用于检测HLA-B*15：02等位基因的引物组及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及用于检测HLA

【技术实现步骤摘要】
用于检测HLA
‑
B*15：02等位基因的引物组及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及用于检测HLA
‑
B*15：02等位基因的引物组及其应用。

技术介绍

[0002]癫痫是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病，是一种主要的全球性疾病，尤其在资源匮乏和收入低的亚洲国家，癫痫患病率较高。
[0003]近年来在治疗癫痫和外周神经痛等方面广泛应用卡马西平，其具有价格低、疗效好的特点。但是研究发现，部分抗癫痫药物会引起超敏反应，例如，服用马卡西平引起的不良反应包括严重的皮肤病
‑
Steven
‑
Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)。SJS/TEN的发病率从药物暴露的千分之一到万分之一不等，死亡率高达35％。药物遗传学研究已经发现了抗癫痫药物诱导的不良反应与HLA
‑
B*15:02等位基因之间存在很强的关联性，且HLA
‑
B*15:02等位基因主要见于亚洲人群。作为预防措施，美国食品和药物管理局(FDA)强制要求对高危人群用药前进行等位基因的筛查。
[0004]HLA
‑
B*15:02等位基因的常规检测方法主要为PCR扩增荧光检测法，其具有准确度高的特点，但需要昂贵的实验室设备、熟练的实验室人员，且必须在实验室中完成。此外，PCR扩增前，提取DNA是必需的步骤。在临床检测中，HLA检测从样本收集、运输到检测和向临床医生报告结果，有很长的周转时间(几天至一周)，影响了有效的治疗策略，尤其对癫痫发作期间或癫痫发作后的快速给药构成了障碍，以上原因极大限制了卡马西平在普通医疗机构的大面积推广。
[0005]虽然目前LAMP等温扩增技术在生物安全行业也使用广泛，尤其用于快速筛查方面，但因为假阳性高，在灵敏度和特异性方面无法做到和PCR一样高的精度，所以目前在医学检测行业没有广泛使用。
[0006]为了克服这些障碍，需要一种快速、准确、便携式、操作简便的针对HLA
‑
B*15:02基因的体外快速检测方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种用于检测HLA
‑
B*15：02等位基因的引物组。
[0008]本专利技术的再一目的在于提供上述引物组的应用。
[0009]本专利技术的再一目的在于提供含有上述引物探针组的试剂盒。
[0010]本专利技术的再一目的在于提供检测个体中HLA
‑
B*15：02分型的方法。
[0011]根据本专利技术具体实施方式的检测个体中HLA
‑
B*15：02等位基因的引物组，包括引物组A和引物组B，
[0012]针对HLA
‑
B*15:02基因的两个外显子，外显子2和外显子3，分别设计了LAMP反应引物探针组A和引物探针组B，LAMP反应中有4条特异性引物(包括正向和后外引物(F3和B3)，正向和后内引物(FIP和BIP)，以及环状引物(FL和BL))，对靶基因上6个区域进行识别，保证
了LAMP反应的高度扩增性和特异性，
[0013]其中，引物组A的引物的核苷酸序列如下：
[0014]SEQ ID NO.1:5
’‑
TGAGGTTCGACAGCGACG
‑3’
,
[0015]SEQ ID NO.2:5
’‑
TCACCGGCCTCGCTCT
‑3’
,
[0016]SEQ ID NO.3:5
’‑
TCCGGTCCCAATACTCCGGCTTTTCCGCGAGTCCGAGGAT
‑3’
,
[0017]SEQ ID NO.4:5
’‑
CACACAGATCTCCAAGACCTTTTAGTAGCCGCGCAGGTT
‑3’
,
[0018]SEQ ID NO.5:5
’‑
TCCTGCTCTATCCATGGCG
‑3’
,
[0019]SEQ ID NO.6:5
’‑
AACACACAGACTTACCGAGAGA
‑3’
,
[0020]引物组B的引物的核苷酸序列如下：
[0021]SEQ ID NO.8:5
’‑
GATTACATCGCCCTGAACGA
‑3’
,
[0022]SEQ ID NO.9:5
’‑
CCCACTGCCCCTGGTA
‑3’
,
[0023]SEQ ID NO.10:5
’‑
TCACGGGCCGCCTCCCACTTTTGACCTGAGCTCCTGGACC
‑3’
,
[0024]SEQ ID NO.11:5
’‑
TGAGAGCCTACCTGGAGGTTTTCGCTGCAGCGTCTCCTT
‑3’
,
[0025]SEQ ID NO.12:5
’‑
TGATCTGAGCCGCCGTGTC
‑3’
,
[0026]SEQ ID NO.13:5
’‑
GTGGCTCCGCAGATACCTGG
‑3’
。
[0027]本专利技术提供用于检测个体中HLA
‑
B*15：02等位基因的引物探针组的应用，具体的，在检测个体中HLA
‑
B*15：02基因型试剂盒中的应用，或者，在检测个体中HLA
‑
B*15：02基因型方法中的应用。
[0028]根据本专利技术具体实施方式的检测个体中HLA
‑
B*15：02基因型方法，所述方法包括使用上述引物探针组，并通过环介导等温扩增
‑
生物传感芯片
‑
人工智能技术平台对待测样品进行检测的步骤。
[0029]其中，生物传感芯片是利用生物传感器为生物学组件，作为主要功能性元件，能够感受规定的被测量物质并按照一定规律将其转换成可识别信号的器件或装置。根据生物传感器的输出信号可分为比色生物传感器、荧光生物传感器、电化学生物传感器以及其他种类的生物传感器。
[0030]LAMP电化学生物传感器按照电化学活性物质与靶DNA结合特点的不同可为结合探针和嵌合剂两种类型。优选的，本专利技术使用结合探针，生物探针的序列与等位基因序列互补，能与LAMP扩增产物互补结合后让生物传感芯片的阻抗发生特定变化，将LAMP等温扩增的化学信号转化为电信号。
[0031]优选的，本专利技术中生物传感芯片可以采用IDE生物传感器芯片，IDE生物传感芯片上预先结合生物探针，在生物探针与扩增片段结合后，会影响IDE生物传感芯片的阻抗特性，IDE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测HLA
‑
B*15：02等位基因的引物组，其特征在于，所述引物组包括引物组A和引物组B，其中，引物组A中的引物的核苷酸序列如下：SEQ ID NO.1:5
’‑
TGAGGTTCGACAGCGACG
‑3’
,SEQ ID NO.2:5
’‑
TCACCGGCCTCGCTCT
‑3’
,SEQ ID NO.3:5
’‑
TCCGGTCCCAATACTCCGGCTTTTCCGCGAGTCCGAGGAT
‑3’
,SEQ ID NO.4:5
’‑
CACACAGATCTCCAAGACCTTTTAGTAGCCGCGCAGGTT
‑3’
,SEQ ID NO.5:5
’‑
TCCTGCTCTATCCATGGCG
‑3’
,SEQ ID NO.6:5
’‑
AACACACAGACTTACCGAGAGA
‑3’
,引物组B中的引物的核苷酸序列如下：SEQ ID NO.8:5
’‑
GATTACATCGCCCTGAACGA
‑3’
,SEQ ID NO.9:5
’‑
CCCACTGCCCCTGGTA
‑3’
,SEQ ID NO.10:5
’‑
TCACGGGCCGCCTCCCACTTTTGACCTGAGCTCCTGGACC
‑3’
,SEQ ID NO.11:5
’‑
TGAGAGCCTACCTGGAGGTTTTCGCTGCAGCGTCTCCTT
‑3’
,SEQ ID NO.12:5
’‑
TGATCTGAGCCGCCGTGTC
‑3’
,SEQ ID NO.13:5
’‑
GTGGCTCCGCAGATACCTGG
‑3’
。2.根据权利要求1所述的用于检测HLA
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：关国良，陈建雄，陈薛名，陈巧玲，吴婧，
申请(专利权)人：常州先趋医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：