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的胶状物用2%
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10%v/v的乙腈水溶液溶解，再采用制备液相再次分离，洗脱条件如下:21分钟后收集绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，低温浓缩，浓缩至少量析出晶体过滤后得到纯品绞股蓝皂苷XLIX；26分钟后收集绞股蓝皂苷A的洗脱液，低温浓缩，浓缩至少量析出晶体过滤后得到纯品绞股蓝皂苷A。2.如权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张天，奚文祥，杜敏，陈琳剑，
申请(专利权)人：北京岳达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：