一种软骨细胞体外三维培养体系的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种软骨细胞体外三维培养体系的制备方法，其特征在于，软骨细胞体外三维培养体系由PBS缓冲溶液、青链霉素、氯化钙、氯化钠、海藻酸钠、明胶颗粒以及合适浓度的软骨细胞组成，该三维培养体系，能够极大的提高体外细胞三维培养的成功率和效率。外细胞三维培养的成功率和效率。

【技术实现步骤摘要】
一种软骨细胞体外三维培养体系的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种软骨细胞体外三维培养体系的制备方法。

技术介绍

[0002]体外细胞培养是指通过模拟机体内的生理条件，将从生物机体内取出的器官、组织或细胞等，在体外进行培养，并使其继续生存、生长和繁殖的过程。体外细胞培养已经成为现代生物研究的基本技术之一，广泛应用于现代生物医学和生物科学研究的各个方面。
[0003]目前，体外细胞水平的研究很大程度上是在二维培养条件下完成的。当细胞在二维条件下生长时，由于细胞与其基质之间复杂的细胞信号无法再现，细胞逐渐丧失了其体内原有的性状，在形态、结构和功能方面都与其在体内自然生长的状态相去甚远，因此体外实验数据无法完全转化为临床试验。而水凝胶作为一类重要的高分子材料，其重要特点是能模拟细胞生长环境，能直接影响着细胞粘附、生长等行为，进行体外细胞三维培养。适宜的水凝胶培养体系，能够极大的提高体外细胞三维培养的成功率和效率。
[0004]现有专利基于3D生物打印制备高力学性能软骨的方法专利号为 2014107242904，公布了通过藻朊酸钠与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种软骨细胞体外三维培养体系的制备方法，其特征在于，软骨细胞体外三维培养体系由PBS缓冲溶液、青链霉素、氯化钙、氯化钠、海藻酸钠、明胶颗粒以及软骨细胞组成，其制备方法按照以下步骤进行：明胶微粒悬浮液的制备：将明胶颗粒研磨至细度为150目，得明胶微粒；称取0.5g明胶微粒置于50ml离心管中，管盖半松，在温度为110℃条件下烘干2h后取出盖紧管盖，骤冷处理至
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20℃后，倒入50ml温度为4℃含青链霉素的PBS缓冲溶液，使用漩涡混合器在转速为2800rpm条件下处理3min，即得单个分散的明胶微粒悬浮液；海藻酸钠溶液的制备：将0.75g海藻酸钠加入到50ml氯化钠水溶液中，在压力为0.217Mpa，温度为121℃条件下，保持20min，冷却至4℃，得海藻酸钠溶液；明胶氯化钙溶液的制备：将30g明胶加入到150ml 0.1mol/L的氯化钙水溶液中，在压力为0.217Mpa，温度为121℃条件下，保持20min，得液态明胶氯化钙溶液；将液态明胶氯化钙溶液平铺于培养皿中，冷却凝固，得明胶氯化钙层；将灭菌过的圆孔直径为24mm高度为4mm的聚四氟乙烯模具放置于明胶氯化钙层上，备用；混合液b的制备：将制备好的明胶微粒悬浮液用一次性孔径为100um的无菌滤网过滤出明胶微粒，按照0.3g
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0.45g/ml的比例将明胶微粒与海藻酸钠溶液混合，得混合液a；将活的个体分散的1代软骨细胞，按照6x106‑
9x106个/ml的比例将软骨细胞与混合液a混合，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚航，王东安，张嘉露，张雷雷，李天亮，聂婷婷，崔金兰，宫江峰，
申请(专利权)人：烟台鼎昊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：