用于早期诊断急性心肌梗死的试剂及其应用制造技术

本申请涉及医学分子生物学技术领域，具体涉及用于早期诊断急性心肌梗死的试剂及其应用。本申请的试剂用以测定miR

【技术实现步骤摘要】
用于早期诊断急性心肌梗死的试剂及其应用


[0001]本申请涉及医学分子生物学
，具体涉及用于早期诊断急性心肌梗死的试剂及其应用。

技术介绍

[0002]急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉狭窄和堵塞引起的心肌急性、持续性缺血缺氧，是最常见的一类冠状动脉综合征。急性心肌梗死的发生涉及多种病理和生理性因素，是一种复杂、危急疾病，疾病死亡率和致残率居高不下。对急性心肌梗死的早期诊断能够减少患者等待时间，把握最佳治疗时机，对保护心功能、减轻心肌损伤和挽救生命至关重要。
[0003]目前传统的急性心肌梗死早期诊断标志物包括血清肌红蛋白（MYO）、肌钙蛋白（cTn）等，已经广泛应用在临床一线辅助急性心肌梗死的早期诊断。肌钙蛋白I/T被认为是诊断急性心肌梗死的“金标准”，是当前临床公认的急性心肌梗死患者早期诊断标志物。急性心肌梗死患者的心肌细胞缺血坏死后，其细胞的完整性受到破坏，心肌细胞内的物质包括MYO、cTn等会不断释放到外周血液中，从而使心肌梗死得以检测。但是，cTnI/cTnT作为急性心肌梗死的标志物在诊断特异性方面还存在不足，其他疾病例如如急性缺血性中风，慢性肾功能衰竭和感染性休克等均可以引起血液cTnI/cTnT升高，因此亟待发现新的急性心肌梗死特异性早期诊断标志物。
[0004]MicroRNA（简称miRNA或miR）是22个核苷酸长的非编码RNA，通过靶向靶基因的3
’
UTR抑制或者降解靶基因的表达，从而达到调控基因表达的目的。每个miRNA可以针对多个mRNAs，每个mRNA可以作为不同miRNAs的靶标，因此它们的作用可能是非常复杂的。许多miRNAs具有组织特异性分布，在生理和病理条件下，它们似乎在细胞功能中都起着关键作用。事实上，在心肌梗死(MI)、心肌肥大、心力衰竭、急性后肢缺血、以及暴露于缺氧环境的孤立细胞中，都发现了一些miRNAs组织水平的显著变化。
[0005]最近的研究表明，人类和动物的体循环中都存在一些miRNAs，它们可能与外泌细胞和微粒有关。一些循环miRNAs的水平在怀孕期间、在各种癌症患者体内、和在对乙酰氨基酚引起的肝损害中都有显著变化。有关循环miRNAs和心脏病的研究表明，在异丙肾上腺素诱导的大鼠心脏损伤模型和心力衰竭患者中有一种调节作用。根据这些发现，人们假设至少在某些病理状况下，体循环中的miRNAs可能反映了组织损伤，因此，它们可被视为临床诊断这些相关疾病的生物标志物。
[0006]然而，有关miRNA在心血管疾病中的作用研究起步较晚，虽然现在陆续有研究发现miRNA标志物可能可以作为心肌梗死的生物标记物，但鉴于miRNA在其他疾病中也会出现升高或降低，并不能单一被特指为心肌梗死的标志物，进而导致目前使用miRNA作为心肌梗死早期诊断标志物的准确性较低。

技术实现思路

[0007]为了提高心肌梗死早期诊断的准确度，本申请提供了用于早期诊断急性心肌梗死
No.8所示的下游引物；所述用于检测miR
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133b的引物具有如SEQ ID No.9所示的上游引物和如SEQ ID No.10所示的下游引物；所述用于检测miR
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5p的引物具有如SEQ ID No.11所示的上游引物和如SEQ ID No.12所示的下游引物。
[0016]通过采用上述技术方案，本申请上述引物与每种miRNA一一适配，能使miRNA准确表达，具有较高的表达量，具有良好的检测准确度。
[0017]第二方面，本申请提供一种检测miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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5p基因表达量的试剂在制备用于早期诊断急性心肌梗死的产品中的应用。
[0018]优选的，所述产品包括试剂盒、芯片、试纸和高通量测序平台。
[0019]优选的，所述试剂盒包括qPCR试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、ELISA试剂盒和化学发光检测试剂盒。
[0020]通过采用上述技术方案，本申请将用于检测miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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499
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5p表达量的试剂适用于制备相应的各种试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台等，其能用于早期诊断急性心肌梗死，具有较高的检测准确度和灵敏度。
[0021]第三方面，本申请提供一种检测miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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5p基因表达量的产品在制备用于早期诊断急性心肌梗死的诊断系统中的应用。
[0022]优选的，所述诊断系统包括：检测模块，包括用以检测miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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5p基因表达量的产品；结果分析模块，输入所述产品检测得到的miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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5p的基因表达量，分析急性心肌梗死的可能性，输出结果。
[0023]通过采用上述技术方案，本申请将用于检测miR
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1、miR
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133a、miR
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133b和miR
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5p表达量的产品运用于诊断系统中，借助分析模块实现早期诊断急性心肌梗死的自动化检测，能降低人工误差，进一步提高的检测准确度和灵敏度。
附图说明
[0024]图1是ST段抬高心肌梗死（STEMI）患者血浆miRNA组合标志物的表达差异倍数的柱状图，其中横坐标中的“control”表示对照组；图2是ST段抬高心肌梗死（STEMI）患者血浆miRNA组合标志物和肌钙蛋白I（cTnI）表达值的折线图，其中纵坐标的“fold change/fold max”表示“倍数变化/最大倍数”；图3是ST段抬高心肌梗死（STEMI）患者血浆单个miRNA标志物以及miRNA组合标志物的准确率的柱状图。
具体实施方式
[0025]本申请使用的术语“标志物”一般是指用于临床诊断的具有特异性生物学特性、生物化学特征或者方面的分子指示物，其可用于确定存在或不存在特定疾病或状况和/或特定疾病或状况的严重程度。其和“生物标志物”、“基因标志物”可以通用。
[0026]本申请使用的术语“差异表达”或“表达差异”表示不同样品中相同的一种或多种
生物标志物的表达水平比较，经测定RNA的量或水平的差异。差异表达可以如本文所述和本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于早期诊断急性心肌梗死的试剂，其特征在于，用以测定如下miRNA标志物的基因表达量：（a）miR
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1；（b）miR
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133a；（c）miR
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133b；（d）miR
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5p。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述miR
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1的核苷酸序列包括如SEQ ID No.1所示的片段或其变体，所述miR
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133a的核苷酸序列包括如SEQ ID No.2所示的片段或其变体，所述miR
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133b的核苷酸序列包括如SEQ ID No.3所示的片段或其变体，所述miR
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5p的核苷酸序列包括如SEQ ID No.4所示的片段或其变体。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，包括如下引物：（A）用于检测miR
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1的引物；（B）用于检测miR
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133a的引物；（C）用于检测miR
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133b的引物；（D）用于检测miR
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5p的引物。4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：所述用于检测miR
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1的引物具有如SEQ ID No.5所示的上游引物和如SEQ ID No.6所示的下游引物；所述用于检测miR
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133a的引物具有如SEQ ID No.7所示的上游引物和如SEQ ID No.8所示的下游引物；所述用于检测miR
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133b的引物具有如SEQ ID No.9所示的上游引物和如SEQ ID No.10所示的下游...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海军，王琳，石彩云，
申请(专利权)人：普十生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：