基于活性的探针制造技术

本发明专利技术涉及新的基于光交联活性的探针(ABP)的开发及其用途。具体来说，带泛素的E2缀合酶被改造并且显示是RING泛素E1和E3连接酶以及去泛素化酶的有效ABP。以及去泛素化酶的有效ABP。以及去泛素化酶的有效ABP。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于活性的探针
专利

[0001]本专利技术涉及新的基于光交联活性的探针(ABP)的开发及其用途。具体来说，带泛素的E2缀合酶被改造并显示为RING泛素E1和E3连接酶以及去泛素化酶的有效ABP。
[0002]专利技术背景
[0003]基于活性的蛋白质分析是研究酶生物学和促进治疗学发展的宝贵技术。泛素E3连接酶(E3)是最大的酶家族之一，可调节许多(病理)生理学过程。最大的子类型是RING E3，其成员超过600个。RING E3具有衔接子样活性，其可以受到多种调节机制的影响，并已成为有吸引力的药物靶点。据我们所知，不存在用于测量RING E3活性的基于活性的探针(ABP)。
[0004]泛素化是基本的翻译后修饰，其可调节正常的细胞生理学，并且其功能障碍可导致疾病发作(Rape,M.(2018).Nat Rev Mol Cell Biol 19,59
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70)。泛素化通过酶级联反应进行，其涉及泛素E1激活(E1)、泛素E2缀合(E2)和泛素E3连接酶(E3)的顺序活动(Hershko,A.,和Ciechanover,A.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.激活的泛素分子，其包含光交联剂部分代替泛素的31位的谷氨酰胺残基和/或32位的天冬氨酸残基。2.根据权利要求1所述的激活的泛素分子，其中所述泛素是人泛素。3.根据权利要求1或2任一项所述的激活的泛素分子，其中已经通过掺入非天然氨基酸，如对苯甲酰基
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L
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苯丙氨酸代替天冬氨酸/谷氨酰胺残基获得所述光交联剂部分。4.根据前述权利要求任一项所述的激活的泛素分子，还包含报告标签。5.根据权利要求4所述的激活的泛素分子，其中所述报告标签是生物素部分，或允许分析检测的其他报告子，例如表位标签、荧光团。6.根据权利要求4或权利要求5所述的激活的泛素分子，其中所述生物素部分/报告标签通过附着到所述泛素的N
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末端的接头分子共价附着到所述泛素分子。7.缀合物分子，其包含与E2缀合酶缀合的根据任一前述权利要求所述的激活的分子。8.根据权利要求7所述的缀合物分子，其中所述E2缀合酶是包含C85K或C87K突变和/或S22R或K92A突变的突变体酶。9.根据权利要求7或8所述的缀合物分子，其中所述E2缀合酶是UBE2D3或UBE2N。10.根据权利要求7
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9中任一项所述的缀合物分子，其进一步包含N
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【专利技术属性】
技术研发人员：萨特帕尔，
申请(专利权)人：敦提大学，
类型：发明
国别省市：