乙肝抗体片段的制备方法、乙肝抗体片段、试剂盒及应用技术

本申请属于医疗器械技术领域，具体公开了本申请提供的乙肝抗体片段的制备方法、乙肝抗体片段、试剂盒及应用，所述制备方法包括以下步骤：在乙肝抗体溶液中加入胃蛋白酶，二硫赤酰糖醇和2

【技术实现步骤摘要】
乙肝抗体片段的制备方法、乙肝抗体片段、试剂盒及应用


[0001]本申请属于抗体及其制备
，更具体地说，它涉及一种乙肝抗体片段的制备方法、乙肝抗体片段、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2～6个月，当丙氨酸氨基转移酶升高前2～8周时，可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。因此快速检测乙肝病毒是临床需要。
[0003]但在医疗实践中，现有的乙肝抗体在应用于检测时，经常出现一些副反应，例如，非特异性结合导致临床出现假阳性诊断等。

技术实现思路

[0004]基于此，为了减少假阳性的出现，本申请提供一种乙肝抗体片段的制备方法，由该方法制备出的乙肝抗体片段应用于乙肝抗原检测时，能够降低假阳性的出现。
[0005]本申请是通过以下方案实现的：本申请提供一种乙肝抗体片段的制备方法，其包括以下步骤：在乙肝抗体溶液中加入胃蛋白酶，二硫赤酰糖醇和2
‑
巯基乙醇，第一次温育；再加入甘氨酸，第二次温育后进行纯化。
[0006]本申请通过利用胃蛋白酶消化乙肝抗体从而形成乙肝抗体片段，将乙肝抗体片段应用于乙肝抗原检测时，假阳性明显降低。而且，本申请在制备乙肝抗体片段时，加入了二硫赤酰糖醇和2
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巯基乙醇，能够显著促进胃蛋白酶的作用速率。
[0007]在本申请的一个具体实施方式中，所述二硫赤酰糖醇的加入量为1
‑
2g/L。例如，二硫赤酰糖醇的加入量为1g/L、1.2g/L、1.5g/L、1.8g/L或2g/L等。
[0008]在本申请的一个具体实施方式中，所述二硫赤酰糖醇的加入量为1.5g/L。
[0009]在本申请的一个具体实施方式中，所述2
‑
巯基乙醇的加入量为0.2
‑
0.5g/L。例如，2
‑
巯基乙醇的加入量为0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、或0.5g/L等。
[0010]在本申请的一个具体实施方式中，所述2
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巯基乙醇的加入量为0.3g/L。
[0011]在本申请的一个具体实施方式中，所述甘氨酸的加入量为3
‑
3.5g/L。例如，所述甘氨酸的加入量为3g/L、3.1g/L、3.2g/L、3.3g/L、3.4g/L或3.5g/L等。
[0012]在本申请的一个具体实施方式中，按照乙肝抗体的重量计，所述胃蛋白酶的加入量为0.5
‑
2U/ug。例如，所述胃蛋白酶的加入量为0.5U/ug、0.8U/ug、1.0U/ug、1.2U/ug、1.5U/ug、1.8U/ug或2U/ug等。
[0013]在本申请一个具体实施方式中，所述胃蛋白酶的加入量为1U/ug。
[0014]在本申请一个具体实施方式中，所述胃蛋白酶先溶于柠檬酸缓冲液中，调整胃蛋
白酶溶液的pH值为1.5
‑
2.5，再将胃蛋白酶溶液加入到乙肝抗体溶液中。
[0015]在本申请的一个具体实施方式中，所述胃蛋白酶溶液的pH值为1.5、2.0或2.5。
[0016]在本申请的一个具体实施方式中，所述胃蛋白酶溶液的pH值为2.0。
[0017]在本申请的一个具体实施方式中，所述第一次温育的时间为15
‑
25min。例如，第一温育时间为15min、18min、20min、22min或25min。
[0018]在本申请的一个具体实施方式中，所述第一次温育的时间为20min。
[0019]在本申请的一个具体实施方式中，所述第二次温育的时间为8
‑
13min。例如，第二次温育的时间为8min、9min、10min、11min、12min或13min。
[0020]在本申请的一个具体实施方式中，所述第二次温育的时间为10min。
[0021]在本申请的一个具体实施方式中，所述纯化为利用proteinG柱进行纯化。
[0022]在本申请的一个具体实施方式中，所述乙肝抗体为市售产品。
[0023]在本申请的一个具体实施方式中，所述乙肝抗体先放入透析袋中进行透析。
[0024]本申请另一方面提供一种乙肝抗体片段，所述乙肝抗体片段通过上述制备方法制备而得。
[0025]本申请另一方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括上述所述的乙肝抗体片段。
[0026]本申请又一方面提供上述所述的乙肝抗体片段在制备用于检测乙肝抗原试剂中的应用。
[0027]本申请提供的乙肝抗体片段的制备方法至少具有以下有益效果之一：本申请提供的乙肝抗体片段的制备方法，其所制备出的乙肝抗体片段应用于检测乙肝抗原时，能够显著减低假阳性的产生以提高检测结果的准确性。
附图说明
[0028]图1为本申请实施例中提供的凝胶电泳结果图。
[0029]其中，1表示实施例1中的试剂制备的试剂盒；CK表示对比例1中的试剂制备的试剂盒；M表示Marker；原抗体表示没有没有酶切的抗体。
具体实施方式
[0030]除非另有定义，本申请中使用的所有技术和科学术语具有与本申请所述
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0031]下面将结合本申请实施例，对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0032]本申请提供的乙肝抗体片段的制备方法，包括以下步骤：在乙肝抗体溶液中加入胃蛋白酶，二硫赤酰糖醇和2
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巯基乙醇，第一次温育；再加入甘氨酸，第二次温育后进行纯化。通过利用胃蛋白酶消化乙肝抗体以提高抗体的亲和力，减少非特异性结合。
[0033]实施例1 乙肝抗体片段的制备
本实施例中以以下工艺参数为例进行说明。
[0034]1. 将胃蛋白酶（北京索莱宝，货号：P8160，10000U/mg）用柠檬酸缓冲液（0.06mol/L pH4.8）稀释成1mg/ml，用浓盐酸调整pH值为2.0，备用。
[0035]2. 取2ml的乙肝抗体（菲鹏生物，批号：20200518，5mg/ml）放入50KD的透析袋中，用100ml的柠檬酸缓冲液（0.06mol/L pH4.8）透析30min。透析后，按照1U胃蛋白酶切割1ug的乙肝抗体，向其中滴加0.5ml上述胃蛋白酶，再加入0.005ml浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙肝抗体片段的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在乙肝抗体溶液中加入胃蛋白酶，二硫赤酰糖醇和2
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巯基乙醇，第一次温育；再加入甘氨酸，第二次温育后进行纯化。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述二硫赤酰糖醇的加入量为1
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2g/L。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述2
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巯基乙醇的加入量为0.2
‑
0.5g/L。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述甘氨酸的加入量为3
‑
3.5g/L。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：高希贤，王琳，
申请(专利权)人：普十生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：