一种基于二维色谱分离测定肽类产品中游离氨基酸的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于二维色谱分离测定肽类产品中游离氨基酸的方法及其应用。本发明专利技术方法主要包括以下步骤：将肽类样品预处理、高效凝胶过滤色谱分离、中心切割即将色谱分离流分中游离氨基酸级分切割收集并浓缩、第二维色谱分离及衍生化反应，以及紫外可见光检测，以获得待测肽类产品中氨基酸的含量。本发明专利技术通过离线二维色谱分离和中心切割去除蛋白肽类食品配料样品中存在的主要成分即肽类对少量游离氨基酸检测的严重干扰，克服了肽的色谱峰与氨基酸的色谱峰重叠或部分重叠的问题，达到准确测定肽类产品中游离氨基酸含量的效果。确测定肽类产品中游离氨基酸含量的效果。确测定肽类产品中游离氨基酸含量的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种基于二维色谱分离测定肽类产品中游离氨基酸的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及游离氨基酸测定领域，特别涉及一种基于二维色谱分离测定肽类产品中游离氨基酸的方法及其应用。

技术介绍

[0002]现有的作为食品配料的蛋白肽类产品的国家标准或行业标准(例如GB/T22729
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2008)中关于肽含量的测定方法，均规定：肽含量＝酸溶蛋白含量
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游离氨基酸含量。由于该类产品中主要成分是蛋白质的酶解产物，即相对分子质量大多为10000以下的肽类混合物，另外还含有少量游离氨基酸。按照现有肽类产品的国标或行标要求，此类产品中肽的含量一般至少70％以上，游离氨基酸含量一般大多为5％上下，至多10％～15％。其中，游离氨基酸含量的测定方法是按照相关肽类产品的国标或行标，将样品用5％TCA或3.5％磺基水杨酸处理后沉淀去除可能存在的大分子蛋白类成分，再采用以下两种色谱方法之一分离检测游离氨基酸，即方法1：采用GB5009.124
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2016的规定的氨基酸分析仪方法，利用阳离子交换色谱法分离，再柱后茚三酮衍生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于二维色谱分离测定肽类产品中游离氨基酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品预处理将待测肽类产品用三氟乙酸溶液或磺基水杨酸溶液溶解，离心或过滤后取上清液，得到预处理后的样品溶液；(2)凝胶色谱分离
①
硅胶基质的凝胶色谱分离：采用硅胶基质的凝胶柱对步骤(1)中得到的预处理后的样品溶液进行色谱分离；其中，色谱分离的条件为：色谱柱：硅胶基质色谱柱；流动相：体积百分比30％～45％的乙腈和体积百分比0.15％～0.25％的三氟乙酸；紫外检测器的检测波长：220nm；流速：0.4～0.6mL/min；柱温：20～35℃；或
②
多糖型凝胶色谱分离：采用多糖型凝胶色谱柱对步骤(1)中得到的预处理后的样品溶液进行色谱分离；其中，色谱分离的条件为：色谱柱：多糖型凝胶色谱柱；流动相：50mmol/L磷酸盐缓冲溶液和0.15～0.25mol/L NaCl溶液，pH6.5～7.2；紫外检测器的检测波长：220nm：流速：0.4～0.6mL/min；柱温：20～35℃；(3)中心切割根据步骤
①
或
②
中的凝胶色谱分离结果进行流分切割收集，收集起点的相对分子质量为220，并依据最后一个色谱峰出完峰的时间确定结束收集时间，收集的次数为3～5次，合并流分再冷冻干燥，然后用pH 2.2的柠檬酸钠缓冲液溶解定容，膜过滤，得到待测游离氨基酸溶液；(4)第二维色谱分离分析及紫外可见光检测：将步骤(3)中得到的游离氨基酸溶液采用氨基酸自动分析仪或反相HPLC色谱进行分离，再采用紫外可见光进行检测，得到待测肽类产品中氨基酸的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的采用硅胶基质的凝胶色谱分离收集流分的时间为24.5min～30min；步骤(3)中所述的采用多糖型凝胶色谱分离收集流分的时间为43min～54min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的第二维色谱分离分析及紫外可见光检测通过如下任一种方式实现：(I)将步骤(3)中得到的游离氨基酸溶液利用氨基酸自动分析仪采用阳离子交换色谱分离模式进行分离，并采用柱后茚三酮衍生化，然后进行紫外可见光检测，获得待测肽类产品中氨基酸的含量；其中，紫外可见光检...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鸿泽，杨秀，戴军，
申请(专利权)人：广州广电计量检测无锡有限公司，
类型：发明
国别省市：