一种基于核酶-CRISPR的食品铅污染检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于核酶

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酶
‑
CRISPR的食品铅污染检测方法


[0001]本专利技术涉及食品重金属污染检测领域，具体涉及一种基于核酶
‑
CRISPR的食品铅污染检测方法。

技术介绍

[0002]食品安全问题关乎公共卫生安全和人民生活质量。重金属污染问题是食品安全问题的重要诱因。铅离子由于其半衰期长、流动性强的特征，对人体健康有着潜在的长期威胁。研究表明，铅对人体中枢神经系统、血液循环系统有明显不良影响。饮食是人体摄入铅的主要途径，食品原料中的铅含量一般较低，通过生物链富集进入人体危害人体健康。因此通过检测食品原料中的痕量铅，可以更好地控制铅污染的食物链传播途径。功能核酸是在体外筛选的具有特异性识别功能的核酸序列，具有稳定性好、成本低等优势。其中核酶以其独特的催化活性和高度的特异性日益受到人们的广泛关注，铅离子核酶有DNAzyme 8
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17及GR
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5，研究表明GR
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5对铅离子具有更好的选择性，因此本专利技术选择GR
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5来产生预引物。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种向导RNA(gRNA)转录溶液，包括：100nM gRNA模板；100nM T7启动子；1X Phi29缓冲液；0.1U/μL Phi29 DNA聚合酶；200nM dNTPs；1X转录缓冲液；0.1U/μL RNA聚合酶；200nM rNTPs；0.05U/μL DNase I(RNase
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free)；1X DNase Ibuffer；以及分子生物水；将上述溶液涡旋混匀后，置于金属浴37℃条件下过夜转录。2.根据权利要求1所述的向导RNA(gRNA)转录溶液，其中：所述gRNA模板，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；所述T7启动子，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示；所述Phi29缓冲液组成为60mM Tris
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SO4(pH9.0@25℃)，20mM(NH4)2SO4，2mM MgSO4，3％甘油和0.05％Tween
‑
20；所述Phi29 DNA聚合酶是人工纯化的枯草芽孢杆菌噬菌体phi29(Φ29)的复制聚合酶；所述dNTPs为脱氧核糖核酸A、T、C、G的混合溶液；所述转录缓冲液组成为400mM Tris
‑
HCl(25℃，pH 8.0)，200mM MgCl2，25mM TCEP，20mM spermidine；所述RNA聚合酶为一种依赖特异性DNA的RNA聚合酶，识别噬菌体的T7启动子序列；所述rNTPs为核糖核酸A、U、C、G的混合溶液；所述DNase I(RNase
‑
free)是一种降解双链和单链DNA的DNA特异性核酸内切酶，降解产物为具有5'
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磷酸和3'
‑
OH的短寡核苷酸；所述DNase Ibuffer组成为10mM Tris
‑
HCl，2.5mM MgCl2，0.5mM CaCl2，pH 7.6@25℃所述转录溶液用分子生物水补齐至40μL。3.一种铅离子待检溶液，包括：100nM GR5
‑
18；100nM GR7
‑
7；1X反应缓冲液；1X逆转录反应缓冲液；0.1U/μL T4 Polynucleotide Kinase；1X Buf.klenow；0.75mM dNTPs；100nM模板；0.1U/μL Klenow Fragment(3'
‑
5'exo
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)；1X NEBuffer
TM
2.1；
100nM Lba Cas12a；100nM gRNA；500nM报告分子；分子级生物水；以及不同浓度铅离子溶液；将上述溶液涡旋混匀后置于PCR仪反应。4.根据权利要求3所述的铅离子待检溶液，其中：所述GR5
‑
18为核酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：何强，刘玉梅，赵志峰，邓锐杰，蒋琼，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：