检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，特别涉及一种检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用，所述引物探针组合包括1对引物、探针PC和探针PG；所述试剂盒中包含上述引物探针组合，用于检测在检测COQR2基因rs4693075多态性位点。本发明专利技术的试剂盒检测人COQ2基因多态性，每次可以检测96个样品，且不需要进行PCR产物的后续分析，在节省了检测成本的同时，大大缩短了检测周期，提高了检测效率。率。率。

【技术实现步骤摘要】
检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及一种引物探针组合及其应用，尤其涉及一种检测COQR2基 因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]随着社会的进步和发展，人们的生活水平日益提高，饮食习惯也随之发 生了改变，长期、过多的脂肪摄入导致体内血脂水平异常增高。血脂水平异 常会引起和加重心脑血管疾病，已成为威胁人类健康的重要因素。据文献报 道，我国现有心脑血管疾病患者2.9亿例，其中脑卒中患者1 300万例、冠 心病患者1100万例、肺原性心脏病患者500万例、心力衰竭患者450万例、 风湿性心脏病患者250万例、先天性心脏病患者200万例、高血压患者2.7 亿例，心脑血管疾病患病率正在呈持续升高的趋势。他汀类药物作为临床上 首选的降脂药物，在血脂异常管理中发挥着极其重要的作用。
[0003]他汀类药物为3
‑
羟基
‑3‑
甲基戊二酰辅酶A(HMG－CoA)还原酶抑制 剂，作为调脂药物，并用于心血管疾病和中风的一级和二级预防。然而，由 于个体间的差异，在临床治疗过程中存在一些问题。随着精准医疗理念的提 出，他汀类药物基因组学在血脂异常管理中的应用越来越受到关注。近年来， 研究药物基因组学来预测药物不良反应这方面也开始受到众多学者的重视。 药物基因组学是从已知基因对药物效应的影响，确定药物作用的靶点，研究 从表型到基因型的药物反应个体多样性，其核心是药物反应的遗传多态性， 即单核苷酸多态性(SNP)。通过研究分析遗传对药物代谢酶、对药物受体以 及对药物转运蛋白的影响，指导临床合理用药，提高用药的有效性和安全性。
[0004]研究表明，COQ2基因多态性与使用阿托伐他汀后发生横纹肌溶解的不 良反应风险相关。COQ2基因用于编码羟基聚戊烯基转移酶，而羟基聚戊烯 基转移酶是合成辅酶Q10过程中一种重要的酶，其中，最常见的SNP位点 是rs4693075，人群中的该基因型主要分为CC基因型、CG基因型和GG基 因型这3种。与GG基因型或CG基因型患者相比，CC基因型患者发生他 汀类药物相关肌肉症状的风险明显较低。因此，在临床用药前，进行COQ2 基因多态性检测，对于携带基因型为CG或GG的患者，可考虑换药或减少 阿托伐他汀的剂量，同时密切监测肌病的发生。这对于知道阿托伐他汀的用 量具有很大的指导意义。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供一种检测COQR2基因多态性位点SNP分型 的引物探针组合、试剂盒及其应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0007]一种检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合，检测 COQR2基因rs4693075多态性位点SNP分型的引物探针组合的正向引物 如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ ID NO：2所示，探针PC如SEQ IDNO：3所示，探针PG如SEQ ID NO：4所示。
[0008]一种包含上述检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合的 试剂盒。
[0009]进一步的，所述试剂盒中含有引物探针组合液；
[0010]引物探针组合液中正向引物、反向引物、探针PC、探针PG的浓度比为 1：1：1：0.2。
[0011]进一步的，所述试剂盒中的试剂还包括反应液。
[0012]进一步的，反应液是由0.2体积份Taq DNA聚合酶、10体积份buffer Mixfor SNP 3#、3体积份Mega buffer Mix for SNP和3.8体积份ddH2O配制而得。
[0013]一种上述试剂盒在检测COQR2基因rs4693075多态性位点中的应用。
[0014]进一步的，所述应用的具体步骤是取待测样本核酸分别与试剂盒中的试 剂，振荡混匀，离心，制成待测反应体系，再进行PCR扩增反应，每个反 应获得2个扩增曲线图和CT值，再根据所得扩增曲线图和CT值判断待测 样本核酸的基因型。
[0015]进一步的，所述待测反应体系为17μL反应液、1μL引物探针组合液 和2μL待测样本核酸；
[0016]引物探针组合液中正向引物、反向引物、探针PC、探针PG的浓度比为 1：1：1：0.2；
[0017]反应液是由0.2体积份Taq DNA聚合酶、10体积份buffer Mix for SNP 3#、3体积份Mega buffer Mix for SNP和3.8体积份ddH2O配制而得。
[0018]进一步的，当FAM的CT值≤38且HEX的CT值＞38/无CT值时，则 基因型判定为GG型；
[0019]当HEX的CT值≤38且FAM的CT值＞38/无CT值时，则基因型判定 为CC型；
[0020]当FAM的CT值≤38且HEX的CT值≤38时，则基因型判定为CG型；
[0021]当FAM的CT值＞38/无CT值且HEX的CT值＞38/无CT值时，则需 复测。
[0022]进一步的，PCR扩增反应的条件为95℃预变性2min，再经95℃变性5s、 58℃退火15s，共40个循环。
[0023]本专利技术的检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂 盒及其应用的有益效果为：
[0024]本专利技术的检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合及其试 剂盒能够采用荧光定量PCR检测人COQR2(rs4693075)基因，其准确率高， 与一代测序相比，准确率为100％；检出限低于现有市面产品，为0.5ng/μL； 精密度CV值≤2.59％；抗干扰性强，其中，血红素、甘油三酯、胆红素等 对检测结果均没有影响，且与大肠埃希氏菌核酸、金黄色葡萄球菌核酸、阴 沟肠杆菌核酸等也没有交叉反应；
[0025]利用本专利技术的试剂盒检测人COQ2基因多态性，每次可以检测96个样 品，且不需要进行PCR产物的后续分析，在节省了检测成本的同时，大大 缩短了检测周期，提高了检测效率，且本专利技术的试剂盒异性强，不会受到其 他基因的干扰，降低了PCR产物污染引起假阳性的风险，并且结果判读更 容易；
[0026]通过优化试剂盒，使整个试剂盒的应用过程简单、快速，且PCR程序 只需50min，成本较低，检测速度明显快于一代测序检测；
[0027]本专利技术的试剂盒对每个样本的需求量低，只需要10～50ng DNA即可进 行检测；
[0028]本专利技术的试剂盒可以辅助对他汀类药物用药进行判断，以准确判断用药 情况，为疾病诊断提供充足的依据，也为治疗方案提供坚实的基础，具有很 好的临床应用价值。
附图说明
[0029]图1是本专利技术实施例1中第一组引物探针组合筛选实验结果图；
[0030]图2是本专利技术实施例1中第二组引物探针组合筛选实验结果图；
[0031]图3是本专利技术实施例1中第三组引物探针组合筛选实验结果图；
[0032]图4是本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合，其特征在于，检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合的正向引物如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ ID NO：2所示，探针PC如SEQ ID NO：3所示，探针PG如SEQ ID NO：4所示。2.包含权利要求1所述的检测COQR2基因多态性位点SNP分型的引物探针组合的试剂盒。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有引物探针组合液；引物探针组合液中正向引物、反向引物、探针PC、探针PG的浓度比为1：1：1：0.2。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂还包括反应液。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，反应液是由0.2体积份Taq DNA聚合酶、10体积份buffer Mix for SNP 3#、3体积份Mega buffer Mix for SNP和3.8体积份ddH2O配制而得。6.权利要求2
‑
5中任一项所述的试剂盒在检测COQR2基因rs4693075多态性位点中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用的具体步骤是取待测样本核酸分别与试剂盒中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔晓颖，李彦鹏，王文轩，陈江坡，李佳瑛，李都悦，胖铁良，
申请(专利权)人：廊坊诺道中科医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：