一种提高干细胞细胞因子产量的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种提高干细胞细胞因子产量的方法，将脂肪干细胞接种于含培养基的T25培养瓶中培养；当干细胞融合度达到75～85％时，对细胞培养液用氙灯进行照射，再次培养，收集干细胞因子上清液；将干细胞因子上清液用滤膜过滤后，依次通过50KD超滤膜和1KD超滤膜，得到细胞因子浓缩液；向所述细胞因子浓缩液中加入冻干保护剂后进行冻干处理，得到包含有含量增多的干细胞因子冻干粉。本发明专利技术的提高干细胞细胞因子产量的方法简单高效，使用氙灯照射培养提高了干细胞因子的总产量；将细胞因子冻干单独保存，为干细胞因子提供生存环境，维持干细胞因子活性，对糖尿病皮肤创伤修复有很好的愈合作用，应用范围广泛。应用范围广泛。应用范围广泛。

【技术实现步骤摘要】
一种提高干细胞细胞因子产量的方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种提高干细胞细胞因子产量的方法。

技术介绍

[0002]目前，皮肤组织的损伤常由机械性、物理性、化学性和生物性等因素引起，机体对形成的损伤进行修补的过程称为组织修复。组织修复还是一系列不同类型的修复细胞、结构蛋白和生长因子等形成网络式交互作用的结果。研究表明干细胞能够具有皮肤组织修复功能，表皮的自我更新能力主要取决于表皮基底层的干细胞，而表皮干细胞(ESC)的增殖主要取决于皮肤成纤维细胞分泌的生长因子。脂肪干细胞也是常用的皮肤修复用细胞，其是另一种被广泛应用的多能干细胞。目前提高干细胞细胞因子产量的方法虽然已有研究，但是用于大规模使用的方法还不多，应用场景也不充分，需要进一步的提高。
[0003]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的用于大规模使用的提高干细胞细胞因子产量的方法还不多，应用场景也不充分，需进一步提高。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种提高干细胞细胞因子产量的方法。
[0005]本专利技术是这样实现的，一种提高干细胞细胞因子产量的方法，所述提高干细胞细胞因子产量的方法包括以下步骤：
[0006]步骤一，进行干细胞的培养：将脂肪干细胞接种于含有脂肪干细胞无血清完全培养基的T25培养瓶进行培养，待细胞浓度融合后，洗涤，再加入DMEM
‑
HG/F12培养基和胎牛血清完全培养基继续进行培养；
[0007]步骤二，进行细胞培养上清液的获取：当干细胞融合度达到75～85％时，对细胞培养液用氙灯进行照射，再次进行培养，收集干细胞因子的上清液；
[0008]步骤三，进行细胞培养上清液的预处理：将获取的干细胞因子的上清液用滤膜过滤后，依次通过50KD超滤膜和1KD超滤膜，得到细胞因子浓缩液；
[0009]步骤四，进行高产干细胞细胞因子的制备：向所述细胞因子浓缩液中加入冻干保护剂后进行冻干处理，得到包含有含量增多的干细胞因子冻干粉。
[0010]进一步，所述步骤一中的干细胞的培养方法包括：
[0011](1)取脂肪干细胞，并将所述脂肪干细胞接种于T25培养瓶中；
[0012](2)向所述T25培养瓶中加入脂肪干细胞无血清完全培养基进行培养；
[0013](3)待细胞浓度融合至80％后，吸弃原来的培养基，用PBS洗涤2～3次后，再加入DMEM
‑
HG/F12培养基和胎牛血清完全培养基继续进行培养。
[0014]进一步，所述培养条件为37℃、5～10％CO2、3～5％O2，培养24～48h。
[0015]进一步，所述DMEM
‑
HG/F12培养基为终浓度70ng/mL多肽的DMEM
‑
HG/F12培养基。
[0016]进一步，所述步骤二中的细胞培养上清液的获取方法包括：
[0017](1)当干细胞融合度达到75～85％时，对细胞培养液用氙灯进行照射；
[0018](3)氙灯照射后，再次放入培养箱中进行培养1～3h；
[0019](3)循环培养3～5次后，收集包含有含量增多的干细胞因子的上清液。
[0020]进一步，所述氙灯照射照度为30000～60000lx，每次照射时间为2～4h。
[0021]进一步，所述步骤三中的细胞培养上清液的预处理方法包括：
[0022](1)将获取的所述包含有含量增多的干细胞因子的上清液用滤膜过滤；
[0023](2)用滤膜过滤后，将上清液通过50KD超滤膜，收集透析液；
[0024](3)将所述透析液通过1KD超滤膜，收集截留液，得到细胞因子浓缩液。
[0025]进一步，所述滤膜的直径为0.22μm。
[0026]进一步，所述步骤四中的高产干细胞细胞因子的制备方法包括：
[0027](1)获取细胞因子浓缩液；
[0028](2)向所述细胞因子浓缩液中加入0.1～0.5倍质量份数的冻干保护剂；
[0029](3)将含冻干保护剂的细胞因子浓缩液进行冻干处理，得到包含有含量增多的干细胞因子冻干粉。
[0030]进一步，所述冻干保护剂按照质量份数计，由抗坏血酸30～50份、人白蛋白20～30份、甘氨酸15～20份、精氨酸10～15份、柠檬酸钠5～10份以及余量灭菌去离子水组成。
[0031]结合上述的所有技术方案，本专利技术所具备的优点及积极效果为：本专利技术提供的提高干细胞细胞因子产量的方法简单高效，使用氙灯照射培养提高了干细胞因子的总产量；将细胞因子冻干单独保存，为干细胞因子提供生存环境，维持干细胞因子活性。另外，本专利技术将制备的含有细胞因子的上清液的活性成分为人干细胞因子，对糖尿病皮肤创伤修复就有很好的愈合作用，应用范围广泛。
附图说明
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对本专利技术实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0033]图1是本专利技术实施例提供的提高干细胞细胞因子产量的方法流程图。
[0034]图2是本专利技术实施例提供的干细胞的培养方法流程图。
[0035]图3是本专利技术实施例提供的细胞培养上清液的获取方法流程图。
[0036]图4是本专利技术实施例提供的细胞培养上清液的预处理方法流程图。
[0037]图5是本专利技术实施例提供的高产干细胞细胞因子的制备方法流程图。
具体实施方式
[0038]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0039]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种提高干细胞细胞因子产量的方法，下面结合附图对本专利技术作详细的描述。
[0040]如图1所示，本专利技术实施例提供的提高干细胞细胞因子产量的方法包括以下步骤：
[0041]S101，进行干细胞的培养：将脂肪干细胞接种于含有脂肪干细胞无血清完全培养基的T25培养瓶进行培养，待细胞浓度融合后，洗涤，再加入DMEM
‑
HG/F12培养基和胎牛血清完全培养基继续进行培养；
[0042]S102，进行细胞培养上清液的获取：当干细胞融合度达到75～85％时，对细胞培养液用氙灯进行照射，再次进行培养，收集干细胞因子的上清液；
[0043]S103，进行细胞培养上清液的预处理：将获取的干细胞因子的上清液用滤膜过滤后，依次通过50KD超滤膜和1KD超滤膜，得到细胞因子浓缩液；
[0044]S104，进行高产干细胞细胞因子的制备：向所述细胞因子浓缩液中加入冻干保护剂后进行冻干处理，得到包含有含量增多的干细胞因子冻干粉。
[0045]如图2所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高干细胞细胞因子产量的方法，其特征在于，所述提高干细胞细胞因子产量的方法包括以下步骤：步骤一，进行干细胞的培养：将脂肪干细胞接种于含有脂肪干细胞无血清完全培养基的T25培养瓶进行培养，待细胞浓度融合后，洗涤，再加入DMEM
‑
HG/F12培养基和胎牛血清完全培养基继续进行培养；步骤二，进行细胞培养上清液的获取：当干细胞融合度达到75～85％时，对细胞培养液用氙灯进行照射，再次进行培养，收集干细胞因子的上清液；步骤三，进行细胞培养上清液的预处理：将获取的干细胞因子的上清液用滤膜过滤后，依次通过50KD超滤膜和1KD超滤膜，得到细胞因子浓缩液；步骤四，进行高产干细胞细胞因子的制备：向所述细胞因子浓缩液中加入冻干保护剂后进行冻干处理，得到包含有含量增多的干细胞因子冻干粉。2.如权利要求1所述提高干细胞细胞因子产量的方法，其特征在于，所述步骤一中的干细胞的培养方法包括：(1)取脂肪干细胞，并将所述脂肪干细胞接种于T25培养瓶中；(2)向所述T25培养瓶中加入脂肪干细胞无血清完全培养基进行培养；(3)待细胞浓度融合至80％后，吸弃原来的培养基，用PBS洗涤2～3次后，再加入DMEM
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HG/F12培养基和胎牛血清完全培养基继续进行培养。3.如权利要求2所述提高干细胞细胞因子产量的方法，其特征在于，所述培养条件为37℃、5～10％CO2、3～5％O2，培养24～48h。4.如权利要求2所述提高干细胞细胞因子产量的方法，其特征在于，所述DMEM
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HG/F12培养基为终浓度70ng/mL多肽的DMEM

【专利技术属性】
技术研发人员：戚凤春，田清影，刘玉东，崔燕平，王文忠，于淼，
申请(专利权)人：吉林壹众生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：