一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒及应用，本发明专利技术的虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒能够对样品中登革病毒、寨卡病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒和疟原虫进行检测，有助于虫媒传染性疾病的诊断与治疗。采用本发明专利技术的检测试剂盒，一次可以鉴别多种病毒，大大减少了工作量，提高了检测效率。提高了检测效率。提高了检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒及应用


[0001]本专利技术具体涉及一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]根据WHO统计，病媒传播的疾病占全部传染病的17％以上，每年导致70多万人死亡。这些疾病可能由寄生虫、细菌或病毒引起。通过媒介传播的病毒性疾病包括疟疾、登革热、基孔肯雅热、寨卡病毒热、黄热病、西尼罗河热、日本脑炎(均由蚊子传播)、蜱传脑炎(由蜱虫传播)等。
[0003]疟疾是蚊传播的一种寄生虫感染，大多数死亡发生在五岁以下的儿童中。登革热是由伊蚊传播的最普遍的病毒感染。这些疾病的负担在热带和亚热带地区最高。自2014年以来，登革热、疟疾、基孔肯雅热、黄热病和寨卡病毒导致的重大疫情已经影响了许多国家的人口，夺走了生命，并使卫生系统不堪重负。其他一些疾病，如基孔肯雅热、利什曼病和淋巴丝虫病等会造成长期痛苦、终生处于病态、残疾且有时会导致污名化。
[0004]目前，已经开发出针对单一种类病毒进行检测的试剂盒，但是这种单一检测方式较为麻烦，检测效率较低。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒及应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种用于检测登革热、寨卡热、黄热病、基孔肯雅热、西尼罗热和疟疾的引物及探针，所述引物和探针包括：
[0008]检测登革病毒的引物及探针：
[0009]第一上游引物：5
’‑/>GGACTAGAGGTTAGAGGAGAC
‑3’
[0010]第一下游引物：5
’‑
TTGTAGAGACAGCAGGATC
‑3’
[0011]第一探针：5
’‑
FAM
‑
TGGTCTTTCCCAGCGTCAATATGC
‑
BHQ1
‑3’
[0012]检测寨卡病毒的引物及探针：
[0013]第二上游引物：5
’‑
CCGCTGCCCAACACAAG
‑3’
[0014]第二下游引物：5
’‑
CCACTAACGTTCTTTTGCAGACAT
‑3’
[0015]第二探针：
[0016]5’‑
VIC
‑
AGCCTACCTTGACAAGCAGTCAGACACTCAA
‑
BHQ1
‑3’
[0017]检测黄热病毒的引物及探针：
[0018]第三上游引物：5
’‑
CTAGGCAATAAACACATTTGGATTA
‑3’
[0019]第三下游引物：5
’‑
CATATTGACGCCCAGGGT
‑3’
[0020]第三探针：5
’‑
ROX
‑
TCTGGTCARTTCTCTGCTAATCGCTCA
‑
BHQ2
‑3’
[0021]检测基孔肯雅病毒的引物及探针：
[0022]第四上游引物：5
’‑
AAGCTYCGCGTCCTTTACCAAG
‑3’
[0023]第四下游引物：5
’‑
CCAAATTGTCCYGGTCTTCCT
‑3’
[0024]第四探针：5
’‑
FAM
‑
CCAATGTCTTCAGCCTGGACACCTTT
‑
BHQ1
‑3’
[0025]检测西尼罗病毒的引物及探针：
[0026]第五上游引物：5
’‑
CATTTGCTCCGCTGTCCCTGTGAA
‑3’
[0027]第五下游引物：5
’‑
CCACTCTCCTCCTGCATGGATGGAC
‑3’
[0028]第五探针：5
’‑
VIC
‑
TGGGTCCCTACCGGAAGAACCACGT
‑
BHQ1
‑3’
[0029]检测疟原虫的引物及探针：
[0030]第六上游引物：5
’‑
CAAGCGAGAAAGTTAAAAGA
‑3’
[0031]第六下游引物：5
’‑
GAGCTATTAATCTGTCAATCC
‑3’
[0032]第六探针：5
’‑
ROX
‑
CGTGGAGCTTGCGGCTTAAT
‑
BHQ2
‑3’
。
[0033]进一步地，所述引物和探针还包括内参引物及探针，内参引物及探针为：
[0034]第七上游引物：5
’‑
AGCCTGTTATTTTGTCCTA
‑3’
[0035]第七下游引物：5
’‑
ATCCCAATTCATACGGTAG
‑3’
[0036]第七探针：5
’‑
Cy5
‑
TGGTTCCTTCCTTCTGGCTTGTC
‑
BHQ2
‑3’
。
[0037]一种虫媒传染性疾病病原体检测试剂盒，包括以上所述的引物及探针。
[0038]进一步地，所述试剂盒还包括PCR检测混合液。
[0039]进一步地，所述PCR检测混合液包括Tris
‑
HCl,KCl,MgCl2,NH4Cl,CA
‑
63,甘油，DMSO，dNTP，UDG酶，MMLV，Taq DNA聚合酶。
[0040]在一些优选的方式中，所述PCR检测混合液包括10～50mM Tris
‑
HCl,10～50mM KCl，2～5mM MgCl2,3～10mM NH4Cl,CA
‑
63 0.05％～1％,甘油3％～10％，DMSO 3％～10％，dNTP各200～500nM，UDG酶2～10U，2～10UMMLV，Taq DNA聚合酶1～5U。
[0041]进一步地，将引物与探针加入PCR检测混合液后，各个引物浓度分别为100～500nM，各个探针浓度分别为50～300nM。所述引物及探针为以上所述的引物及探针。
[0042]进一步地，试剂盒还包括阳性对照品和/或阴性对照品。所述阳性对照品包括含有目的扩增序列的登革病毒质粒、含有目的扩增序列的寨卡病毒质粒、含有目的扩增序列的基孔肯雅病毒质粒、含有目的扩增序列的西尼罗病毒质粒和含有目的扩增序列的疟原虫质粒，所述阴性对照品为去RNA酶水。
[0043]以上所述的用于检测登革热、寨卡热、黄热病、基孔肯雅热、西尼罗热和疟疾的引物及探针在制备虫媒传染性疾病检测试剂中的应用。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测登革热、寨卡热、黄热病、基孔肯雅热、西尼罗热和疟疾的引物及探针，其特征是，所述引物和探针包括：检测登革病毒的引物及探针：第一上游引物：5
’‑
GGACTAGAGGTTAGAGGAGAC
‑3’
第一下游引物：5
’‑
TTGTAGAGACAGCAGGATC
‑3’
第一探针：5
’‑
FAM
‑
TGGTCTTTCCCAGCGTCAATATGC
‑
BHQ1
‑3’
检测寨卡病毒的引物及探针：第二上游引物：5
’‑
CCGCTGCCCAACACAAG
‑3’
第二下游引物：5
’‑
CCACTAACGTTCTTTTGCAGACAT
‑3’
第二探针：5
’‑
VIC
‑
AGCCTACCTTGACAAGCAGTCAGACACTCAA
‑
BHQ1
‑3’
检测黄热病毒的引物及探针：第三上游引物：5
’‑
CTAGGCAATAAACACATTTGGATTA
‑3’
第三下游引物：5
’‑
CATATTGACGCCCAGGGT
‑3’
第三探针：5
’‑
ROX
‑
TCTGGTCARTTCTCTGCTAATCGCTCA
‑
BHQ2
‑3’
检测基孔肯雅病毒的引物及探针：第四上游引物：5
’‑
AAGCTYCGCGTCCTTTACCAAG
‑3’
第四下游引物：5
’‑
CCAAATTGTCCYGGTCTTCCT
‑3’
第四探针：5
’‑
FAM
‑
CCAATGTCTTCAGCCTGGACACCTTT
‑
BHQ1
‑3’
检测西尼罗病毒的引物及探针：第五上游引物：5
’‑
CATTTGCTCCGCTGTCCCTGTGAA
‑3’
第五下游引物：5
’‑
CCACTCTCCTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俊，
申请(专利权)人：赵俊，
类型：发明
国别省市：