一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法，包含能够表征待测信号转导活性的转录因子的特异DNA结合序列以及荧光标记，当有标靶转录因子和TDNs结合时，将阻止荧光基团和淬灭基团的靠近，因此可以通过荧光基团的检测来分析转录因子活性。本发明专利技术简便高效，可以同步完成定性、定量、成像分析，且操作时间短。此外，本发明专利技术采用的四面体DNA纳米材料的合成方法简便，重现性好，并且可以根据待测靶标分子进行灵活设计，通用性强。通用性强。通用性强。

【技术实现步骤摘要】
一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法


[0001]本专利技术属于生物医学检测
，具体涉及一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法。

技术介绍

[0002]细胞信号转导是指细胞外因子与细胞受体结合后，通过细胞内蛋白质之间的生化反应和相互作用，诱导一系列有效基因表达而实现调控的细胞反应。细胞信号转导参与了细胞的主要生理功能如增殖、凋亡、分化和代谢的调节。细胞信号转导研究在揭示细胞生命活动以及各类疾病如何发生方面发挥着关键作用。转录因子属于特殊类型的蛋白质，可以与特定的染色体DNA序列结合来调节基因的表达。转录因子的激活可以代表细胞信号通路的激活。目前，常采用荧光素酶报告基因检测来定量分析转录因子活性。此外，通过免疫荧光成像观测转录因子从细胞浆到细胞核的易位也可以定性地反映转录因子的激活。但是，目前缺乏一种能同时对细胞信号转导活性进行定量和定性分析的简便高效的方法。
[0003]DNA纳米材料作为一种具有良好自组装特性的天然材料，兼具合成方便、易于修饰、稳定性高、序列可编程及生物相容性好等优点。四面体DN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)根据靶标转录因子的特异DNA结合基序，设计四面体DNA纳米材料TDNs和置换链T，该四面体DNA纳米材料TDNs由五条单链DNA等摩尔自组装而成，这五条单链DNA依次为TDNs
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A、TDNs
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B、TDNs
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C、TDNs
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D和TDNs
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cDNA，其中，TDNs
‑
A的5
’
端片段具有与上述特异DNA结合基序反向互补的连续串联重复序列，TDNs
‑
A的5
’
末端具有荧光基团，TDNs
‑
cDNA与上述连续串联重复序列完全互补配对，置换链T与上述连续串联重复序列互补配对，且在其5
’
端具有额外序列，以使置换链T与TDNs
‑
A形成的双链结构的稳定性大于TDNs
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cDNA与TDNs
‑
A形成的双链结构的稳定性，且置换链T的3
’
末端具有上述荧光基团的淬灭基团；(2)将上述四面体DNA纳米材料TDNs转染至待测细胞样本中，使细胞样本中的靶标转录因子与四面体DNA纳米材料TDNs充分结合；(3)收集转染后的待测细胞样本，进行固定和通透化，接着用牛血清白蛋白进行阻断，然后加入上述置换链T进行孵育，使得未结合靶标转录因子的四面体DNA纳米材料TDNs上的TDNs
‑
cDNA被置换链T所替换，置换链T和TDNs
‑
A的5
’
端片段互补结合为双链，使荧光基团的荧光被淬灭基团所淬灭；而结合了靶标转录因子的四面体DNA纳米材料TDNs上的TDNs
‑
cDNA则不会被置换链T所替换，荧光基团发出的荧光可以发出；(4)对步骤(3)处理后的待测细胞样本所发荧光进行检测分析，从而得出靶标转录因子的活性情况，进而表征对应的信号转导活性。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄菲，张莹，
申请(专利权)人：福建医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：