本发明专利技术涉及基因工程技术领域，特别涉及一种检测TORCH五种病原体的引物探针组合、试剂盒及其应用，所述引物探针组合包括5对引物及其对应的探针；所述试剂盒中包含上述引物探针组合，用于检测在检测/辅助检测TORCH五种病原体。本发明专利技术的引物探针组合对相应的TORCH五种病原体的灵敏度高于现有的引物探针组合；本发明专利技术的试剂盒能够分为2组，同时检测出五种病原体，且检测方法操作简便、灵敏高、特异性好、用时短，具有很好的临床应用价值。具有很好的临床应用价值。具有很好的临床应用价值。
【技术实现步骤摘要】
ID NO：11所示，探针如SEQ ID NO：12所示；
[0013]检测单纯疱疹病毒II型(HSV2)的正向引物如SEQ ID NO：13所示，反向引物如SEQ ID NO：14所示，探针如SEQ ID NO：15所示。
[0014]一种包含上述检测TORCH五种病原体的引物探针组合的试剂盒。
[0015]进一步的，所述试剂盒的检测分为2组，每组4个通道，分别为：第一组检测弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)和人巨细胞病毒(CMV)；第二组检测单纯疱疹病毒I型(HSV1)和单纯疱疹病毒II型(HSV2)。
[0016]进一步的，所述试剂盒中的试剂包括：2组引物探针组合液、2
×
PCR buffer、DNA聚合酶和逆转录酶。
[0017]进一步的，2组中的任一单组所述引物探针组合液中含有的任一引物的浓度均为5μmol/L、任一探针的浓度均为2.5μmol/L。
[0018]一种上述试剂盒在检测/辅助检测五种TORCH病原体中的应用。
[0019]进一步的，所述应用的具体步骤是取待测样本分别与试剂盒中的试剂混合制成2组反应体系，再分别加入核酸扩增反应液中稀释，进行PCR扩增反应，获得2组扩增曲线图和CT值，再根据所得2组扩增曲线图和CT值判断待测样本呈阳性/阴性。
[0020]进一步的，单组所述反应体系为待测样本2μL、2
×
PCR buffer 10μL、DNA聚合酶0.5μL、逆转录酶0.5μL和单组引物探针组合液2μL，补DEPC水至20μL。
[0021]进一步的，所述应用过程中，还需对阳性质控品和阴性质控品进行检测。
[0022]进一步的，PCR扩增反应的条件为50℃预变性10min，95℃变性5min，1个循环，95℃变性15s、60℃退火延伸并收集荧光55s，40个循环。
[0023]本专利技术的检测TORCH五种病原体的引物探针组合、试剂盒及其应用的有益效果为：
[0024]本专利技术的引物探针组合对相应的病原体检测的灵敏度高于现有的引物探针组合；
[0025]本专利技术的试剂盒能够分2组通道，同时检测出五种TORCH病原体，且检测方法操作简便、灵敏高、特异性好、用时短，具有很好的临床应用价值。
[0026]本专利技术的试剂盒能够实现样本的多重检测，可对样本进行批量检测。
附图说明
[0027]图1是本专利技术实施例1中TOX引物探针组合单重PCR筛选实验结果图；
[0028]图2是本专利技术实施例1中RV引物探针组合单重PCR筛选实验结果图；
[0029]图3是本专利技术实施例1中CMV引物探针组合单重PCR筛选实验结果图；
[0030]图4是本专利技术实施例1中HSV1引物探针组合单重PCR筛选实验结果图；
[0031]图5是本专利技术实施例1中HSV2引物探针组合单重PCR筛选实验结果图；
[0032]图6是本专利技术实施例1中第一组引物探针组合混筛实验结果图；
[0033]图7是本专利技术实施例1中第二组引物探针组合混筛实验结果图；
[0034]图8是本专利技术实施例3中试剂盒对TOX病原体的灵敏度测试结果图；
[0035]图9是本专利技术实施例3中试剂盒对RV病原体的灵敏度测试结果图；
[0036]图10是本专利技术实施例3中试剂盒对CMV病原体的灵敏度测试结果图；
[0037]图11是本专利技术实施例3中试剂盒对HSV1病原体的灵敏度测试结果图；
[0038]图12是本专利技术实施例3中试剂盒对HSV2病原体的灵敏度测试结果图；
[0039]图13是本专利技术实施例4中试剂盒对TOX病原体的检出限稳定性测试结果图；
[0040]图14是本专利技术实施例4中试剂盒对RV病原体的检出限稳定性测试结果图；
[0041]图15是本专利技术实施例4中试剂盒对CMV病原体的检出限稳定性测试结果图；
[0042]图16是本专利技术实施例4中试剂盒对HSV1病原体的检出限稳定性测试结果图；
[0043]图17是本专利技术实施例4中试剂盒对HSV2病原体的检出限稳定性测试结果图。
具体实施方式
[0044]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。
[0045]实施例1引物探针组合的设计和筛选
[0046]一)引物探针组合的设计
[0047]1)引物探针组合设计
[0048]通过从中英文文献中查找TORCH五种病原体的特异性基因，通过NCBI查询下载五种靶标病原体的完整基因/部分片段。下载完成后，用DNAMAN软件进行多条序列的比对，确定特异性片段和最保守的区域片段(多条序列重合的区域)
[0049]其中特异性片段分别为：
[0050]弓形虫(TOX)：
[0051]CCACAGGCGAGCTCGCCTGTGCTTGGAGCCACAGAAGGGACAAAAGTCGAGGGGGACTACAGACGCGATGCCGCTCCTCCCACCGTCTTGGAGGAGAGATTCAGGACTGTAGATGAAGGCGAGGGTGAGGATGAGGGGGTGGCGTGGTTGGGAAGCGACGAGAGTCGGAGAGGAAGAAGATGTTTCCGGTCTGGCTGCTTTTCCTGGAGGGTGAAAAAGAGACACCGGAATGCGATCTAGACGAGACGACGCTTTCCTCGTGGTGATGGCGGAGAGAATTGAAGAGTGGAGAAGAGGGCGAGGGAGACAGAGTCGGAGGTCTGGACGAAGGGAGGAGGA GGCGTAAGAA AGGAATCCAAATGCACTG；
[0052]风疹病毒(RV)：
[0053]GCCTACTCGTCCGGCGGGTACGCGCAGCTGGCGTCCTATTTTAACCCTGGCGGCAGCTACTACAAGCAATACCACCCCACCGCGTGCGACGTTGAACCTGCCTTTGGACACAGCGACGCGGCCTGCTGGGGCTTCCCCACCGACACCGTGATGAGTGTGTTTGCCCTCGCCAGCTACGTCCAGCACCCTGACAAGACCGTCAGGGTCAAGTTCCACACGGAAACCAGAACCGTCTGGCAGCTCTCCGTGGCCGGCGTGTCGTGCAACGTCACGACCGAACATCCGTTCTGCAACACGCCGCACGGACAACTCGAGGTCCAGGTCCCGCCCGACCCCGGCGACCTGGTTGAGTACATCATG；
[0054]人巨细胞病毒(CMV)：
[0055]AAAAAATATACCCAGACGGAAGAGAAATTCA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测TORCH五种病原体的引物探针组合，其特征在于，检测弓形虫的正向引物如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ ID NO：2所示，探针如SEQ ID NO：3所示；检测风疹病毒的正向引物如SEQ ID NO：4所示，反向引物如SEQ ID NO：5所示，探针如SEQ ID NO：6所示；检测人巨细胞病毒的正向引物如SEQ ID NO：7所示，反向引物如SEQ ID NO：8所示，探针如SEQ ID NO：9所示；检测单纯疱疹病毒I型的正向引物如SEQ ID NO：10所示，反向引物如SEQ ID NO：11所示，探针如SEQ ID NO：12所示；检测单纯疱疹病毒II型的正向引物如SEQ ID NO：13所示，反向引物如SEQ ID NO：14所示，探针如SEQ ID NO：15所示。2.包含权利要求1所述的检测TORCH五种病原体的引物探针组合的试剂盒。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测分为2组，分别为：第一组检测弓形虫、风疹病毒和人巨细胞病毒；第二组检测单纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂包括：2组引物探针组合液、2
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PCR buff...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜锦然，黄仕艺，白立宽，李彦鹏，乔晓颖，胖铁良，
申请(专利权)人：廊坊诺道中科医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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