一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法。该方法基于固相萃取技术，对瓜蒌子标准汤剂中亲脂性化合物及大极性杂质达到有效分离，减少该类化合物对特征图谱的干扰。本发明专利技术方法采用Agilent ZORBAX SB

【技术实现步骤摘要】
一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法


[0001]本专利技术涉及中药分析及质量鉴别、控制
，特别涉及一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法。

技术介绍

[0002]瓜蒌子，为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥成熟种子，气微，味淡。瓜蒌子在我国属于种植范围较广的中药植物，其生长于向阳的地方，由于气候条件的限制，主要分布于我国北部至长江流域各地，主产于安徽、山东、河南、湖北等地。其具有清热涤痰，宽胸散结，润燥滑肠的功效，故在中药复方制剂中都有广泛的应用。目前以瓜蒌子入药的中成药很多，诸如小儿止嗽金丹、搜风理肺丸、清肺化痰丸、泻白糖浆等，在临床上用于治疗肺热咳嗽，痰浊黄稠，胸痹心痛，结胸痞满，乳痈，肺痈，肠痈，大便秘结等症。但目前关于瓜蒌子的文献报道多集中于化学成分的鉴定，还未有特征图谱方面的研究。
[0003]瓜蒌子属于果实种子类部分，富含油脂等亲脂性化合物，在HPLC定性过程中，该类成分响应值较低且容易造成谱图分离度低、重复性差、污染柱子及检测器且不易冲洗等问题。采用固相萃取(Solid
‑
Phase Extraction，SPE)样品预处理技术对瓜蒌子供试品预处理，其采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程。同时可根据选取不同极性洗脱液对样品进行洗脱，能够有效保留适用于HPLC分析的成分，减少亲脂性化合物的干扰，该法具有操作简单、重现性好、节约溶剂等优点。特征图谱是一种体现中药化学成分整体特征的质量评价方法，对中药及其制剂的真实性、质量的一致性和稳定性均可有效地加以检测和控制，目前也已经成为业内人士的共识。在本专利技术之前，对瓜蒌子进行固相萃取预处理、以瓜蒌子含有的化学成分为指标建立特征图谱的方法未见报道。针对上述情况，本专利技术对瓜蒌子样品的固相萃取过程进行研究，采用HPLC法进行特征图谱研究，严格把控瓜蒌子药材的质量，使其资源更合理的应用，为该药材的深入研究开发提供科学依据。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于，提供一种瓜蒌子的SPE预处理方法及特征图谱检测方法，通过此方法可以较为全面地控制瓜蒌子药材的质量，从而更好地保证瓜蒌子产品的质量稳定性、一致性和可控性。
[0005]本专利技术的技术方案如下：一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，包括如下步骤：
[0006](1)供试品溶液的制备：
[0007]取瓜蒌子标准汤剂冻干粉加纯水充分溶解，所述瓜蒌子标准汤剂冻干粉与纯水的质量体积比为0.3:10，超声处理、离心，取油层和水层混合溶液作为固相萃取供试品；取瓜蒌子固相萃取填料加入甲醇充分浸泡，所述瓜蒌子固相萃取填料与甲醇的质量体积比为1:10，装柱；用甲醇淋洗活化；再用纯水淋洗平衡；取固相萃取供试品上样；用纯水进行第一次
洗脱；用体积浓度为30～50％的甲醇洗脱液进行第二次洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，复溶，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0008](2)对照品溶液的制备：
[0009]称取鸟苷对照品，以体积浓度为10％的甲醇为溶剂，配制成浓度为3.0μg/ml的对照品溶液，过滤，取续滤液作为对照品溶液；
[0010](3)液相分析过程：
[0011]分别取供试品溶液和对照品溶液分别注入至高效液相色谱仪，测定，建立HPLC特征图谱，得到瓜蒌子特征图谱。
[0012]进一步地，所述步骤(1)中优选体积浓度为30％的甲醇洗脱液。
[0013]进一步地，所述步骤(1)的瓜蒌子固相萃取填料包括SP
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120
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30/50
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ODS
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RPS、ODS
‑
A
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HG和C8
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HG。
[0014]进一步地，所述步骤(1)的瓜蒌子固相萃取填料优选为粒径为12nm
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50μm的SP
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120
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30/50
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ODS
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RPS。
[0015]进一步地，所述步骤(1)中的瓜蒌子标准汤剂冻干粉制备条件为：取瓜蒌子饮片捣碎，加水充分浸泡，所述瓜蒌子饮片与水的质量比为1:8；加热沸腾后煎煮45min～60min，趁热过筛得到药渣，药渣中再加7质量倍的水，加热沸腾后煎煮30min～60min，趁热过滤，合并两次药液，即得瓜蒌子标准汤剂，取标准汤剂样品，冻干、得冻干粉。
[0016]进一步地，所述步骤(1)中超声处理的功率为250W，频率40kHz；所述离心的转速为4000r/min，时间为10min；所述淋洗速度不超过1ml/min。
[0017]进一步地，所述步骤(1)中蒸干具体为：采用减压浓缩方式，以真空度为90mbar，转速为100rpm，水浴锅温度为60℃进行蒸干。
[0018]进一步地，所述步骤(2)中的过滤具体为：过0.22μm的微孔滤膜。
[0019]进一步地，所述步骤(3)中高效液相色谱条件具体为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB
‑
C
18
(4.6mm
×
250mm,5.0μm)；柱温30～40℃；流速0.4～0.8mL
·
min
‑1；检测波长230～285nm；进样量10μL；甲醇为流动相A，体积浓度为0.1％的磷酸水为流动相B；进行梯度洗脱。
[0020]进一步地，所述步骤(3)中高效液相色谱条件优选为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB
‑
C
18
(4.6mm
×
250mm,5.0μm)；柱温35℃；流速0.6mL
·
min
‑1；检测波长245nm；进样量10μL；甲醇为流动相A，0.1％磷酸水为流动相B；进行梯度洗脱。
[0021]进一步地，步骤(3)中所述的瓜蒌子特征图谱包括6个特征峰，以鸟苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰2与峰1、峰3、峰4、峰5和峰6的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的
±
10％之内，规定值为0.831(峰1)、2.284(峰3)、2.447(峰4)、3.046(峰5)、3.412(峰6)。
[0022]与现有技术相比，本专利技术取得以下有效成果：
[0023](1)本专利技术建立了瓜蒌子HPLC特征图谱，标定了6个共有峰，所构建的HPLC特征图谱中色谱峰能够实现较好地分离，特征图谱信息丰富，色谱峰型好，检测方法具有良好的稳定性和重复性。
[0024](2)本专利技术固相萃取预处理方法好，可有效分离亲脂性化合物，减少其对谱图的干扰，使得特征图谱的特征峰分离度更佳，辨识度更高。
[0025](3)本专利技术构建的瓜蒌子HPLC特征图谱填补了现有技术瓜蒌子质量控制的不足，
为后续瓜蒌子配方颗粒等研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取瓜蒌子标准汤剂冻干粉加纯水充分溶解，所述瓜蒌子标准汤剂冻干粉与纯水的质量体积比为0.3:10，超声处理、离心，取油层和水层混合溶液作为固相萃取供试品；取瓜蒌子固相萃取填料加入甲醇充分浸泡，所述瓜蒌子固相萃取填料与甲醇的质量体积比为1:10，装柱；用甲醇淋洗活化；再用纯水淋洗平衡；取固相萃取供试品上样；用纯水进行第一次洗脱；用体积浓度为30～50％的甲醇洗脱液进行第二次洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，复溶，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：称取鸟苷对照品，以体积浓度为10％的甲醇为溶剂，配制成浓度为3.0μg/ml的对照品溶液，过滤，取续滤液作为对照品溶液；(3)液相分析过程：分别取供试品溶液和对照品溶液分别注入至高效液相色谱仪，测定，建立HPLC特征图谱，得到瓜蒌子特征图谱。2.如权利要求1所述的基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，其特征在于，所述步骤(1)中优选体积浓度为30％的甲醇洗脱液。3.如权利要求1所述的基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，其特征在于，所述步骤(1)的瓜蒌子固相萃取填料包括SP
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ODS
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RPS、ODS
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A
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HG和C8
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HG。4.如权利要求1所述的基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，其特征在于，所述步骤(1)的瓜蒌子固相萃取填料优选为粒径为12nm
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50μm的SP
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30/50
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ODS
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RPS。5.如权利要求1所述的基于SPE前处理的瓜蒌子特征图谱分析方法，其特征在于，所述步骤(1)中的瓜蒌子标准汤剂冻干粉制备条件为：取瓜蒌子饮片捣碎，加纯水充分浸泡，所述瓜蒌子饮片与水的质量比为1:8；加热沸腾后煎煮45min～60min，趁热过筛得到药渣，药渣中再加7倍质量的水，加热沸腾后煎煮30...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧，曾结琳，姜慧洁，颜继忠，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：