一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用技术

本发明专利技术公开了一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用。该检测试剂盒包括：包被有第一NT

【技术实现步骤摘要】
一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用


[0001]本专利技术涉及医用诊断试剂
，具体涉及一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用。

技术介绍

[0002]NT
‑
proBNP是心室肌细胞分泌，通过心肌细胞拉伸进入血液循环的含有76个氨基酸的多肽，不具有生物学活性，由肾脏清除。NT
‑
proBNP的生物半衰期时间长，约90
‑
120min，体外稳定性好。血中浓度与心功能障碍程度呈正相关。血浆中的清除速度慢，能够准确反映心肌的缺血状态，反映心功水平。NT
‑
proBNP在以往的研究中已被证实，可作为心力衰竭的临床诊断指标应用，用于早期发现心力衰竭病人，对心衰患者的危险度分级，预测心源性猝死，对心衰患者的治疗疗效监测及预后评估等。《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》中成分肯定了NT
‑
proBNP作为心衰生物学标志物的重要价值，提出了NT
‑
proBNP测定与心衰诊断和鉴别诊断的标准。
[0003]心衰的主要发病机制之一为心肌病理性重构，导致心衰发展的两个关键过程之一为心肌死亡(坏死、凋亡、自噬等)的发生，如急性心肌梗死、重症心肌炎等。基于此研究背景提示，NT
‑
proBNP作为心衰及预后的一项独立检测指标，有可能在导致心衰发展的关键过程之中即具有浓度的变化指征。而越来越多的临床研究数据也证实了这一点，尤其是在急性心肌梗死AMI患者群体中，多项研究表明NT
‑
proBNP在急性心肌梗死早期，其血清水平已发生异常增高。下文中将详细介绍NT
‑
proBNP与AMI的临床诊断的联系，以确认将NT
‑
proBNP作为AMI诊断指标的重要意义。
[0004]现有的NT
‑
proBNP检测试剂方法学众多，有酶联免疫(ELISA)、免疫荧光法等，随着临床检测的要求逐渐提高，迫切需要检测灵敏度更高，线性范围宽，性能更加稳定的NT
‑
proBNP检测试剂，以辅助临床诊断，满足临床的需要，而传统检测方法的试剂存在检测灵敏度低、稳定性差等特点，因此需要研发一种具有更高灵敏度、稳定性更好的NT
‑
proBNP检测试剂，利用超顺磁性的纳米磁微粒的化学发光法检测NT
‑
proBNP，灵敏度高，稳定性好，相比于市场传统方法学的试剂来说，更符合临床检测的需求。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术，本专利技术的目的是开发一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用，提高了试剂的灵敏度、高特异性的单克隆抗体保证了试剂的特异性，此外蛋白稳定剂的优化以及血清阻断剂的使用提高了试剂的稳定性，此外试剂具备宽线性范围，可以满足临床的需求，且整个体系稳定性好，操作简便，可适于临床全自动化学发光测定仪配套使用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面，提供一种NT
‑
proBNP的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，包
括：
[0008]包被有第一NT
‑
proBNP单克隆抗体的磁性微粒；
[0009]碱性磷酸酶标记的第二NT
‑
proBNP单克隆抗体。
[0010]优选的，所述第一NT
‑
proBNP单克隆抗体具体为NT
‑
proBNP单抗1G4。
[0011]优选的，所述磁性微粒的粒径为1μm。
[0012]优选的，所述第二NT
‑
proBNP单克隆抗体具体为NT
‑
proBNP单抗8F10。
[0013]优选的，所述纳米磁微粒化学发光检测试剂盒中还包括：Tris缓冲液和化学发光底物AMPPD。
[0014]本专利技术的第二方面，提供纳米磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0015](1)将第一NT
‑
proBNP单克隆抗体通过标记反应，偶联上生物素，得到生物素化的第一NT
‑
proBNP单克隆抗体；然后将生物素化的第一NT
‑
proBNP单克隆抗体与链霉素亲和素修饰的磁性微粒进行偶联反应，得到包被有第一NT
‑
proBNP单克隆抗体的磁性微粒；与包被缓冲液共同组成M试剂；
[0016](2)将第二NT
‑
proBNP单克隆抗体通过标记反应，标记上碱性磷酸酶，得到碱性磷酸酶标记的第二NT
‑
proBNP单克隆抗体；与Tris缓冲液共同组成R试剂。
[0017]优选的，步骤(1)中，所述包被缓冲液为添加蛋白稳定剂和血清检测阻断剂。
[0018]本专利技术的第三方面，提供所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒在非治疗性或诊断性检测氨基末端B型利钠肽前体NT
‑
proBNP含量中的应用。
[0019]本专利技术的第四方面，提供一种检测NT
‑
proBNP含量的方法，包括以下步骤：
[0020]将包被有第一NT
‑
proBNP单克隆抗体的磁性微粒、碱性磷酸酶标记的第二NT
‑
proBNP单克隆抗体、Tris缓冲液和待测样品混合，在37℃温育反应5min；通过磁场分离除去未结合的物质；然后加入化学发光底物AMPPD，对反应中所产生的相对发光强度进行测量，基于相对发光强度与NT
‑
proBNP浓度间的关系，对待测样品中的氨基末端B型利钠肽前体NT
‑
proBNP含量进行测定。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]1、本专利技术制备的试剂盒中磁微粒包被NT
‑
proBNP单克隆抗体大大提高了检测特异性，以及避免漏检的情况，提高了检测的灵敏度，具备氨基末端B型利钠肽前体检测试剂的要求。同时对反应缓冲液进行的优化，添加了适合该项目的蛋白稳定剂，提高了反应体系的稳定性。
[0023]2、通过筛选优化缓冲体系，增加了蛋白稳定剂，以及血清检测阻断剂，提高了试剂的准确度，有效避免假阳性的情况发生。
具体实施方式
[0024]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0025]正如
技术介绍
部分所介绍的，现有的NT
‑
proBNP检测方法众多，有酶联免疫(ELISA)、免疫荧光法等，而传统检测方法的试剂存在检测灵敏度低、稳定性差等特点，使得
NT
‑
proBNP的稳定性、灵敏度等都有待提高。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种NT
‑
proBNP的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有第一NT
‑
proBNP单克隆抗体的磁性微粒；碱性磷酸酶标记的第二NT
‑
proBNP单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述第一NT
‑
proBNP单克隆抗体具体为NT
‑
proBNP单抗1G4。3.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁性微粒的粒径为1μm。4.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述第二NT
‑
proBNP单克隆抗体具体为NT
‑
proBNP单抗8F10。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述纳米磁微粒化学发光检测试剂盒中还包括：Tris缓冲液和化学发光底物AMPPD。6.权利要求1
‑
5任一项所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将第一NT
‑
proBNP单克隆抗体通过标记反应，偶联上生物素，得到生物素化的第一NT
‑
proBNP单克隆抗体；然后将生物素化的第一NT
‑
p...

【专利技术属性】
技术研发人员：王保全，
申请(专利权)人：宏葵生物中国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：