一种用于PCT/IL-6联合检测的免疫层析试纸条及其应用制造技术

本申请涉及一种用于PCT/IL

【技术实现步骤摘要】
一种用于PCT/IL
‑
6联合检测的免疫层析试纸条及其应用


[0001]本申请涉及临床医学检测
，尤其是涉及一种用于降钙素原(PCT)
‑
白细胞介素6(IL
‑
6)联合检测的免疫层析试纸条及其应用。

技术介绍

[0002]免疫层析技术，也称侧流免疫法(Lateral flow immunoassay)，起源于上世纪80年代，是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术，荧光微球标记抗体/抗原的原理是先将微球表面基团活化，然后偶联加入抗体，再使用惰性蛋白对微球表面空位进行封闭。荧光微球标记抗体或抗原固定于标记垫上，在毛细管作用使待分析物向上移动。对于双抗夹心免疫层析方法，即待测物先与荧光微球标记的抗体结合，在向上移动达到检测线时再与包被在NC膜上的抗体结合形成双抗夹心抗原的形式。其有操作简便、快速、价格低廉、灵敏度高等优势而被广泛应用。
[0003]白细胞介素
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6，简称白介素6(IL
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6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。IL
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6主要是由纤维母细胞、单核/巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生，是一种多功能的细胞因子，调节免疫应答、血细胞生产、组织损伤时的急性时相反应、炎症反应等。白介素6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。在心脑血管疾病、肾脏疾病、肿瘤、关节病、创伤、感染等疾病发生时，IL
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6水平增高。IL
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6上升的水平与疾病的活动期、肿瘤的发展变化、排斥反应程度以及治疗效果都密切相关。因此，对病人体液中IL
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6水平的检测可反应患者的病情变化。IL
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6家族在多种心血管疾病病理生理过程中起核心作用。
[0004]降钙素原(PCT)是一种蛋白质，当严重的细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高。自身免疫、过敏和病毒感染时降钙素原不会升高。局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。细菌内毒素在诱导过程中担任了至关重要的作用。反应了全身炎症反应的活跃程度。影响降钙素原水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。
[0005]目前，检测降钙素原和白介素6的常用方法有放射免疫学分析法、酶联免疫法、免疫比浊法等，免疫层析法操作简便，检测时间短，实现一次取样，就可以准确的检测降钙素原和白介素6含量。但上述两个项目主要以单项检测的形式在医院中广泛使用，市场上并不存在用于PCT与IL
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6的联检产品。因此提供一种PCT与IL
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6的联检产品，对于节省原料和检测时间至关重要。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中存在的技术问题，本申请提供一种用于PCT/IL
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6联合检测的免疫层析试纸条，利用所述试剂条可以同时对待测样本中的PCT与IL
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6进行检测，节省原料和检测时间，且检测过程非特异性反应低，检测结果准确。
[0007]为此，本申请第一方面提供了一种用于PCT/IL
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6联合检测的免疫层析试纸条，所
述试纸条包括：底板，和沿层析方向依次固定于所述底板上的样品垫、标记垫、层析膜和吸水垫，且所述样品垫、标记垫、层析膜和吸水垫顺次接触；所述标记垫上喷有荧光微球
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抗体偶联物，所述荧光微球
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抗体偶联物包括荧光微球
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抗PCT抗体偶联物、荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物；所述层析膜远离标记垫的一端设置有质控线，所述质控线上固定有与所述质控抗体结合的二抗；所述层析膜靠近标记垫的一端依次设置有检测线T1和检测线T2，所述检测线T1和检测线T2中的一条固定有抗PCT抗体，另一条固定有抗IL
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6抗体。
[0008]本申请所述免疫层析试纸条运用双抗体夹心法，配套使用荧光免疫层析仪器，对待测样本中PCT/IL
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6进行检测。具体地，所述试纸条的标记垫上同时包括荧光微球
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抗PCT抗体偶联物和荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物，待测样本中所含的PCT抗原和IL
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6抗原与标记垫上的上述荧光微球
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抗体偶联物反应后，生成抗原
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抗体
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荧光微球偶联物，通过层析作用上述偶联物到达层析膜上，并与层析膜的检测线上固定的抗体进一步进行反应，进而将其固定于相应的检测线上，通过配套的仪器检测各检测线荧光强度的信号值，即可计算出待测样本中PCT/IL
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6的含量。
[0009]本申请所述标记垫上包括的荧光微球
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质控抗体偶联物为质控物，该偶联物在层析的作用下到达层析膜上，并与层析膜的质控线上固定的二抗反应，进而将其固定于质控线上。检测结束后，通过仪器检测质控线上荧光强度，进而对该试纸条检测的结果进行定量判定。只有当质控线上有荧光强度时，才能根据各检测线荧光强度的信号值计算待测样本中PCT/IL
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6的含量。
[0010]本申请中对所述荧光微球
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质控抗体偶联物中的质控抗体的具体种类没有明确限定，只要其能够与质控线上固定的二抗能够结合即可。在本申请的一些具体实施方式中，所述质控抗体为鸡IgY抗体，此时与之对应的质控线上固定的二抗可以为兔抗鸡IgY抗体、羊抗鸡IgY抗体等。
[0011]本申请中，所述底板可以为PVC底板，所述层析膜的材质可以为硝酸纤维素(NC)膜。
[0012]在一些实施方式中，所述荧光微球
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抗PCT抗体偶联物、荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物的质量比为(1～3):(1～3):1。在一些具体实施例中，所述荧光微球
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抗PCT抗体偶联物、荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物的质量比为1:1:1、2:2:1、3:3:1、2:3:1、3:2:1、1:2:1和2:1:1等。优选地，所述荧光微球
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抗PCT抗体偶联物、荧光微球
‑
抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物的质量比为(2～3):(2～3):1；更优选地，所述荧光微球
‑
抗PCT抗体偶联物、荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物的质量比为2:2:1。
[0013]本申请通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于PCT/IL
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6联合检测的免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括：底板，和沿层析方向依次固定于所述底板上的样品垫、标记垫、层析膜和吸水垫，且所述样品垫、标记垫、层析膜和吸水垫顺次接触；所述标记垫上喷有荧光微球
‑
抗体偶联物，所述荧光微球
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抗体偶联物包括荧光微球
‑
抗PCT抗体偶联物、荧光微球
‑
抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
‑
质控抗体偶联物；所述层析膜远离标记垫的一端设置有质控线，所述质控线上固定有与所述质控抗体结合的二抗；所述层析膜靠近标记垫的一端依次设置有检测线T1和检测线T2，所述检测线T1和检测线T2中的一条固定有抗PCT抗体，另一条固定有抗IL
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6抗体。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球
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抗PCT抗体偶联物、荧光微球
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抗IL
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6抗体偶联物和荧光微球
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质控抗体偶联物的质量比为（1~3）: （1~3）:1。3.根据权利要求1或 2所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球
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抗体偶联物的制备方法包括如下步骤：S1，将荧光微球与活化剂混合后对荧光微球进行活化，获得活化后的荧光微球；S2，将所述活化后的荧光微球与待标记的抗体混合后进行偶联反应，获得偶联有抗体的荧光微球；S3，对所述偶联有抗体的荧光微球进行封闭处理，获得荧光微球
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抗体偶联物；其中，所述待标记的抗体为抗PCT抗体、抗IL
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6抗体或质控抗体；所述封闭剂为包括BSA和甘氨酸的混合液；优选地，所述混合液中BS...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑瑞雨，王琳，
申请(专利权)人：普十生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：