一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法及含量测定方法技术

本发明专利技术属于中药分析检测领域，具体涉及一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法，所述HPLC特征图谱构建方法包括以下步骤：将大柴胡汤制成供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品，以针对大柴胡汤和解少阳内泻热结功效的药效标志物(Q

【技术实现步骤摘要】
一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法及含量测定方法


[0001]本专利技术属于中药分析检测领域，具体涉及一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法及含量测定方法。

技术介绍

[0002]大柴胡汤方出自张仲景的《伤寒杂病论》，由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣、大黄组成，具有和解少阳，内泻热结之功。在中医的理论里，少阳包括胆与三焦，若少阳受邪，枢机不利，肝胆气机郁滞，必然影响三焦气化功能，若肝失疏泄，横逆犯胃，因而出现胸胁苦满，或胁下痞硬，或腹中痛等症，若伤及脾胃，气机壅塞，土壅木郁，燥热与糟粕互结，积于胃肠，阻滞腑气通降，可引起腹胀满而大便秘结等证候。由于少阳三焦为通行元气和运行水谷之要道，若邪热壅滞胆腑，上不得越，下不得泄，胆热木郁，克脾犯胃，胃失和降，可出现呕吐、泛酸、腹胀痛、纳差等病证。
[0003]方中柴胡专入少阳、疏邪透表为君药，黄芩擅清少阳之郁热，与柴胡同用，能和解少阳，是为少阳病未解、往来寒热、胸胁苦满而设；少用大黄泻热通腑，枳实行气破结，二者相配，可内泻热结，是为“热结在里”之心下痞满硬痛、大便不解、呕不止、郁郁微烦而设；芍药缓急止痛，配大黄可治腹中实痛，伍枳实能调和气血，协柴胡、黄芩清肝胆之热，以防木乘中土；半夏和胃降逆，生姜重用则止呕之功更著，以治呕逆不止；大枣和中益气，合芍药酸甘化阴，既可防热邪入里伤阴之虞，又能缓和枳实、大黄泻下伤阴之弊。总之，本方配伍体现了和解及攻下两法的结合运用，但以和解少阳为主、泻下之力较缓。
[0004]大柴胡汤在临床应用广泛，疗效稳定清晰，但其具体的功效物质基础尚不明确。大柴胡汤临床常用药效为保肝、利胆、抗炎、降糖、降脂；现代药理研究也表明大柴胡汤具有保肝、降糖、降脂、利胆、抗炎的作用。但是，目前尚无大柴胡汤的标准质量检测方法，部分生产相关产品的药企的企业质量标准方法中仅采用薄层色谱法(TLC)或高效液相色谱法(HPLC)对大柴胡汤方剂中几个含量较高的有效成分进行定性或定量检测。大柴胡汤全方成分复杂，由8味中药组成，仅以两三个成分的检测结果无法全面表征处方的物质基础，难以全面控制大柴胡汤的内在质量。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，有必要提供一种能够更全面地表征大柴胡汤的内在质量的大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法和含量测定方法。
[0006]具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本专利技术：
[0007]在第一个方面中，本专利技术提供了一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：所述大柴胡汤由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣和大黄制成，所述HPLC特征图谱构建方法包括以下步骤：
[0008](1)将大柴胡汤制成供试品溶液：
[0009]将大柴胡汤标准煎液定容于1000mL容量瓶中，精密量取1mL，置10mL的容量瓶内，
加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品；
[0010](2)制备对照品溶液：
[0011]精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷B
2 5.36mg、黄芩素4.80mg置于10mL容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1mL，置10mL容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；
[0012]以及，(3)对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行HPLC检测，得到具有共有特征峰的所述大柴胡汤HPLC特征图谱：
[0013]其中，HPLC检测的色谱条件如下所示：采用ODS
‑
C
18
硅胶色谱柱，以A相乙腈和B相0.05％磷酸水溶液作为流动相，二极管阵列检测器，检测波长为230nm
‑
280nm，流速1.0mL
·
min
‑1，柱温：25
‑
35℃，进样体积10μL。
[0014]作为可选方式，在上述HPLC特征图谱构建方法中，所述大柴胡汤标准煎液采用以下方法制备：大柴胡汤遵古煎煮，加水2400mL，40min武火煮至沸腾转文火煎煮110min，获得1200mL煎液，去渣滓后文火煎煮180min，最终得到600mL大柴胡汤标准煎液，所述大柴胡汤由北柴胡110.4g、黄芩41.4g、白芍41.4g、大黄27.6g、生姜69.0g、姜半夏60.0g、麸炒枳实58.3g和大枣55.2g制成。
[0015]作为可选方式，在上述HPLC特征图谱构建方法中，在步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇，且在步骤(2)中的对照品芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、柴胡皂苷B2和黄芩素是针对大柴胡汤和解少阳内泻热结功效的药效标志物(Q
‑
markers)。
[0016]作为可选方式，在上述HPLC特征图谱构建方法中，在步骤(3)中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0
‑
5min，3％
‑
3％A；5
‑
10min，3％
‑
10％A；10
‑
15min，10％
‑
12％A；15
‑
25min，12％
‑
16％A；25
‑
30min，16％
‑
16％A；30
‑
50m in，16％
‑
20％A；50
‑
55min，20％
‑
20％A；55
‑
75min，20％
‑
25％A；75
‑
85min，25％
‑
46％A；85
‑
90min，46％
‑
85％A；90
‑
100mi n，85％
‑
85％A。
[0017]作为可选方式，在上述HPLC特征图谱构建方法中，在步骤(3)中，使用的色谱柱为ODS
‑
C
18
色谱柱，规格为4.6
×
250mm，5μm，检测波长为240nm，柱温为30℃。
[0018]在第二个方面中，本专利技术提供了一种大柴胡汤指标性活性成分的含量测定方法，所述大柴胡汤由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣和大黄制成，所述含量测定方法包括以下步骤：
[0019](1)将大柴胡汤制成供试品溶液：
[0020]将大柴胡汤标准煎液定容于1000mL容量瓶中，精密量取1mL，置10mL的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大柴胡汤HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：所述大柴胡汤由柴胡、黄芩、芍药、半夏、生姜、枳实、大枣和大黄制成，所述HPLC特征图谱构建方法包括以下步骤：(1)将大柴胡汤制成供试品溶液：将大柴胡汤标准煎液定容于1000mL容量瓶中，精密量取1mL，置10mL的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，同法制备单味药及阴性对照水煎液供试品；(2)制备对照品溶液：精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷B25.36mg、黄芩素4.80mg置于10mL容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1mL，置10mL容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；以及，(3)对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行HPLC检测，得到具有共有特征峰的所述大柴胡汤HPLC特征图谱：其中，HPLC检测的色谱条件如下所示：采用ODS
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C
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硅胶色谱柱，以A相乙腈和B相0.05％磷酸水溶液作为流动相，二极管阵列检测器，检测波长为230nm
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280nm，流速1.0mL
·
min
‑1，柱温：25
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35℃，进样体积10μL。2.根据权利要求1所述的HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：所述大柴胡汤标准煎液采用以下方法制备：大柴胡汤遵古煎煮，加水2400mL，40min武火煮至沸腾转文火煎煮110min，获得1200mL煎液，去渣滓后文火煎煮180min，最终得到600mL大柴胡汤标准煎液，所述大柴胡汤由北柴胡110.4g、黄芩41.4g、白芍41.4g、大黄27.6g、生姜69.0g、姜半夏60.0g、麸炒枳实58.3g和大枣55.2g制成。3.根据权利要求1或权利要求2所述的HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇，且在步骤(2)中的对照品芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、柴胡皂苷B2和黄芩素是针对大柴胡汤和解少阳、内泻热结功效的药效标志物(Q
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markers)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(3)中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0
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5min，3％
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3％A；5
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10min，3％
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10％A；10
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15min，10％
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12％A；15
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25min，12％
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16％A；25
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30min，16％
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16％A；30
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50min，16％
‑
20％A；50
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55min，20％
‑
20％A；55
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75min，20％
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25％A；75
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85min，25％
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46％A；85
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90min，46％
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85％A；90
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100min，85％
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85％A。5.根据权利要求1至4中任一项所述的HPLC特征图谱构建方法，其特征在于：在步骤(3)中，使用的色谱柱为ODS
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C
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色谱柱，规格为4.6
×
250mm，5μm，检测波长为240nm，柱温为30℃。6.一种大柴胡汤指标性活性成分的含量测...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏胜利，张燕玲，吕恬仪，刘亚楠，张林，张媛，赵婷，胡秀华，刘凤波，
申请(专利权)人：北京橘井健康科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：