一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法技术

本发明专利技术属于中药质量控制领域，尤其涉及一种采用超高液相

【技术实现步骤摘要】
一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法


[0001]本专利技术属于中药质量控制领域，尤其涉及一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分的含量测定方法。

技术介绍

[0002]罗布麻叶（Apocynum venetum L.）是夹竹桃科植物罗布麻的叶，为我国传统中药，具有平肝安神、清热利水等功效，主要用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少等症。研究表明，罗布麻叶主要活性成分为黄酮类化合物，具有降血压、抗氧化、抗抑郁、抗焦虑和降低胆固醇等多种药理活性。罗布麻叶在我国主要分布于新疆、青海、甘肃、陕西、山西、河南、河北、江苏、山东、辽宁及内蒙古等省区，主要野生在盐碱荒地和沙漠边缘及河流两岸、冲积平原、河泊周围及戈壁荒滩上。罗布麻叶含有多种化学成分，如黄酮类、氨基酸、脂肪酸醇酯及多种矿物质元素等。黄酮类化合物（flavonoids），原是指以2
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苯基色原酮为骨架衍生的一类化合物的总称。现泛指两个苯环通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称，即具有C6
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C3
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C6结构的一类化合物的总称，主要分为黄酮和黄酮醇、黄烷酮（又称二氢黄酮）和黄烷酮醇（又称二氢黄酮醇）、异黄酮、异黄烷酮（又称二氢异黄酮）、查耳酮、二氢查耳酮、橙酮（又称澳咔）、黄烷和黄烷醇等。其中乙酰异槲皮苷为黄酮醇类的代表化合物之一，研究表明以乙酰异槲皮苷为代表的黄酮醇类化合物为一类重要的生物活性成分，其在心血管系统疾病治疗，抗菌及抗病毒，抗肿瘤，抗氧化自由基，抗炎、镇痛，保肝等方面具有良好的药理活性。
[0003]心血管系统活性不少治疗冠心病有效的中成药均含黄酮类化合物，研究发现芦丁、槲皮素、葛根素以及人工合成的立可定等均有明显的扩冠作用；槲皮素、芦丁、金丝桃苷、葛根素、灯盏花素、葛根总黄酮、银杏叶总黄酮对缺血性脑损伤有保护作用；金丝桃苷、水飞蓟素、木犀草素、沙棘总黄酮对心肌缺血性损伤有保护作用；银杏叶总黄酮、葛根素、大豆苷元等对心肌缺氧性损伤有明显保护作用。此外，沙棘总黄酮、苦参总黄酮、甘草黄酮（主要为甘草素和异甘草素）具有抗心律失常作用。
[0004]抗菌及抗病毒活性木犀草素、黄岑苷、黄岑素等均有一定的抗菌作用；槲皮素、二氢槲皮素、桑色素、山柰酚等具有抗病毒作用；从菊花、獐牙菜中分离得到的黄酮单体对HIV病毒有较强抑制作用，大豆苷元、染料木素、鸡豆黄素A对HIV病毒也有一定抑制作用。
[0005]抗肿瘤活性黄酮类化合物的抗肿瘤机制多种多样，如槲皮素的抗肿瘤活性与其抗氧化作用、抑制相关酶的活性、降低肿瘤细胞耐药性、诱导肿瘤细胞凋亡及雌激素样作用等有关；水飞蓟素的抗肿瘤活性与其抗氧化作用、抑制相关酶活性、诱导细胞周期阻滞等有关。
[0006]抗氧化自由基活性大多数黄酮类化合物均有较强的抗氧化自由基作用，而黄酮类化合物的一些药理
活性也往往与其抗氧化自由基相关。
[0007]抗炎、镇痛活性芦丁、羟基芦丁、二氢槲皮素等对角叉菜胶、5
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HT及PGE诱发的大鼠足爪水肿、甲醛引起的关节炎及棉球肉芽肿等均有明显抑制作用；金荞麦中的双聚原矢车菊苷元有抗炎、解热、祛痰等作用；金丝桃苷、芦丁、槲皮素及银杏叶总黄酮等有良好的镇痛作用。
[0008]保肝活性水飞蓟素对中毒性肝损伤、急慢性肝炎、肝硬化等有良好的治疗作用；淫羊藿黄酮、黄岑素、黄岑苷能抑制肝组织脂质过氧化、提高肝脏SOD活性、减少肝组织脂褐素形成，对肝脏有保护作用；甘草黄酮可保护乙醇所致肝细胞超微结构的损伤等。
[0009]其他此外，大量研究表明黄酮类化合物还具有降压、降血脂、抗衰老、提高机体免疫力、泻下、镇咳、祛痰、解痉及抗变态等药理活性。
[0010]目前，《中华人民共和国药典》2020年版一部中仅对采用HPLC法测定罗布麻叶中金丝桃苷的含量进行了规定，这显然无法全面反应药材的质量。文献报道中常见采用HPLC法测定罗布麻叶药材或其制剂中一种或多种成分的含量，未检索到采用超高效液相
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串联质谱法（UPLC
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MS/MS）同时对罗布麻叶中多种成分进行定量的报道。

技术实现思路

[0011]本专利技术目的在于提供一种同时测定罗布麻叶中异槲皮苷、紫云英苷、乙酰异槲皮苷（Quercetin 3
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O
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(6
″‑
O
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acetyl)
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glucoside）的含量测定方法。本方法采用超高效液相
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串联质谱法（UPLC
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MS/MS），通过对样品处理方法、色谱方法、质谱方法的优化，建立了罗布麻叶中活性成分含量测定的方法，为该药材质量标准的制定、资源的合理开发提供研究基础。所述测定方法具有分析速度快、准确度高、灵敏度高、重复性好、节约溶剂的有点，为进一步完善和提升罗布麻叶药材及其制剂的质量控制体系提供依据。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案实现：一种罗布麻叶药材中异槲皮苷、紫云英苷、乙酰异槲皮苷（Quercetin 3
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O
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(6
″‑
O
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acetyl)
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glucoside）的含量测定方法，所述含量测定方法为：色谱条件：HSS C18 SB色谱柱，2.1
×
100mm, 1.8μm；流动相B为乙腈，流动相D为0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱；柱温：20～40
°
C；进样室温度10～30 ℃流速：0.2～0.6 mL
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min
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1；进样量：1～10 μL。
[0013]质谱条件：电喷雾离子源，以正、负离子模式同时扫描检测，扫描范围：100
‑
1000，毛细管电压2.0～3.0 kV，离子源温度350～500 ℃，脱溶剂气N2，气流900～1000 L
•
h
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1，碰撞气体氩气，碰撞气流0.05～0.3 mL
•
min
‑
1，多反应监测定量模式。
[0014]异槲皮苷对照品储备液的制备：取异槲皮苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.38 mg/mL的溶液；紫云英苷对照品储备液的制备：取紫云英苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.33 mg/mL的溶液；乙酰异槲皮苷对照品储备液的制备：取乙酰异槲皮苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.30 mg/mL的溶液；
混合对照品溶液的制备：分别精密吸取上述各对照品储备液1 mL置于同一个25 mL容量瓶中，50%乙腈水溶液稀释至刻度，得异槲皮苷、紫云英苷、乙酰异槲皮苷浓度分别为4.56、0.40、1.2 μg/mL的混合对照品溶液。
[0015]供试品溶液的制备：精密称取罗布麻药材0.1～3.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入40～100%甲醇30 mL，精密称定重量，采本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法，其特征在于：所述含量测定方法为：色谱条件：HSS C18 SB色谱柱，2.1
×
100mm, 1.8μm；流动相B为乙腈，流动相D为0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱；柱温：20～40
°
C；进样室温度10～30 ℃流速：0.2～0.6 mL
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min
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1；进样量：1～10 μL；梯度洗脱程序为：0～1 min，5%～9%B; 1～1.6 min，9%～10%B; 1.6～2.0 min，10%～13%B；2～5 min，13%～14%B; 5～8 min，14%B; 8～10 min，14%～30%B; 10～11 min，30%～45%A；11～11.5 min，45%～60%B；11.5～12 min，60%～90%B；12～12.5 min，90～5% B；质谱条件：电喷雾离子源，以正、负离子模式同时扫描检测，扫描范围：100
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1000，毛细管电压2.0～3.0 kV，离子源温度350～500 ℃，脱溶剂气N2，气流900～1000 L
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1，碰撞气体氩气，碰撞气流0.05～0.3 mL
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1，多反应监测定量模式；异槲皮苷对照品储备液的制备：取异槲皮苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.38 mg/mL的溶液；紫云英苷对照品储备液的制备：取紫云英苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.33 mg/mL的溶液；乙酰异槲皮苷对照品储备液的制备：取乙酰异槲皮苷对照品，加50%乙腈水溶液溶解并制成质量浓度为0.30 mg/mL的溶液；混合对照品溶液的制备：分别精密吸取上述各对照品储备液1 mL置于同一个25 mL容量瓶中，50%乙腈水溶液稀释至刻度，得异槲皮苷、紫云英苷、乙酰异槲皮苷浓度分别为4.56、0.40、1.2 μg/mL的混合对照品溶液；供...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈帅，王慧竹，徐畅，
申请(专利权)人：吉林化工学院，
类型：发明
国别省市：