一种香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于生物材料技术领域，具体涉及一种香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒及其制备方法与应用。本发明专利技术以熊果酸和香菇多糖为原料，利用亲水性载体香菇多糖上存在大量的羟基通过氢键作用力与疏水性药物熊果酸进行自组装，形成的类球形纳米复合物。本发明专利技术所制备的LNT

【技术实现步骤摘要】
一种香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物材料
，具体涉及一种香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]近年来研究发现，某些化疗药物可以诱发肿瘤细胞免疫原性死亡，增强肿瘤细胞的免疫原性，释放肿瘤相关抗原、“危险信号分子”以及促炎因子等，引发机体内在免疫反应，从而增强对肿瘤细胞的免疫杀伤效果。这种由化疗诱导的“原位疫苗”虽然能够增加肿瘤相关抗原负荷，但仅能短暂引起机体一定程度地系统性免疫应答，并且存在着诱导免疫原性死亡释放抗原不充分、抗原提呈效率低等问题，最终导致这种免疫效应不能发挥最佳疗效。
[0003]研究表明，将化疗与免疫疗法联合，例如免疫检查点抑制剂，可发挥协同抗肿瘤免疫效果。但目前这种联合治疗方案的获益人群仍然较少，其重要原因是化疗自身存在骨髓抑制、治疗靶点单一、毒副作用大等各方面的不足，在与免疫疗法联合后，对于人体的毒副作用可能增加，最终削弱这种联合策略的治疗有效性。中医药治疗疾病，具有多成分、多靶点、多途径、注重整体调节和毒副作用小等特点，因此在肿瘤学研究领域受到越来越多的关注。
[0004]熊果酸(Ursolic acid，简称UA)是白花蛇舌草、半枝莲、败酱草、女贞子等中药的主要活性成分之一。其对多种肿瘤细胞均具有明显的毒性作用，可通过抗增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期、抗血管生成等途径发挥抗肿瘤作用。而有些通路的激活与免疫原性死亡特征指标，如钙网蛋白(CRT)暴露、ATP释放、高迁移率族蛋白1(HMGB1)等的释放相关。所以我们推测熊果酸可以诱导肿瘤细胞发生免疫原性死亡。但是UA存在着水溶性差、靶向差、生物利用度低等问题，极大地限制了其在研究及临床应用上的进一步发展。纳米载药系统的出现，为UA在体内的药物递送提供了新策略。然而，现在使用的纳米载体大多合成方法繁琐，仍然无法充分拓展 UA的应用。
[0005]香菇多糖(Lentinan，简称LNT)是从香姑子实体中提取出的一种β
‑
1,3
‑
D
‑
葡聚糖，并含β
‑
1,6
‑
D
‑
葡萄糖残基支链的水溶性多糖，在临床上常作为疫苗的佐剂及癌症辅助用药。据报道，LNT可以通过TLR4、TLR2/6、Dectin
‑
1等免疫细胞上的特异性模式识别受体识别，经过相应的级联反应，激活转录因子NF
‑
κB，促进APC的成熟，提高其抗原呈递功能，并释放TNF
‑
α、IFN
‑
γ、IL
‑
12等细胞因子发挥免疫调节作用。 LNT同时也是天然的高分子材料，具有高度稳定性和亲水性、良好的生物相容性以及生物可降解性等特点，这些优点都使LNT在生物材料方面具有非常广泛的应用前景。因此，LNT作为载体基质材料在纳米复合物材料的制备中日渐受到关注。

技术实现思路

[0006]为了提高熊果酸在水中溶解度，本专利技术利用亲水性载体香菇多糖上存在大量的羟
基可通过氢键作用力与疏水性药物熊果酸进行自组装的原理，合成了结构稳定的纳米颗粒，从而开发了一种用于抗肿瘤免疫治疗的自组装纳米药物LNT
‑
UA，实现熊果酸和香菇多糖在抗肿瘤免疫作用上的协同效应。
[0007]本专利技术目的是提供一种用于肿瘤免疫治疗的自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，可引起肿瘤细胞免疫原性死亡并改善免疫抑制微环境，充分调动机体内在的抗肿瘤免疫反应，实现肿瘤协同增效治疗。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0009]一种香菇多糖/熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其是以熊果酸和香菇多糖为原料，利用亲水性载体香菇多糖上存在大量的羟基通过氢键作用力与疏水性药物熊果酸进行自组装形成的类球形纳米复合物。
[0010]本专利技术为了提高熊果酸的水溶性，利用纳米沉淀法，使两种药物进行自组装，将具有生物活性的香菇多糖包裹熊果酸外部，形成纳米颗粒LNT
‑
UA，该纳米颗粒具有良好的水溶性及多种生物活性。
[0011]优选的，所述纳米颗粒尺寸在40
‑
100nm，具有良好的水溶性，可用于抗肿瘤免疫，生物利用度高。
[0012]本专利技术还提供了上述香菇多糖/熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA的制备方法。
[0013]具体的，所述香菇多糖/熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA的制备方法包括以下步骤：
[0014]将香菇多糖和熊果酸溶解于有机溶剂中得到混合溶液，然后在搅拌下，将得到的混合溶液逐滴加入超纯水中，充分反应，然后去除有机溶剂，得到纳米颗粒LNT
‑
UA。
[0015]优选的，所述有机溶剂为二甲基亚砜或者N,N
’‑
二甲基甲酰胺。
[0016]优选的，所述制备方法中采用透析法去除有机溶剂。
[0017]优选的，步骤中香菇多糖和熊果酸的质量比为：(1～2)：(0.5～1)，更优选为2:1。
[0018]优选的，所述纳米颗粒的粒径范围为40～100nm。
[0019]优选的，所述纳米颗粒的红外光谱特征具有主要归因于O—H、C—H和C＝O的伸缩振动分别在3407cm
‑1、2928cm
‑1、1690cm
‑1处均出现的吸收峰，和归因于糖苷键(C—OH和C—O—C)伸缩振动在1045cm
‑1处出现特征峰。
[0020]优选的，所述纳米颗粒中熊果酸的载药量为55.94
±
1.02wt％，包封率为40.28
±ꢀ
0.73wt％。
[0021]本专利技术所得纳米颗粒LNT
‑
UA，与熊果酸单药相比，具有更好的溶解性。
[0022]本专利技术还涉及上述香菇多糖/熊果酸自组装LNT
‑
UA纳米颗粒在制备抗肿瘤免疫药物中的应用。
[0023]进一步的，所述抗肿瘤免疫药物为LNT
‑
UA纳米颗粒配制成的溶液，其中UA 的浓度≥16μmol/L。
[0024]本专利技术所述的LNT
‑
UA纳米颗粒有更显著的肿瘤细胞杀伤效果，并能诱发肿瘤细胞免疫原性死亡，有效地增强肿瘤的免疫原性，增加肿瘤相关抗原负荷，激活体内的有效抗肿瘤免疫反应。所述LNT
‑
UA的溶液在其UA浓度≥16μmol/L时，对CT26 细胞表现出细胞毒性，同时随着UA浓度的增加，细胞毒性逐渐增强。与游离的UA 相比，LNT
‑
UA对CT26细胞具有更强的细胞毒性。
[0025]本专利技术中所述的LNT
‑
UA纳米颗粒可刺激抗原提呈细胞成熟，调控免疫抑制微环
境，促使M0巨噬细胞向M1巨噬细胞的极化，充分调动机体内在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其特征在于，所述纳米颗粒LNT
‑
UA是以熊果酸和香菇多糖为原料，利用亲水性载体香菇多糖上存在大量的羟基通过氢键作用力与疏水性药物熊果酸进行自组装，所形成的类球形纳米复合物。2.根据权利要求1所述的香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其特征在于，所述纳米颗粒通过以下方法制备得到：将香菇多糖和熊果酸溶解于有机溶剂中得到混合溶液，然后在搅拌下，将得到的混合溶液逐滴加入超纯水中，充分反应后去除有机溶剂，得到纳米颗粒LNT
‑
UA。3.根据权利要求2所述的香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其特征在于，所述有机溶剂为二甲基亚砜或N,N
’‑
二甲基甲酰胺。4.根据权利要求2所述的香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其特征在于，制备过程中采用透析法去除有机溶剂。5.根据权利要求2所述的香菇多糖熊果酸自组装纳米颗粒LNT
‑
UA，其特征在于，步骤中香菇多糖和熊果酸的质量比为：(1～2)：(0.5～1)。6.根据权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴名，刘小龙，曾永毅，毛倩倩，
申请(专利权)人：福建医科大学孟超肝胆医院福州市传染病医院，
类型：发明
国别省市：