一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，包括以下步骤：1)配制缓冲体系，对样本进行孵育，所述缓冲体系中包含血管紧张素转化酶抑制剂；2)向孵育后的样本中加入内标液和蛋白沉淀剂，对样本进行前处理；3)取经过前处理后的上清液，采用液相色谱质谱联用仪进行检测，采用内标法，结合色谱系统和质谱系统，将进样样品中的物质分离并对血管紧张素I进行定量及定性检测；4)计算单位时间内单位体积的样本中的血管紧张素I的生成速率。本方法的前处理操作简单，无需固相萃取，无需氮吹复溶，且本发明专利技术方法采用液相色谱分离定量，检测速度快，同时保证了检测的灵敏度和可靠性，有利于临床样本的高通量筛查。有利于临床样本的高通量筛查。有利于临床样本的高通量筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法


[0001]本专利技术涉及医学检测
，具体涉及一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法。

技术介绍

[0002]肾素是由肾小球旁细胞产生、贮存、分泌的一种蛋白水解酶。肾素能将血管紧张素原转变为血管紧张素I，血管紧张素I又在血管紧张素转化酶的作用下转化为具有生物活性的血管紧张素II。血管紧张素II是一种有效的升压剂，在调节血压方面发挥着重要作用，同时还作用于肾上腺皮质球状带刺激醛固酮的合成。
[0003]血浆中内源性肾素催化血管紧张素原产生血管紧张素Ⅰ的速率被称为血浆肾素活性(PRA)。中国及其他很多国家的原发性醛固酮增多症诊疗专家共识或内分泌高血压筛查指南，都将血浆醛固酮与肾素活性的比值作为原发性醛固酮增多症的筛查指标。原发性醛固酮增多症是一种最常见的内分泌高血压，且很容易被人们忽视。至少有5％～10％的高血压患者存在原发性醛固酮增多症，在难治性高血压人群中，原发性醛固酮增多症的患病率约为20％，而且，不到25％的原发性醛固酮增多症患者有低血钾，这些患者与其他原发性高血压患者很难区分，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)配制缓冲体系，对样本进行孵育，所述缓冲体系中包含血管紧张素转化酶抑制剂；2)向孵育后的样本中加入内标液和蛋白沉淀剂，对样本进行前处理；3)取经过前处理后的上清液，采用液相色谱质谱联用仪进行检测，采用内标法，结合色谱系统和质谱系统，将进样样品中的物质分离并对血管紧张素I进行定量及定性检测；4)计算单位时间内单位体积的样本中的血管紧张素I的生成速率。2.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤1)中所述样本包括校正样本、质控样本和病人样本，所述孵育是指将孵化液和样本按照2:3的比例混合后，置于96孔板中进行孵化。3.根据权利要求2所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述孵化为在37℃条件下水浴孵化1.5
‑
5小时。4.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述内标液为血管紧张素I内标溶液，所述血管紧张素I内标溶液的浓度为10
‑
200ng/mL；所述蛋白沉淀剂包括有机溶剂、金属盐或强酸。5.根据权利要求4中所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂为含有甲酸的乙腈或含有甲酸的甲醇，所述甲酸的含量为0.1％
‑
10％。6.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述样本的体积为50
‑
500μL。7.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述液相色谱质谱联用仪的色谱条件为：色谱柱为反相柱，进样体积为0.5
‑
50μL；柱温为25
‑
60℃；流速为0.3
‑
2mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；流动相A为甲酸水溶液，流动相B为含有甲酸的甲醇液或含有甲酸的乙腈液。8.根据权利要求7所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述流动相A和流动相B中的甲酸比例为0.01％
‑
1％。9.根据权利要求7所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：流动相A+流动相B＝100％；0
‑
0.5min，流动相B体积百分比维持在0％
‑
40％；0.5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：方焯，刘釜均，耿志华，叶霄伟，顾祁昕，
申请(专利权)人：上海药明奥测医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：