一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统的构建及其应用技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统及其的构建方法和应用。系统载体含Cas9失活蛋白、转录激活效应蛋白VP64、抗性选择标记基因、至少一个gRNA支架序列和增强转录激活的特异序列(SunTag序列)。所述的用于微拟球藻基因转录激活CRISPRa载体在基因转化中的应用。本发明专利技术为微拟球藻基因功能研究提供了一种新的模型和可行性方法。可行性方法。

【技术实现步骤摘要】
一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统的构建及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统及其的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]海洋拟球藻微拟球藻是一种单细胞光合微藻，广泛分布于海洋、湖泊、沼泽等不同水环境水域。由于它的油脂含量高、较好的环境适应性及适于烟道气培养等特性，在微藻生物能源、微藻功能食品、微藻饲料等领域备受青睐，是“蓝色粮仓”的重要生物资源之一。随着近些年合成生物学的兴起，微拟球藻已经崛起为新一代的合成生物学光合底盘细胞之一，发展到与模式藻株如莱茵衣藻、小球藻等同等重要的位置。截至目前，已有多株微拟球藻的全基因组被测序，基本涵盖了本属内的已知代表物种，包括N.oceanica IMET1，N.oceanica CCMP1779，N.oceanica CCMP526，N.oceanica CCMP526等。尽管对其开展了全基因组测序，但是它们基因绝大多数(占50％以上)都是未知功能的，对于代谢过程的理解仍然是一个“黑箱”。这就需要我们发展遗传转化方法和基因操作工具去揭开本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统，其特征在于：系统载体含Cas9失活蛋白、转录激活效应蛋白VP64、抗性选择标记基因、至少一个gRNA支架序列和增强转录激活的特异序列(SunTag序列)。2.按权利要求1所述系统，其特征在于：所述系统以微拟球藻用Cas9表达载体(pNOC-ARS-CRISPR)作为骨架，其含有内源启动子和终止子，其中，启动子为Ribi双向启动子和LDSP启动子，终止子为LDSP终止子。3.按权利要求1或2所述系统，其特征在于：所述骨架载体Ribi双向启动子一端依次连接dCas9蛋白、增强转录激活的特异序列和转录激活效应蛋白；另一端连接gRNA支架序列，其驱动gRNA表达；潮霉素抗性基因位于骨架载体LDSP启动子下游。4.按权利要求3所述系统，其特征在于：所述载体中含至少一个gRNA支架序列，多个gRNA支架序列由多个靶基因设计的gRNA串联形成；所述每个gRNA支架序列为针对特定靶基因设计的引导序列；其中，特定靶基因为与性状相关的候选基因。5.按权利要求3所述系统，其特征在于：所述Cas9失活蛋白、转录激活效应蛋白、抗性选择标记基因、gRNA支架序列和增强转录激活的特异序列分别为经微拟球藻密码子优化后的相应基因序列；其中，密码子优化的dCas9蛋白的碱基为SEQ ID NO:1中从6279bp到103...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏力，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：