环状RNAhsa_circ_0000734基因的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种环状RNA hsa_circ_0000734基因的应用，根据提取的总RNA序列，设计并合成特异性PCR引物，利用RT

【技术实现步骤摘要】
Rheumatoid Arthritis.[J].Int J Nanomedicine,2021,16:7977
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7994)。除此之外，circRNA参与多种疾病的发生发展，并可以作为疾病早期诊断和预后判断的生物学标志物(Chen Yufeng,Xu Xianghe,Li Xuegang,et al.Identification of circular RNAs hsa_circ_0140271in peripheral blood mononuclear cells as anovel diagnostic biomarker for female rheumatoid arthritis.[J].J Orthop Surg Res,2021,16:647)。cirRNAs在多种自身免疫性疾病中差异表达，并且被证实发挥重要的调控作用，如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、强直性脊柱炎等(Ouyang Q,Liu C,Lu X,et al.Identification of Circular RNAs Circ_0005008and Circ_0005198in Plasma as Novel Biomarkers for New
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Onset Rheumatoid Arthritis.Front Pharmacol.2021；12:722017；Luo Q,Li X,Fu B,et al.Expression profile and diagnostic value of circRNAs in peripheral blood from patients with systemic lupus erythematosus.Mol Med Rep.2021；23(1):1；Li F,Liu Z,Zhang B,et al.Circular RNA sequencing indicates circ
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IQGAP2 and circ
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ZC3H6 as noninvasive biomarkers of primary syndrome.Rheumatology(Oxford).2020；59(9):2603
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2615；Tang YP,Zhang QB,Dai F,et al.Circular RNAs in peripheral blood mononuclear cells from ankylosing spondylitis.Chin Med J(Engl).2021；134(21):2573
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2582)。目前部分研究表明，cirRNAs参与RA免疫炎症、滑膜细胞的增殖、迁移、凋亡等过程，但是关于其机制研究较少。人的hsa_circ_0000734基因位于17号染色体，剪切后成熟序列为328bp。目前，hsa_circ_0000734基因与RA检测、治疗中的应用尚未见报道。

技术实现思路

[0004]针对目前类风湿关节炎缺乏诊断标志物，缺乏治疗药物靶向性、针对性等技术缺陷，本专利技术提供了一种环状RNA hsa_circ_0000734基因在制备RA检测试剂、制备RA预后评估剂等方面的应用。
[0005]首先，本专利技术提供了一对用于检测环状RNA hsa_circ_0000734基因的引物对，该引物对核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0006]其次，本专利技术提供了一种检测环状RNA hsa_circ_0000734基因表达量的试剂，该试剂包括核苷酸序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对；进一步，该检测试剂包括：5uL2
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SYBR Green mixture、1uL Forward primer(10uM)、1uL Reverse primer(10uM)、1ug/100ul的cDNA 1uL、浓度均为10umol/L的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各1μl、RNase Free water2uL。
[0007]第三，本专利技术还提供了一种环状RNA hsa_circ_0000734基因在制备RA靶向治疗试剂中的应用，具体而言，即根据环状RNAhsa_circ_0000734基因制备特异性过表达序列SEQ ID NO.3、小干扰RAN序列，用于在滑膜成纤维细胞中过表达和干扰hsa_circ_0000734基因。
[0008]第四，本专利技术提供了一种类风湿关节炎RA诊断试剂，所述试剂包括特异性过表达序列pcDNA3.1
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hsa_circ_0000734和小干扰序列si
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hsa_circ_0000734，特异性过表达序列pcDNA3.1
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hsa_circ_0000734的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，特异性过表达序列pcDNA3.1
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hsa_circ_0000734和小干扰序列si
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hsa_circ_0000734可用于转染滑膜成纤维细胞，使hsa_circ_0000734基因在细胞中过表达和小干扰。
[0009]结果显示，转染了pcDNA3.1
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hsa_circ_0000734能显著提高TNF
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α诱导的FLS中hsa_circ_0000734的表达水平，促进炎性细胞因子产生，提高细胞的增殖和迁移能力，激活了NF
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κB信号通路，减少了细胞的凋亡。而转染siRNA
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hsa_circ_0000734能显著降低TNF
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α诱导的RA
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FLS中hsa_circ_0000734的表达，抑制炎性细胞因子产生，抑制NF
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κB信号通路的活化，降低细胞的增殖和迁移能力，促进细胞的凋亡。
[0010]与现有技术相比，本专利技术的有益效果表现在：
[0011]本申请系统地探究在RA中环状RNA hsa_circ_0000734基因的表达，本专利技术证实：与健康对照组相比，RA患者PBMCs中hsa_circ_0000734的表达明显增高，且与疾病活动性指标ESR、CRP、RF、anti
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CCP、DAS28呈正相关。过表达hsa_circ_0000734显著增加了TNF
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α诱导RA
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FLS的炎症反应，提高了细胞的增殖和迁移能力，激活了NF
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κB信号通路，减少了细胞的凋亡；小干扰hsa_circ_0000734能够显著抑制TNF
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α诱导的RA
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FLS炎症反应，降低了细胞的增殖和迁移能力，抑制NF
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κB信号通路的活化，促进了细胞的凋亡。本专利技术发现并验证了RA中的hsa_circ_0000734基因的表达及功能。这一发现将有望进一步丰富和完善RA发病机制的研究，也为研发RA早期本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测环状RNA hsa_circ_0000734基因表达量的试剂在制备类风湿关节炎检测试剂中的应用，其特征在于，所述检测环状RNA hsa_circ_0000734基因表达量的试剂包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测环状RNA hsa_circ_0000734基因表达量的试剂进一步包括：5uL 2
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SYBR Green mixture、1uL Forward primer(10uM)、1uL Reverse primer(10uM)、1ug/100ul的cDNA 1uL、浓度均为10umol/L的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各1μl、RNase Free water 2uL。3.一种环状RNA hsa_circ_0000734基因在制备类风湿关节炎RA靶向治疗试剂中的应用，其特征在于，根...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘健，孙艳秋，文建庭，忻凌，姜辉，万磊，
申请(专利权)人：安徽中医药大学第一附属医院安徽省中医院，
类型：发明
国别省市：