同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的引物和方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物，包括PCV2F：5

【技术实现步骤摘要】
同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的引物和方法


[0001]本专利技术涉及猪圆环病毒和细小病毒检测
，更具体地说是涉及同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物和方法。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是一类单股环状、无囊膜的DNA病毒，其基因组大小约1.7～2.0kb，包含两个主要的开放阅读框(ORF)，涉及编码病毒的复制酶蛋白Rep及衣壳蛋白(capsid protein,Cap)。PCV1首次被发现于1974年，当时被认为是细胞培养的污染物，无致病性。而PCV2被认为是引起猪圆环病毒病(PCVD)和猪圆环相关疾病(PCVAD)的主要病原体，主要包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、猪繁殖障碍及猪呼吸道疾病综合征(PRDC)，严重威胁猪群健康。
[0003]猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)是一类单股线性DNA病毒，无囊膜，基因组大小约4～6kb，其同样包含两个主要的ORF，ORF1编码病毒的非结构蛋白(NSP)，ORF2编码病毒的Cap蛋白。1965年，PPV1首次分离于德国，被认为是引起世界范围内猪繁殖障碍的主要原因之一，感染后可造成猪的SMEDI(stillbirth,mummification,embryonic death and infertility,SMEDI),即母猪产死胎、木乃伊胎、胚胎发育不良和死亡及母猪不孕等。而PPV2～7是通过宏基因组测序发现的新型PPV。目前已有的研究均表明PPV2是PRDC潜在的致病因子。
[0004]PRDC是由多种因素共同引起的呼吸道疾病，主要见于1至3个月大的猪。而PCV2是其最为常见的致病原之一，通常与多种致病原混合感染共同引起PRDC，其中便包括PPV2。
[0005]目前有针对PCV2及PPV2单一的PCR诊断方法。多重PCR检测方法能够在一个反应体系中一次性对两种或多种病原进行PCR扩增，从而达到节约检测时间及检测成本的目的。但目前并无可以同时对PCV2和PPV2两种病毒进行检测的双重PCR检测方法。因此，迫切需要发展快速，准确的猪圆环病毒2型与猪细小病毒2型双重PCR检测方法，为两者在临床上的混合感染提供快速检测的技术手段。
[0006]因此，如何提供一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物和检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供了一种可以对猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型同时进行检测的引物和方法，为两者在临床上的混合感染提供快速检测的技术手段
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物，其特征在于，包括下述SEQ NO.1～SEQ ID NO.4所示的序列：
[0010]PCV2F：5
’‑
GCTAATTTTGCAGACCCGGAA
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；
[0011]PCV2R：5
’‑
CCACTCCCGTTACTTCACACC
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示；
[0012]PPV2F：5
’‑
AGCCCTAAGACTGACTACAAGC
‑3’
，如SEQ ID NO.3所示；
[0013]PPV2R：5
’‑
TCATGCACGTTTGTCTCGTTG
‑3’
，如SEQ ID NO.4所示。
[0014]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护上述同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物在制备检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型试剂盒中的应用。
[0015]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的试剂盒，包括：SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所述的引物；其中，SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2引物各0.5μL，SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4引物各1μL。
[0016]作为上述技术方案优选的技术方案，所述试剂盒还包括：
[0017]2×
Taq MasterMix
ꢀꢀꢀꢀ
10μL
[0018]模板DNA
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2μL
[0019]ddH2O
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
补充至20μL。
[0020]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的方法，对待检测样本以上述所述试剂盒进行扩增，猪圆环病毒2型的扩增产物的大小为666bp，猪细小病毒2型的扩增产物的大小为254bp，根据产物大小不同进行区分。
[0021]作为上述技术方案优选的技术方案，扩增的反应程序为：
[0022][0023]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物、方法和应用，其中，SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示的引物序列为检测猪圆环病毒2型的引物，检测灵敏度可达到100copies/μL，SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示的引物序列为猪细小病毒2型的检测引物，检测灵敏度可达到10copies/μL，对于单个样本的检测时间为1.5h，可同时进行大批量的样本检测，具有良好的特异性、敏感性和稳定性，可以实现对猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型快速检测。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0025]图1附图为猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型阳性病料单项PCR和双重PCR扩增结果，其中M:DNA分子质量标准；1：猪圆环病毒2型阳性病料扩增结果；2：猪细小病毒2型阳性病料扩增结果；3：猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型双阳性病料扩增结果；4：阴性对照；
[0026]图2附图为双重PCR检测方法的敏感性试验，其中M:DNA分子质量标准；1：1.0
×
10
10
copies/μL的混合标准品；2：1.0
×
109copies/μL的混合标准品；3：1.0
×
108copies/μL的混合标准品；4：1.0
×
107copies/μL的混合标准品；5：1.0
×
106copies/μL的混合标准品；6：1.0
×
105copie本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物，其特征在于，包括下述SEQ NO.1～SEQ ID NO.4所示的序列：PCV2F：5
’‑
GCTAATTTTGCAGACCCGGAA
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；PCV2R：5
’‑
CCACTCCCGTTACTTCACACC
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示；PPV2F：5
’‑
AGCCCTAAGACTGACTACAAGC
‑3’
，如SEQ ID NO.3所示；PPV2R：5
’‑
TCATGCACGTTTGTCTCGTTG
‑3’
，如SEQ ID NO.4所示。2.权利要求1所述的一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物在制备检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型试剂盒中的应用。3.一种同时检测猪圆环...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫杰，戴爱玲，黄喜荣，杨小燕，薛少华，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：