一种新型冠状病毒2019-nCoV快检试纸条制备方法技术

本发明专利技术属于医学免疫检测技术领域，具体提供一种新型冠状病毒2019

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒2019
‑
nCoV快检试纸条制备方法


[0001]本专利技术属于医学免疫检测
，具体提供一种新型冠状病毒2019
‑
nCoV快检试纸条制备方法。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒2019
‑
nCoV疫情已在全世界蔓延，对我国及全球民生和经济造成极大影响。如何快速筛查诊断2019
‑
nCoV新型冠状病毒显得极为重要，因此，其实验室检测技术备受广泛关注。
[0003]目前已涌现出多种关于新型冠状病毒2019
‑
nCoV检测方法，如，病毒核酸检测，主要包括实时荧光定量PCR和快速多重PCR方法。但病毒核酸检测结果受到疾病发展过程、标本采集、标本保存与运输、核酸提取、扩增体系、检测操作环境以及人员操作等因素的影响，容易出现假阴性结果问题，且PCR法需要价格昂贵的PCR仪器，耗费时间长，不适于2019
‑
nCoV的快速诊断。
[0004]因此，寻求一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测方法是迫切需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]针对上述的技术缺陷和应用时的不利情况，本专利技术提供了一种新冠状病毒 2019
‑
nCoV快检试纸条制备方法，通过偶联新冠状病毒2019
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nCoV S1
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RBD抗体和 ZnCdSe/ZnS量子点制备量子点荧光标记物，经优化反应体系和条件，制备了一种新冠状病毒2019
‑
nCoV快检试纸条，该试纸条操作简单、检测快速、灵敏、特异性强、结果清晰易于判断，不需昂贵的仪器设备，适用于实验室及快检现场操作。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]步骤1：羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点与2019
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nCOV S1
‑
RBD单克隆抗体偶联；
[0008]步骤2：将步骤1获得的偶联有羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点的2019
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nCOV S1
‑
RBD 单克隆抗体均匀喷覆于经过处理的硝酸纤维素膜上，室温下晾干待用；
[0009]步骤3：PBS缓冲液稀释2019
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nCoV S1
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RBD多克隆抗体；
[0010]步骤4：均匀喷在硝酸纤维素膜上，形成检测带T；
[0011]步骤5：PBS缓冲液稀释羊抗鼠IgG二抗；
[0012]步骤6：将步骤5制备的稀释液均匀喷在硝酸纤维素膜上，形成质控带C，T带和C带间隔5mm
‑
10mm；
[0013]步骤7：将步骤4和步骤6制作的含检测带T和质控带C的硝酸纤维膜垫室温下晾干待用；
[0014]步骤8：在粘性PVC底板上依次粘帖样品垫、量子点标记的2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体的量子点标记垫、标有检测带T和质控带C的硝酸纤维素膜、吸水纸。黏贴的方法为，样品垫(1)左端对齐PVC底板(7)的左端，样品垫(1)的右端压在量子点标记垫(2)的左端，量
子点标记垫(2)的右端压在标记有检测带T(5)和质控带C (6)的硝酸纤维素膜左端，吸水纸(4)压在标记有检测带T和质控带C的硝酸纤维 3膜右端。
[0015]步骤9：用试纸切刀切割成3cm
‑
5cm试纸。
[0016]步骤10：干燥后密封保存。
[0017]进一步的，上述步骤1中，羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点使用终浓度为2μM.
[0018]进一步的，上述步骤1中EDC(1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐)和NHS (N
‑
羟基琥珀酰亚胺)混合物的使用浓度为1mg/mL，配比为3∶2；
[0019]进一步的，上述步骤2中基底硝酸纤维素膜在被喷涂之前经过质量浓度为0.5％的 Tween
‑
20和浓度为10mM的PBS浸泡处理，其pH值为7.4。
[0020]进一步的，上述步骤2中2019
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nCoV S1
‑
RBD多克隆抗体为自制的多克隆抗体，抗体包覆浓度为0.1mg/mL
‑
2mg/ml，更进一步的为0.5mg/mL。
[0021]进一步的，上述步骤5中羊抗鼠IgG二抗包覆浓度为0.5mg/mL
‑
5mg/mL，进一步的为 1mg/mL。
[0022]进一步的，上述步骤8中的样品垫为1％BSA的TBS，PH9.0处理过的吸水纸。
[0023]有益效果：本专利技术专利涉及一种新型冠状病毒2019
‑
nCoV快检试纸条制备方法，该快检试纸条操作简单、检测快速、灵敏、特异性强、结果清晰易于判断，不需昂贵的仪器设备，适用于实验室及快检现场操作。
附图说明
[0024]图1新型冠状病毒2019
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nCoV快检试纸条制作流程图。
[0025]图2新型冠状病毒2019
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nCoV快检试纸条结构示意图
[0026]其中，1、样品垫，2、量子点标记垫，3、硝酸纤维素膜，4、吸水纸，5、检测带T，6、质控带C，7、PVC底板。
具体实施方式
[0027]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清晰、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1
[0029]步骤1：使用终浓度为2μM羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点与2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体(使用浓度为0.1mg/ml)偶联。
[0030]步骤2：获得的偶联有羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点的2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体均匀喷覆于硝酸纤维素膜上，制成量子点标记垫1，室温下晾干待用。
[0031]步骤3：将中基底硝酸纤维素膜在被喷涂之前经过质量浓度为0.5％的Tween
‑
20和浓度为10mM的PBS浸泡处理，其pH值为7.4。
[0032]步骤4：取2019
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nCoV S1
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RBD多克隆抗体为自制的多克隆抗体，抗体包覆浓度为 0.5mg/mL，使用PBS缓冲液稀释2019
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nCoV S1
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RBD多克隆抗体，均匀喷在硝酸纤维素膜3上，形成5检测带T。
[0033]步骤5：PBS缓冲液稀释羊抗鼠IgG二抗至1mg/mL。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒2019
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nCoV快检试纸条制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)偶联抗体制备：羧基化水溶性ZnCdSe/ZnS量子点与2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体偶联；(2)量子点荧光标记垫处理：将偶联抗体均匀喷覆于经过处理的硝酸纤维素膜上，室温下晾干待用；(3)硝酸纤维素膜处理：PBS缓冲液稀释2019
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nCoV S1
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RBD多克隆抗体，均匀喷在硝酸纤维素膜上，形成检测带T。PBS缓冲液稀释羊抗鼠IgG二抗，均匀喷在硝酸纤维素膜上，形成质控带C；检测带T和质控带C间隔5mm
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10mm；室温下晾干待用；(4)在粘性PVC底板上依次粘帖样品垫、量子点标记的2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体的量子点标记垫、标有检测带T和质控带C的硝酸纤维素膜、吸水纸；在粘性PVC底板上依次粘帖样品垫、量子点标记的2019
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nCOV S1
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RBD单克隆抗体的量子点标记垫、标有检测带T和质控带C的硝酸纤维素膜、吸水纸。粘帖的方法为，样品垫左端...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋薇，施祖灏，王春梅，孙兆增，富玉，
申请(专利权)人：谱尼测试集团江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：