包含激肽释放酶相关肽酶2抗原结合结构域的蛋白质及其用途制造技术

本发明专利技术的实施方案提供了包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域的分离的蛋白质，包括单特异性抗体和双特异性抗体。本发明专利技术另外的实施方案提供了编码hk2特异性蛋白质的多核苷酸、载体、宿主细胞以及制备和使用它们的方法。用它们的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含激肽释放酶相关肽酶2抗原结合结构域的蛋白质及其用途
[0001]序列表
[0002]本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2020年6月23日，命名为JBI6125USNP1_SL.txt，并且大小为764,265字节。


[0003]本专利技术提供了结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域、包含结合hK2的抗原结合结构域的蛋白质、编码所述蛋白质的多核苷酸、载体、宿主细胞、制备和使用它们的方法。

技术介绍

[0004]对于男性而言，前列腺癌是第二常诊断出的癌症和第六大癌症致死原因，在全世界男性中占总新癌症病例的14％(903,500)以及总癌症死亡的6％(258,400)。基于疾病的程度、激素状态以及是否存在可检测到的转移，将前列腺癌从被诊断出到死亡的过程最恰当地分类为以下一系列临床分期：局部疾病、放射疗法或外科手术后前列腺特异性抗原(PSA)的水平升高但不存在可检测到的转移，以及在非去势或去势期的临床转移。虽然外科手术、放射或这两者的组合对于患有局部疾病的患者可能有效，但是这些患者中有相当比例会患上复发性疾病，如通过PSA的水平升高所证实，复发可导致转移发展，特别是在高风险组中
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转变为该疾病的致死期。
[0005]雄激素耗竭疗法(ADT)是具有以下通常可预见到的结果的标准治疗：PSA水平下降，肿瘤不增殖的稳定期，然后是PSA水平升高并再生长为去势难治性疾病。在过去，ADT一直是转移性前列腺癌患者的护理标准。
[0006]激肽释放酶相关肽酶2(hK2，HK2)是具有对前列腺组织和前列腺癌有特异性的雄激素受体(AR)驱动表达的胰蛋白酶样酶。hK2受跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)活化并分泌到前列腺管道中，在管道中它引发裂解精液中的细胞外基质即精囊蛋白的级联，以增强精子能动性。hK2表达限于前列腺和前列腺癌组织，然而最近已经证明，在通过类固醇激素适当活化AR
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途径后，在乳腺癌系和原代患者样品中能够检测到hK2(美国专利公开号2018/0326102)。类似于PSA，当前列腺的高度结构化组织在过度增大或恶性转化后受损时，发生无催化活性的hK2逆行释放进行到血液中。
[0007]需要用于治疗和诊断目的的下一代hK2结合结构域。

技术实现思路

[0008]本公开提供了一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的抗原结合结构域包含：
[0009]SEQ ID NO：137的重链可变区(VH)的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3及
SEQ ID NO：138的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：137的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：138的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：162的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：163的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：164的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：165的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：166的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：167的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：168的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：169的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：204的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：205的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0010]本公开还提供了一种结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的分离的抗原结合结构域，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：75的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：74的轻链可变区(VL)。
[0011]本公开还提供了结合hK2的分离的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含某些VH和VL氨基酸序列。
[0012]本公开还提供了一种分离的多特异性蛋白质，所述多特异性蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的抗原结合结构域包含SEQ ID NO：137的重链可变区(VH)的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：138的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：137的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：138的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：162的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：163的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：164的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：165的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：166的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：167的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：168的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：169的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或SEQ ID NO：204的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：205的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一个特定实施方案中，本公开还提供了一种分离的多特异性蛋白质，所述多特异性蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的抗原结合结构域包含SEQ ID NO：162的重链可变区(VH)的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：163的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3。
[0013]本公开还提供了一种分离的多特异性蛋白质，所述分离的多特异性蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：75的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：74的轻链可变区(VL)。
[0014]本公开还提供了包含结合hK2的抗原结合结构域的分离的多特异性蛋白质，所述抗原结合结构域包含某些VH和VL氨基酸序列。
[0015]本公开还提供了一种分离的嵌合抗原受体(CAR)，所述分离的嵌合抗原受体包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域。
[0016]本公开还提供了一种分离的嵌合抗原受体(CAR)，所述分离的嵌合抗原受体包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的抗原结合结构域包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域与hK2上的具有选自由以下项组成的组的序列的表位结合：SEQ ID NO：111、112、113、114和115。2.根据权利要求1所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域在具有KVTEF(SEQ ID NO：111)和HYRKW(SEQ ID NO：112)的序列的表位内结合hK2。3.根据权利要求1所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域与参考抗体竞争与hK2结合，所述参考抗体包含：a.SEQ ID NO：137的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：138的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者b.SEQ ID NO：162的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：163的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者c.SEQ ID NO：164的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：165的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者d.SEQ ID NO：166的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：167的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者e.SEQ ID NO：168的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：169的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者f.SEQ ID NO：204的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：205的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或者g.SEQ ID NO：166的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：444的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3。4.根据权利要求3所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域与参考抗体竞争与hK2结合，所述参考抗体包含SEQ ID NO：162的VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3及SEQ ID NO：163的VL的LCDR1、LCDR2和LCDR3。5.根据权利要求1至4所述的分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含以下序列的HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：a.分别为SEQ ID NO：141、142、143、144、145和146；b.分别为SEQ ID NO：170、171、172、173、174和175；c.分别为SEQ ID NO：176、177、178、179、180和181；d.分别为SEQ ID NO：170、183、184、185、186和187；e.分别为SEQ ID NO：188、189、190、191、192和193；f.分别为SEQ ID NO：206、207、208、182、470和209；g.分别为SEQ ID NO：147、148、143、144、145和146；h.分别为SEQ ID NO：194、195、172、173、174和175；i.分别为SEQ ID NO：196、197、178、179、180和181；j.分别为SEQ ID NO：198、199、184、185、186和187；k.分别为SEQ ID NO：200、201、190、191、192和193；或者l.分别为SEQ ID NO：216、217、218、182、470和209。6.根据权利要求5所述的分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含分别为SEQ ID NO：
170、171、172、173、174和175的HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。7.根据权利要求1至6中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab
’
)2、Fd、dAb或VHH。8.根据权利要求7所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述Fab。9.根据权利要求7所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述VHH。10.根据权利要求7所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述scFv。11.根据权利要求10所述的分离的蛋白质，其中所述scFv从N端到C端包含VH、第一接头(L1)和VL(VH
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L1
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VL)或所述VL、所述L1和所述VH(VL
‑
L1
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VH)。12.根据权利要求11所述的分离的蛋白质，其中所述L1包含：a.约5
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50个氨基酸；b.约5
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40个氨基酸；c.约10
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30个氨基酸；或者d.约10
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20个氨基酸。13.根据权利要求12所述的分离的蛋白质，其中所述L1包含SEQ ID NO：7、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107或108的氨基酸序列。14.根据权利要求13所述的分离的蛋白质，其中所述L1包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列。15.根据权利要求1至14中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：137、162、164、166、168或204的VH以及SEQ ID NO：138、163、165、167、169或205的VL。16.根据权利要求15所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：137的VH和SEQ ID NO：138的VL；或者b.SEQ ID NO：162的VH和SEQ ID NO：163的VL；或者c.SEQ ID NO：164的VH和SEQ ID NO：165的VL；或者d.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：167的VL；或者e.SEQ ID NO：168的VH和SEQ ID NO：169的VL；或者f.SEQ ID NO：204的VH和SEQ ID NO：205的VL；或者g.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：444的VL。17.根据权利要求15所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：162的VH有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VH和与SEQ ID NO：163的VL有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VL。18.根据权利要求1至17中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO：133、134、308、316、324、325、404、405、406、407、408和409。
19.根据权利要求1至17中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：404或405的氨基酸序列有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列。20.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hK2)的抗原结合结构域，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：75的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：74的轻链可变区(VL)。21.根据权利要求20所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：4、5、6、139、159或161的VH和SEQ ID NO：1、2、3、140或160的VL，条件是结合hK2的所述抗原结合结构域不包含SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：2的VL两者。22.根据权利要求21所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：1的VL；b.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：2的VL；c.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：3的VL；d.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：140的VL；e.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：160的VL；f.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：1的VL；g.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：3的VL；h.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：140的VL；i.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：160的VL；j.SEQ ID NO：6的VH和SEQ ID NO：1的VL；k.SEQ ID NO：6的VH和SEQ ID NO：2的VL；l.SEQ ID NO：6的VH和SEQ ID NO：3的VL；m.SEQ ID NO：6的VH和SEQ ID NO：140的VL；n.SEQ ID NO：6的VH和SEQ ID NO：160的VL；o.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：1的VL；p.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：2的VL；q.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：3的VL；r.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：140的VL；s.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：160的VL；t.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：1的VL；u.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：2的VL；v.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：3的VL；w.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：140的VL；x.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：160的VL；y.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：1的VL；z.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：2的VL；aa.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：3的VL；bb.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：140的VL；或者cc.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：160的VL。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含以下序列的HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：a.分别为SEQ ID NO：63、64、66、67、69和71；b.分别为SEQ ID NO：63、65、66、68、70和71；c.分别为SEQ ID NO：63、65、66、67、69和71；d.分别为SEQ ID NO：72、73、66、67、69和71；或者e.分别为SEQ ID NO：72、73、66、68、70和71；或者f.分别为SEQ ID NO：72、73、66、67、69和71。24.根据权利要求21所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab
’
)2、Fd、dAb或VHH。25.根据权利要求24所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述Fab。26.根据权利要求24所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述VHH。27.根据权利要求24所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域是所述scFv。28.根据权利要求27所述的分离的蛋白质，其中所述scFv从N端到C端包含VH、第一接头(L1)和VL(VH
‑
L1
‑
VL)或所述VL、所述L1和所述VH(VL
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L1
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VH)。29.根据权利要求28所述的分离的蛋白质，其中所述L1包含：a.约5
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50个氨基酸；b.约5
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40个氨基酸c.约10
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30个氨基酸；d.或约10
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20个氨基酸。30.根据权利要求29所述的分离的蛋白质，其中所述L1包含SEQ ID NO：7、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107或108的氨基酸序列。31.根据权利要求21至30中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、135、136、318、319、320、321、322或323的氨基酸序列。32.根据权利要求1至31中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述分离的蛋白质是单特异性蛋白质。33.根据权利要求1至31中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述分离的蛋白质是多特异性蛋白质。34.根据权利要求33所述的分离的蛋白质，其中所述多特异性蛋白质是双特异性蛋白质。35.根据权利要求33所述的分离的蛋白质，其中所述多特异性蛋白质是三特异性蛋白质。36.根据权利要求34或35所述的多特异性蛋白质，所述多特异性蛋白质包含结合淋巴细胞上的抗原的抗原结合结构域。
37.根据权利要求36所述的多特异性蛋白质，其中所述淋巴细胞为T细胞。38.根据权利要求37所述的多特异性蛋白质，其中所述T细胞为CD8+T细胞。39.根据权利要求38所述的多特异性蛋白质，其中所述淋巴细胞为自然杀伤(NK)细胞。40.根据权利要求36中任一项所述的多特异性蛋白质，其中所述淋巴细胞上的所述抗原为CD3、CD3 epsilon(CD3ε)、CD8、KI2L4、NKG2E、NKG2D、NKG2F、BTNL3、CD186、BTNL8、PD
‑
1、CD195或NKG2C。41.根据权利要求40所述的多特异性蛋白质，其中所述淋巴细胞上的所述抗原为CD3ε。42.根据权利要求41所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：116的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO：117的HCDR2、SEQ ID NO：118的HCDR3、SEQ ID NO：119的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO：120的LCDR2和SEQ ID NO：121的LCDR3；或者b.SEQ ID NO：122的VH和SEQ ID NO：123的VL。43.根据权利要求41所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：157的VL。44.根据权利要求43所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：255的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：260的LCDR3；或者b.SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：261的LCDR3；或者c.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：249的VL；或者d.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：250的VL；或者e.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：251的VL；或者f.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：252的VL；或者g.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：253的VL；或者h.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：254的VL。45.根据权利要求43所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：261的LCDR3。46.根据权利要求43或45所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：248的VH有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VH和与SEQ ID NO：251的VL有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VL。47.根据权利要求41至46中任一项所述的多特异性蛋白质，其中结合hK2的所述结合结构域包含以下序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：a.分别为SEQ ID NO：141、142、143、144、145和146；b.分别为SEQ ID No：170、171、172、173、174和175；c.分别为SEQ ID NO：176、177、178、179、180和181；
d.分别为SEQ ID NO：170、183、184、185、186和187；e.分别为SEQ ID NO：188、189、190、191、192和193；f.分别为SEQ ID NO：206、207、208、182、470和209；g.分别为SEQ ID NO：147、148、143、144、145和146；h.分别为SEQ ID NO：194、195、172、173、174和175；i.分别为SEQ ID NO：196、197、178、179、190和181；j.分别为SEQ ID NO：198、199、184、185、186和187；k.分别为SEQ ID NO：200、201、190、191、192和193；l.分别为SEQ ID NO：216、217、218、182、470和209；m.分别为SEQ ID NO：63、64、66、67、69和71；n.分别为SEQ ID NO：63、65、66、68、70和71；o.分别为SEQ ID NO：72、73、66、67、69和71；p.分别为SEQ ID NO：72、73、66、68、70和71；q.SEQ ID NO：137的VH和SEQ ID NO：138的VL；r.SEQ ID NO：162的VH和SEQ ID NO：163的VL；s.SEQ ID NO：164的VH和SEQ ID NO：165的VL；t.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：167的VL；u.SEQ ID NO：168的VH和SEQ ID NO：169的VL；v.SEQ ID NO：204的VH和SEQ ID NO：205的VL；w.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：444的VL；x.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：3的VL；y.SEQ ID NO：139的VH和SEQ ID NO：140的VL；z.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：140的VL；aa.SEQ ID NO：159的VH和SEQ ID NO：160的VL；或者bb.SEQ ID NO：161的VH和SEQ ID NO：160的VL。48.根据权利要求47所述的多特异性蛋白质，其中结合hK2的所述结合结构域包含分别为SEQ ID No：170、171、172、173、174和175的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。49.根据权利要求41至48中任一项所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3的所述结合结构域包含：a.SEQ ID NO：116的HCDR1、SEQ ID NO：117的HCDR2、SEQ ID NO：118的HCDR3、SEQ ID NO：119的LCDR1、SEQ ID NO：120的LCDR2和SEQ ID NO：121的LCDR3；或者b.SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：260的LCDR3；或者c.SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：261的LCDR3；或者d.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：249的VL；或者e.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：250的VL；或者f.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：251的VL；或者g.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：252的VL；或者
h.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：253的VL；或者i.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：254的VL；或者j.SEQ ID NO：122的VH和SEQ ID NO：123的VL。50.根据权利要求1至49中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质缀合至半衰期延长部分。51.根据权利要求50所述的分离的蛋白质，其中所述半衰期延长部分是免疫球蛋白(Ig)、所述Ig的片段、Ig恒定区、所述Ig恒定区的片段、Fc区、转铁蛋白、白蛋白、白蛋白结合结构域或聚乙二醇。52.根据权利要求51所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含Fc区。53.根据权利要求52所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含CH2结构域。54.根据权利要求52所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含CH3结构域。55.根据权利要求52所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含所述CH2结构域和所述CH3结构域。56.根据权利要求55所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含铰链的至少一部分、所述CH2结构域和所述CH3结构域。57.根据权利要求56所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述片段包含铰链、所述CH2结构域和所述CH3结构域。58.根据权利要求50至57中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域缀合至所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段的N端。59.根据权利要求50至57中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域缀合至所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段的C端。60.根据权利要求50至57中任一项所述的分离的蛋白质，其中结合hK2的所述抗原结合结构域经由第二接头(L2)缀合至所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段。61.根据权利要求60所述的分离的蛋白质，其中所述L2包含SEQ ID NO：7、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107或108的氨基酸序列。62.根据权利要求51至61中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。63.根据权利要求62所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段是IgG1。64.根据权利要求51至63中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段包含至少一个突变，所述至少一个突变导致所述蛋白质与Fcγ受体(FcγR)的结合减少。65.根据权利要求64所述的分离的蛋白质，其中导致所述蛋白质与所述FcγR的结合减少的所述至少一个突变选自由以下项组成的组：F234A/L235A、L234A/L235A、L234A/L235A/D265S、V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、F234A/L235A、S228P/F234A/L235A、N297A、V234A/G237A、K214T/E233P/L234V/L235A/G236至缺失/A327G/P331A/D365E/
L358M、H268Q/V309L/A330S/P331S、S267E/L328F、L234F/L235E/D265A、L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、S228P/F234A/L235A/G237A/P238S和S228P/F234A/L235A/G236至缺失/G237A/P238S，其中残基根据EU索引进行编号。66.根据权利要求65所述的分离的蛋白质，其中导致所述蛋白质与所述FcγR的结合减少的所述突变是L234A_L235A_D265S。67.根据权利要求51至66中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段包含至少一个突变，所述至少一个突变导致所述蛋白质与所述FcγR的结合增强。68.根据权利要求67所述的分离的蛋白质，其中导致所述蛋白质与所述FcγR的结合增强的所述至少一个突变选自由以下项组成的组：S239D/I332E、S298A/E333A/K334A、F243L/R292P/Y300L、F243L/R292P/Y300L/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L和G236A/S239D/I332E，其中残基根据EU索引进行编号。69.根据权利要求64至68中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述FcγR是FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB或FcγRIII或它们的任何组合。70.根据权利要求51至63中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区或所述Ig恒定区的所述片段包含至少一个突变，所述至少一个突变调节所述蛋白质的半衰期。71.根据权利要求70所述的分离的蛋白质，其中调节所述蛋白质的半衰期的至少一个突变选自由以下项组成的组：H435A、P257I/N434H、D376V/N434H、M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F、T308P/N434A和H435R，其中残基根据EU索引进行编号。72.根据权利要求51至63中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质在所述Ig恒定区的CH3结构域中包含至少一个突变。73.根据权利要求72所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述CH3结构域中的所述至少一个突变选自由以下项组成的组：T350V、L351Y、F405A、Y407V、T366Y、T366W、F405W、T394W、T394S、Y407T、Y407A、T366S/L368A/Y407V、L351Y/F405A/Y407V、T366I/K392M/T394W、F405A/Y407V、T366L/K392M/T394W、L351Y/Y407A、T366A/K409F、L351Y/Y407A、T366V/K409F、T366A/K409F、T350V/L351Y/F405A/Y407V和T350V/T366L/K392L/T394W，其中残基根据EU索引进行编号。74.根据权利要求73所述的分离的蛋白质，其中所述Ig恒定区的所述CH3结构域中的所述突变是T350V_T366L_K392L_T394W或T350V_L351Y_F405A_Y407V。75.根据权利要求73或74所述的分离的蛋白质，其中所述IgG恒定区包含SEQ ID：109、110、158或378。76.根据权利要求75所述的分离的蛋白质，其中所述IgG恒定区包含SEQ ID NO：109或378。77.根据权利要求1至18或50至76中任一项所述的分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含：a.SEQ ID NO：210的重链(HC)和SEQ ID NO：221的轻链(LC)；b.SEQ ID NO：211的HC和SEQ ID NO：222的LC；c.SEQ ID NO：212的HC和SEQ ID NO：223的LC；d.SEQ ID NO：213的HC和SEQ ID NO：224的LC；或者
e.SEQ ID NO：219的HC和SEQ ID NO：220的LC。78.根据权利要求1至76中任一项所述的分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含与SEQ ID NO：354有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的HC和与SEQ ID NO：221有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的LC。79.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：170、171、172、173、174和175的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或b.SEQ ID NO：162的VH和SEQ ID NO：163的VL；和/或c.SEQ ID NO：210的HC和SEQ ID NO：221的LC。80.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：170、171、172、173、174和175的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或b.SEQ ID NO：162的VH和SEQ ID NO：163的VL；和/或c.SEQ ID NO：354的HC和SEQ ID NO：221的LC。81.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：176、177、178、179、180和181的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或b.SEQ ID NO：164的VH和SEQ ID NO：165的VL；和/或c.SEQ ID NO：211的HC和SEQ ID NO：222的LC。82.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：170、183、184、185、186和187的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或b.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：167的VL；和/或c.SEQ ID NO：212的HC和SEQ ID NO：223的LC。83.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：188、189、190、191、192和193的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或b.SEQ ID NO：168的VH和SEQ ID NO：169的VL；和/或c.SEQ ID NO：213的HC和SEQ ID NO：224的LC。84.一种分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含结合hK2的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.分别为SEQ ID NO：206、207、208、182、470和209的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或
b.SEQ ID NO：204的VH和SEQ ID NO：205的VL；和/或c.SEQ ID NO：219的HC和SEQ ID NO：220的LC。85.根据权利要求79至84中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质是嵌合抗原受体(CAR)。86.根据权利要求79至84中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述分离的蛋白质是包含结合CD3ε的抗原结合结构域的多特异性蛋白质。87.根据权利要求86所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：116的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO：117的HCDR2、SEQ ID NO：118的HCDR3、SEQ ID NO：119的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO：120的LCDR2和SEQ ID NO：121的LCDR3；或者b.SEQ ID NO：122的VH和SEQ ID NO：123的VL。88.根据权利要求86或87所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：157的VL。89.根据权利要求86或87所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：255的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：260的LCDR3；或者b.SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：261的LCDR3；或者c.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：249的VL；或者d.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：250的VL；或者e.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：251的VL；或者f.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：252的VL；或者g.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：253的VL；或者h.SEQ ID NO：248的VH和SEQ ID NO：254的VL。90.根据权利要求86所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含SEQ ID NO：255的HCDR1、SEQ ID NO：256的HCDR2、SEQ ID NO：257的HCDR3、SEQ ID NO：258的LCDR1、SEQ ID NO：259的LCDR2和SEQ ID NO：261的LCDR3。91.根据权利要求86或90所述的多特异性蛋白质，其中结合CD3ε的所述抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：248的VH有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VH和与SEQ ID NO：251的VL有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VL。92.根据权利要求1至32中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质是嵌合抗原受体(CAR)。93.根据权利要求92所述的分离的蛋白质，其中所述CAR包含：a.细胞外结构域，所述细胞外结构域包含根据权利要求1至32中任一项结合hK2的抗原结合结构域；
b.跨膜结构域；以及c.细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域任选地包含至少一个共刺激结构域。94.根据权利要求92或93所述的分离的蛋白质，其中所述CAR还包含CD8a
‑
铰链区。95.根据权利要求92至94中任一项所述的分离的蛋白质，其中a.所述CD8a
‑
铰链区包含与SEQ ID NO：25的氨基酸序列有至少90％同一性的氨基酸序列；b.所述跨膜结构域包含与SEQ ID NO：26的氨基酸序列有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或c.所述细胞内信号传导结构域包含具有与SEQ ID NO：27的氨基酸序列有至少90％同一性的氨基酸序列的共刺激结构域以及具有与SEQ ID NO：28的氨基酸序列有至少90％同一性的氨基酸序列的初级信号传导结构域。96.一种分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，所述分离的抗hK2/抗CD3蛋白质包含结合hK2的第一抗原结合结构域和结合淋巴细胞抗原的第二抗原结合结构域。97.根据权利要求96所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述淋巴细胞抗原是T细胞抗原。98.根据权利要求97所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述T细胞抗原是CD8
+
T细胞抗原。99.根据权利要求98所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述淋巴细胞抗原是NK细胞抗原。100.根据权利要求96至99中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述淋巴细胞抗原是CD3、CD3 epsilon(CD3ε)、CD8、KI2L4、NKG2E、NKG2D、NKG2F、BTNL3、CD186、BTNL8、PD
‑
1、CD195或NKG2C。101.根据权利要求100所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述淋巴细胞抗原是CD3g。102.根据权利要求96至100中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域和/或结合淋巴细胞抗原的所述第二抗原结合结构域包含scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab
’
)2、Fd、dAb或VHH。103.根据权利要求102所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域和/或结合淋巴细胞抗原的所述第二抗原结合结构域包含所述Fab。104.根据权利要求102所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域和/或结合淋巴细胞抗原的所述第二抗原结合结构域包含所述VHH。105.根据权利要求102所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域和/或结合淋巴细胞抗原的所述第二抗原结合结构域包含所述scFv。106.根据权利要求102所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含所述Fab并且结合淋巴细胞抗原的所述第二抗原结合结构域包含所述scFv。107.根据权利要求105或106所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述scFv从N端到C端包含VH、第一接头(L1)和VL(VH
‑
L1
‑
VL)或所述VL、所述L1和所述VH(VL
‑
L1
‑
VH)。
108.根据权利要求107所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述L1包含a.约5
‑
50个氨基酸；b.约5
‑
40个氨基酸；c.约10
‑
30个氨基酸；或者d.约10
‑
20个氨基酸。109.根据权利要求108所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述L1包含SEQ ID NO：7、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107或108的氨基酸序列。110.根据权利要求109所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中所述L1包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列。111.根据权利要求96至110中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域与hK2上的由SEQ ID NO：111、112、113、114或115所示的表位特异性结合。112.根据权利要求111所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域与hK2上的由SEQ ID NO：111和112所示的表位特异性结合。113.根据权利要求111或112所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域与hK2上的非连续表位特异性结合，所述非连续表位包含选自由SEQ ID NO：111、112、113、114和115组成的组的一个或多个氨基酸序列。114.根据权利要求96至113中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合CD3ε的第二抗原结合结构域与CD3ε上的由SEQ ID NO：341、448或449所示的表位特异性结合。115.根据权利要求114所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合CD3ε的所述第二抗原结合结构域与CD3ε上的非连续表位特异性结合，所述非连续表位包含选自由SEQ ID NO：341、448和449组成的组的一个或多个氨基酸序列。116.根据权利要求115所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合CD3ε的所述第二抗原结合结构域与CD3上的由SEQ ID NO：341、448和449所示的表位特异性结合。117.根据权利要求96至116中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含SEQ ID NO：63、72、141、147、170、176、188、194、196、198、200、206或216的HCDR1，SEQ ID NO：64、65、73、142、148、171、177、、189、195、197、199、201、207或217的HCDR2、SEQ ID NO：66、143、172、178、184、190、208或218的HCDR3，SEQ ID NO：67、68、144、173、179、182、185或191的LCDR1，SEQ ID NO：69、70、145、174、180、186、192或470的LCDR2及SEQ ID NO：71、146、175、181、187、193或209的LCDR3。118.根据权利要求117所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含以下序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：a.分别为SEQ ID NO：141、142、143、144、145和146；b.分别为SEQ ID No：170、171、172、173、174和175；c.分别为SEQ ID NO：176、177、178、179、180和181；d.分别为SEQ ID NO：170、183、184、185、186和187；e.分别为SEQ ID NO：188、189、190、191、192和193；f.分别为SEQ ID NO：206、207、208、182、470和209；
g.分别为SEQ ID NO：147、148、143、144、145和146；h.分别为SEQ ID NO：194、195、172、173、174和175；i.分别为SEQ ID NO：196、197、178、179、190和181；j.分别为SEQ ID NO：198、199、184、185、186和187；k.分别为SEQ ID NO：200、201、190、191、192和193；或者l.分别为SEQ ID NO：216、217、218、181、470和209。119.根据权利要求118所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含分别为SEQ ID No：170、171、172、173、174和175的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。120.根据权利要求118所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：137的VH和SEQ ID NO：138的VL；b.SEQ ID NO：162的VH和SEQ ID NO：163的VL；c.SEQ ID NO：164的VH和SEQ ID NO：165的VL；d.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：167的VL；e.SEQ ID NO：168的VH和SEQ ID NO：169的VL；f.SEQ ID NO：204的VH和SEQ ID NO：205的VL；或者g.SEQ ID NO：166的VH和SEQ ID NO：444的VL。121.根据权利要求117至119中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含与SEQ ID NO：162的VH有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VH和与SEQ ID NO：163的VL有至少80％(例如至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的VL。122.根据权利要求96至115中任一项所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含SEQ ID NO：75的VH和SEQ ID NO：74的VL。123.根据权利要求122所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含SEQ ID NO：4、5、6、137、139、159或161的VH和SEQ ID NO：1、2、3、140或160的VL，条件是结合hK2的所述抗原结合结构域不包含SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：2的VL。124.根据权利要求123所述的分离的抗hK2/抗CD3蛋白质，其中结合hK2的所述第一抗原结合结构域包含：a.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：1的VL；b.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：2的VL；c.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：3的VL；d.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：140的VL；e.SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：160的VL；f.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：1的VL；g.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：3的VL；h.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：140的VL；i.SEQ ID NO：5的VH和SEQ ID NO：160的VL；
NO：258的LCDR1、S...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：