细胞周期检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型的细胞周期检测试剂盒及其应用。所述试剂盒至少包含磷酸化组蛋白H3检测试剂和核酸荧光染料。本发明专利技术通过引入M期细胞特殊标记以有效区分G2和M期细胞，实现对四个细胞周期的全面检测。进一步结合流式细胞术检测悬浮细胞的细胞增殖周期，从而能够准确反映出细胞增殖周期的全部信息。本发明专利技术提供的细胞周期检测方法具有操作简单、高效、试剂廉价易得等优点，可以对大规模细胞样本进行检测，应用前景广阔。应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
细胞周期检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞生物学领域，具体地说，涉及细胞周期检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]细胞增殖是维持生命的基础，是一个非常复杂精密调控的生理过程。根据增殖过程中的核酸、蛋白质及细胞整体变化特征，将细胞的增殖周期分为G1、S、G2和M四个周期。
[0003]很多遗传病、感染性疾病以及肿瘤等疾病的发生发展都与细胞的增殖周期异常直接相关，因此细胞增殖周期的检测是判断细胞病理机制的重要手段，也是临床和科研工作中常用的实验方法。
[0004]目前国内外细胞增殖周期的检测方法主要有两类，第一类是直接用核酸试剂(如PI,DAPI,Hoechst等)染细胞DNA，根据不同细胞周期细胞DNA含量不同来对细胞周期进行分析。该方法操作简单，但实验结果分析困难，容易产生较多误差，尤其是对S和M期细胞的分析很不可靠。目前只适合用于一些药物初筛。
[0005]第二类是在第一类核酸试剂的基础上，用核苷酸类似物(如EdU)标记新合成的DNA，用以区分S期细胞。由于S期细胞可以被标记信号放大显示，因此该方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.细胞周期检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包含磷酸化组蛋白H3检测试剂和核酸荧光染料。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含BrdU溶液及其对应的荧光标记抗体溶液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸化组蛋白H3检测试剂为抗磷酸化组蛋白H3抗体，优选p
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H3
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Alexa Fluro 647；和/或所述核酸荧光染料选自DAPI、PI、Hoechst。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，BrdU对应的荧光标记抗体为抗BrdU
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FITC。5.根据权利要求1
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4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包含细胞固定剂和细胞破膜剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞固定剂为2％
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4％多聚甲醛；和/或所述细胞破膜剂中含有Triton X
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100。7.权利要求1
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6任一项所述试剂盒在细胞周期检测中的应用，所述应用为非诊断目的。8.非诊断目的细胞周期检测方法，其特征在于，包括：(1)将细胞接种到含有BrdU的细胞培养基中进行培养；(2)收获细胞，洗涤后，用细胞固定剂固定细胞；(3)固定后的细胞用细胞破膜剂处理；(4)将破膜处理后的细胞与磷酸化组蛋白H3检测试剂和BrdU对应的荧光标记抗体共同孵育；(5)洗涤并重悬细胞，加入核酸荧光染料进行染色，染色后洗涤细胞，将细胞重悬后进行流式细胞检测；其中，细胞固定剂、细胞破膜剂、磷酸化组蛋白H3检测试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊仕秋，
申请(专利权)人：武汉市鼎华双雄生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：