一种高特异性测定CK-MM的胶乳增强免疫比浊法试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种高特异性测定CK

【技术实现步骤摘要】
一种高特异性测定CK
‑
MM的胶乳增强免疫比浊法试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及试剂盒检测
，具体涉及一种高特异性测定CK
‑
MM的胶乳增强免疫比浊法试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]肌酸激酶(CK)是二聚体结构，亚单位有M和B两种，故可组成三种同工酶，即CK
‑
MM、CK
‑
MB和CK
‑
BB。骨骼肌中的CK绝大部分为CK
‑
MM(97％
‑
99％)，极少部分为CK
‑
MB(1％
‑
3％)；心肌中78％为CK
‑
MM，22％为CK
‑
MB；脑组织中全部为CK
‑
BB，胃肠道和膀胱平滑肌绝大部分为CK
‑
BB(>90％)，其余为CK
‑
MM和CK
‑
MB。正常人血清中的CK几乎都是CK
‑
MM。进行性肌营养不良主要以肌型CK
‑
MM为主，因此CK
‑
MM活性的测定是诊断骨骼肌病较特异的指标。
[0003]CK
‑
MM作为骨骼肌病较特异的重要指标，检测干血滤纸片、血清、尿液检测都有其重要意义。影响CK
‑
MM检测值的因素有很多，如年龄、性别、种族、地域和运动状态等多种因素的影响。经典的CK同工酶测定方法是电泳法，目前常用的检测方法主要以生物化学法，如比色法、紫外分光光度法和荧光法等检测。应用较多的一种方法是酶偶联测定法，但是该方法易受溶血、血清其他酶类物质的干扰，且操作繁琐；CK
‑
MM含量低，对试剂盒的灵敏度要求较高。目前相关的肌酸激酶同工酶的检测试剂盒检测特异性不高，检测线性范围较低，不能满足临床的要求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种高特异性测定CK
‑
MM的胶乳增强免疫比浊法试剂盒及其制备方法；本专利技术提供的试剂盒适用于多种样本的检测，包括干血滤纸片、血清以及尿液的检测；本专利技术提供的试剂盒操作简便，可自动化。
[0005]第一方面，本专利技术提供一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，所述肌酸激酶同工酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1中含有1.0
‑
5.0g/L的非离子表面活性剂和CK
‑
MB特异性抗体。
[0006]在本专利技术提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒中，所述试剂R1中包括：
[0007]缓冲液：5
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液(pH＝7.00
‑
9.00)、HEPES缓冲液(pH＝6.80
‑
8.20)、MOPS缓冲液(pH＝6.50
‑
7.90)、Tricine缓冲液(pH＝6.00
‑
8.00)、MES缓冲液(pH＝5.00
‑
8.00)、甘氨酸缓冲液(pH＝7.00
‑
8.00)中的一种；
[0008]防腐剂：0.1
‑
1.0g/L Proclin
‑
300、NaN3、硫柳汞中的一种；
[0009]基质：纯化水；
[0010]金属离子螯合剂：0.5
‑
2.0g/L EDTA
‑
二钠；
[0011]稳定剂：5
‑
30g/L蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一种；
[0012]保护剂：0.5
‑
5g/L NaCL、KCL中的一种；
[0013]表面活性剂：1.0
‑
5.0g/L非离子型表面活性剂，例如TWEEN系列(TWEEN
‑
20、TWEEN
‑
80)、Triton系列(Triton X
‑
100)、PEG系列(PEG2000、PEG6000、PEG20000)；其中，Triton系列用于抗干扰、防止杂蛋白非特异性吸附干扰反应；PEG系列用于促进抗原抗体反应。
[0014]CK
‑
MB特异性抗体(市售均可)：浓度1
‑
5μg/mL；加入R1后，CK
‑
MB被CK
‑
MB抗体提前反应掉，防止影响CK
‑
MM的测定，从而显著提高检测灵敏度和检测范围；出于降低成本的考虑，CK
‑
MB特异性抗体可采用多抗。
[0015]具体地，试剂R1中包括：5
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、Tricine缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种；0.5
‑
2g/L EDTA
‑
二钠；5
‑
40g/L蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一种；0.5
‑
5.0g/L NaCL或KCL；1.0
‑
5.0g/L非离子型表面活性剂；CK
‑
MB特异性抗体；pH为7.5
‑
8.0。
[0016]更具体地，所述试剂R1中包括：10
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液、0.2g/L NaN3、纯化水、0.5
‑
1g/L EDTA
‑
二钠、20
‑
40g/L蔗糖、2.0
‑
5.0g/LNaCL、0.5
‑
1g/L TWEEN
‑
20、0.5
‑
1g/L PEG2000、3.0μg/mL CK
‑
MB特异性抗体；pH为7.5
‑
8.0。
[0017]在本专利技术提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒中，所述试剂R2中含有1.0
‑
2.5g/L非离子表面活性剂；3.0
‑
8.0μg/mL CK
‑
MM特异性抗体，0.02
‑
0.3％胶乳微球。
[0018]在本专利技术提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒中，所述试剂R2中包括：
[0019]缓冲液：5
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液(pH＝7.00
‑
9.00)、HEPES缓冲液(pH＝6.80
‑
8.20)、MOPS缓冲液(pH＝6.50
‑
7.90)、Tricine缓冲液(pH＝6.00
‑
8.00)、MES缓冲液(pH＝5.00
‑
8.00)、甘氨酸缓冲液(pH＝7.00
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述肌酸激酶同工酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1中含有1.0
‑
5.0g/L的非离子表面活性剂和CK
‑
MB特异性抗体。2.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中包括：5
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、Tricine缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种；0.1
‑
1.0g/L Proclin
‑
300、NaN3、硫柳汞中的一种；0.5
‑
2g/L EDTA
‑
二钠；5
‑
40g/L蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一种；0.5
‑
5.0g/L NaCL或KCL；1.0
‑
5.0g/L非离子型表面活性剂；CK
‑
MB特异性抗体；pH为7.5
‑
8.0。3.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中含有1.0
‑
2.5g/L非离子表面活性剂；3.0
‑
8.0μg/mL CK
‑
MM特异性抗体，0.02
‑
0.3％胶乳微球。4.根据权利要求3所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中包括：5
‑
50mmol/L Tris
‑
HCL缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、Tricine缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种；0.1
‑
1.0g/L Proclin
‑
300、NaN3、硫柳汞中的一种；0.5
‑
2.0g/L EDTA
‑
二钠；5
‑
40g/L蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一种；0.5
‑
5.0g/L NaCL或KCL；0.5
‑
1.0g/L TWEEN
‑
20、0.5
‑
1g/L PEG2000、0.5g/L丙三醇；pH为7.5
‑
8.0；3.0
...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴国华，郭翠，张鲁军，王叶，马金龙，
申请(专利权)人：苏州淦江生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：