一株控制苹果采后病害的酵母菌及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一株控制苹果采后病害的酵母菌及其用途，酵母为中国汉纳酵母YD，保藏菌株编号：CCTCC M 2021821，用于实现苹果采后病害防治及贮藏保鲜的用途；通过伤口感染验证，对照组即未接种中国汉纳酵母的苹果发病率达到100％时，处理组的发病率仅为22.22％，发病率下降了77.78％；经中国汉纳酵母喷洒处理的苹果，在20℃储存条件下对照组腐烂率接近60％，而经过中国汉纳酵母喷洒处理的苹果腐烂率才仅为18％。所以本发明专利技术的酵母可应用于苹果采后病害的控制，代替化学杀菌剂防治水果采后病害，避免使用化学杀菌剂对人的危害，保障果蔬及其制品的食用安全性。保障果蔬及其制品的食用安全性。保障果蔬及其制品的食用安全性。

【技术实现步骤摘要】
一株控制苹果采后病害的酵母菌及其用途


[0001]本专利技术属于果蔬采后病害生物防治
，具体涉及一株控制苹果采后病害的酵母菌及其用途。

技术介绍

[0002]苹果(Malus domestica)，属于蔷薇科苹果亚科苹果属植物。苹果营养价值高，富含各类矿物质及维生素，具有生津解渴、健胃消食等功效，可以治疗咳嗽、记忆力减退、精神疲倦等症，适合各类人群食用。目前，我国苹果面积已达4000万亩左右，产量已超4000万吨，面积和产量均超过世界面积、产量的50％，是世界苹果种植面积及产量最大的国家。但苹果在采后容易受到病原菌的侵染，导致果实品质下降，这就使得我国的苹果缺乏市场竞争力，出口量少。其中，苹果采后贮藏储运过程中，由扩展青霉(Penicillium expansum)引起的青霉病是其主要病害，扩展青霉的孢子能够耐各种不良环境，极轻以致可以到处散布，一旦落到果实的伤口上，就会迅速萌发，侵入果肉，使细胞离解，果肉软腐，主要危害成熟或接近成熟期的果实。扩展青霉不仅会导致苹果产生青霉病，还会产生次级代谢产物
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展青霉素，一旦扩展青霉开始在果实上繁殖，产生的展青霉素会迅速从腐烂部分向非腐烂部分扩散。展青霉素是一种毒性极强的聚酮类代谢物，对人体的肝脏、肾脏、肺和免疫系统等都有毒害作用，其中苹果及其制品被认为是最容易受展青霉素污染的食品。因此，控制苹果采后贮藏储运期间的病害十分重要，有利于提高我国苹果产业的竞争力。
[0003]长期以来，控制苹果采后病害的方法有物理方法和化学方法。物理方法主要有低温贮藏、热处理、气调贮藏、辐射和紫外照射等，其优点在于处理后的果实没有残留物且对环境和人体没有不良影响，但也存在一定的局限性，包括低持久性、可能对产品品质有不良影响、不便于普及等。如低温环境可以抑制病原菌的生长，但同样也延长了病原菌的潜伏期，并且水果在过低的环境下可能会遭遇冷害；热处理通过较长时间的较低温度和较短时间的较高温度可以实现果实上的病害控制，但每种水果的处理条件不完全相同，并且处理不当也会损坏产品；紫外光照射可以杀灭或者引起果实表面病原菌的衰老，减少果蔬的采后病害，但随着果实成熟度的提高，紫外光的作用随之下降。化学方法主要使用化学杀菌剂、食品添加剂和天然抑菌物质等杀灭病菌，目前化学杀菌剂因其高效方便成本低的优点而广泛使用，其中多使用甲基硫菌灵、噻菌灵等杀菌剂，但化学杀菌剂长期使用会使病原菌产生抗性，并且化学试剂残留对污染生态环境，对人体健康也有潜在威胁。综上，亟需寻找一种安全高效成本低的方法对采后苹果进行防治。
[0004]微生物菌体可以通过拮抗、竞争作用或者杀灭病原菌等方式对果蔬进行防腐保鲜，目前主要有拮抗酵母、拮抗细菌等。但并非是所有的酵母均具备良好的生防作用，需要有针对性的研究；目前也有相关拮抗酵母的研究报道，如2017年，E.Arrarte等从南极分离得到清酒假丝酵母(Candida sake)，发现该酵母能够将在0
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1℃储存的苹果的青霉病和灰霉病的发生率控制在25％以下，并且清酒假丝酵母(Candida sake)产生的挥发性有机物在体内试验中也能有效控制苹果中的扩展青霉。但是，其生防效果还有待提高，并且是针对低
温储存的水果；同时针对苹果青霉病害防治的酵母菌较少，目前也没有关于中国汉纳酵母控制苹果采后病害的报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术旨在解决上述问题之一；本专利技术提供一株分离自生态果园土壤的中国汉纳酵母(Hannaella sinensis)，能够高效控制苹果采后病害，尤其是针对青霉病，可以显著降低苹果采后病害的发生，减少采后病害造成的损失，具有潜在的应用价值。
[0006]本专利技术所提供的防治苹果采后青霉病的酵母菌株是从镇江市世业洲农业生态果园的土壤中筛选分离到的，在NYDA固体培养基平板上28℃培养，进行形态学观察；对该菌株的26SrRNA D1/D2区序列分析，进行分子生物学鉴定；鉴定为中国汉纳酵母(Hannaella sinensis)YD，并且已经通过对ICR小鼠进行毒性经口试验，证明其安全性，对人体无害。
[0007]本专利技术所提供的控制苹果采后病害的酵母菌株，现保藏于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2021年7月5日，保藏编号为：CCTCC NO:M 2021821，建议的分类命名为中国汉纳酵母(Hannaella sinensis)YD。
[0008]本专利技术所提供的中国汉纳酵母的培养方法，所使用的固体培养基为NYDA，pH 7.0
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9.0，培养温度26℃
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28℃，时间为48h，所述的培养基组成为牛肉浸膏8g，酵母浸出物5g，葡萄糖10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL；液体发酵培养采用发酵培养基NYDB，所述NYDB液体培养基组成除不含琼脂外，其他成分同NYDA培养基；
[0009]中国汉纳酵母对苹果采后病害防治及贮藏保鲜的用途，按照下述步骤进行：
[0010]a.将中国汉纳酵母涂布于NYDA培养基进行活化培养；然后接种中国汉纳酵母单菌落于NYDB培养基中培养至对数期，得到培养液；
[0011]b.然后取步骤a得到培养液接种于NYDB培养基中，培养至稳定期，经离心、洗涤后得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成1
×
108cells/mL的中国汉纳酵母菌悬液；
[0012]c.首先对苹果进行消毒、清洗的预处理，在预处理后的苹果赤道部位形成统一大小和深度的伤口，每个伤口处等量加入一定体积的中国汉纳酵母菌悬液，静置一段时间后在伤口中接种霉菌孢子悬浮液，自然晾干后用保鲜膜将其密封，并放置于恒温恒湿培养箱中培养，验证了酵母对苹果果实伤口霉菌病害的有效控制；
[0013]或者对苹果不作任何处理，采摘后即在保持自然状态的苹果表面均匀喷洒1
×
108cells/mL的中国汉纳酵母菌悬液，然晾干后，将果实放在塑料筐内，用保鲜膜密封，恒温恒湿培养箱中培养，实现苹果采后病害防治及贮藏保鲜的用途。
[0014]优选的，所述步骤a中用NYDA培养基活化培养条件为：温度28℃，时间46～48h；所述接种中国汉纳酵母单菌落于NYDB培养基中的接种量为0.5
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2g：100ml；所述于NYDB培养基培养至对数期的条件为：温度28℃，时间10～13h。
[0015]优选的，所述步骤b中培养液接种于NYDB培养基中的接种量为1
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2％；NYDB培养基培养至稳定期的条件为：温度28℃，时间20～22h。
[0016]优选的，所述步骤c中离心的条件为：7500rpm/min，时间10～15min。
[0017]优选的，所述步骤c中苹果预处理的具体操作为：挑选大小均匀、无损伤的成熟苹果实浸入含有0.3％次氯酸钠溶液的自来水中消毒1～2min，用清水冲洗后晾干。
[0018]优选的，所述步骤c中打孔的孔径为5mm，深度3mm；所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株控制苹果采后病害的酵母菌，其特征在于，所述酵母菌为中国汉纳酵母(Hannaella sinensis)YD，保藏编号：CCTCC NO:M 2021821。2.权利要求1所述的中国汉纳酵母YD的用途，其特征在于，所述酵母用于控制苹果采后病害及贮藏保鲜的用途。3.根据权利要求2所述的中国汉纳酵母YD用于控制苹果采后病害及贮藏保鲜的用途，其特征在于，按照下述步骤进行：a.将中国汉纳酵母涂布于NYDA培养基进行活化培养；然后接种中国汉纳酵母单菌落于NYDB培养基中培养至对数期，得到培养液；b.然后取步骤a得到培养液接种于NYDB培养基中，培养至稳定期，经离心、洗涤后得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成1
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108cells/mL的中国汉纳酵母菌悬液；c.首先对苹果进行消毒、清洗的预处理，在预处理后的苹果赤道部位形成统一大小和深度的伤口，每个伤口处等量加入一定体积的中国汉纳酵母菌悬液，静置一段时间后在伤口中接种霉菌孢子悬浮液，自然晾干后用保鲜膜将其密封，并放置于恒温恒湿培养箱中培养，验证了酵母对苹果果实伤口霉菌病害的有效控制；或者对苹果不作任何处理，采摘后即在保持自然状态的苹果表面均匀喷洒1
×
108cells/mL的中国汉纳酵母菌悬液，然晾干后，将果实放在塑料筐内，用保鲜膜密封，恒温恒湿培养箱中培养，实现苹果采后病害防治及贮藏保鲜的用途。4.根据权利要求3所述的中国汉纳酵母YD用于控制苹果采后病害及贮藏保鲜的用途，其特征在于，所述步骤a中用NYDA培养基活化培养条件为：温度28℃，时间46～48h；所述接种中国汉纳酵母单菌落于NYDB培养基中的接种量为0.5
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2g：100ml；所述于NYDB培养基培养至对数期的条件为：温度28℃，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张红印，林柔玲，杨其亚，马俊芳，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：