一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法技术

本发明专利技术涉及一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法，该方法色谱柱采用多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法


[0001]本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法。

技术介绍

[0002]米洛巴林(Mirogabalin、DS
‑
5565)是第一制药三共株式会社研发的一种药物，与加巴喷丁和普瑞巴林(Pregabalin)等药物类似。米洛巴林是一种新型的优先选择性α2δ
‑
1配体，对中枢神经系统(CNS)中电压敏感性钙通道复合物的α2δ
‑
1亚基具有高效性和选择性。米洛巴林结合α2δ钙通道(1和2)，但效能显著高于普加巴林。在治疗糖尿病周围神经性疼痛的II期临床试验中显示了良好的效果。
[0003][0004](1R,5S)
‑3‑
乙基二环[3.2.0]庚
‑3‑
烯
‑6‑
酮为米洛巴林中间体，其对映异构体为(1S,5R)
‑3‑
乙基二环[3.2.0]庚
‑3‑
烯
‑6‑
酮，两者结构式中双键较少，紫外吸收较弱；且化合物无明显的酸性和碱性基团，可能显中性。
[0005]原研专利CN104245951B公开了一种气相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的检测方法如下：
[0006]色谱柱：Cyclosil
‑
B(0.25mm
×
30m，DF＝0.25μm)
[0007]流速：1.5mL/min(He)分流比：1/10
[0008]炉温度：130℃(0
‑
13min)
→
230℃(18
‑
20min)
[0009]注射口温度：230℃探测器温度：230℃
[0010]保留时间：
[0011](1R,5S)
‑3‑
乙基二环[3.2.0]庚
‑3‑
烯
‑6‑
酮(8.2min)
[0012](1S,5R)
‑3‑
乙基二环[3.2.0]庚
‑3‑
烯
‑6‑
酮(9.5min)。
[0013]申请人尝试了该专利公开的方法分离米洛巴林中间体及其对映异构体，实验结果显示峰型不尖锐，峰响应不高，主峰理论塔板数较低，勉强超过5000，柱效差，灵敏度较低，载气需要使用氦气，成本较高；且该方法对样品反应液中水分含量要求较高，中控检测时样品需先经干燥处理后才能进样，气相操作安全性较差。

技术实现思路

[0014]本专利技术的要解决的问题是现有技术在分离米洛巴林中间体及其对映异构体时灵
敏度低、成本高、中控检测样品处理繁琐和安全性低的问题。
[0015]为解决上述问题，本专利技术提供一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法：
[0016]1)色谱条件：色谱柱采用多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素
‑
三(3,5
‑
二甲基苯基氨基甲酸酯)；采用浓度为0.02～0.10％磷酸水溶液
‑
乙腈为流动相，其比例为55～70∶45～30；检测波长为205nm～215nm；柱温为15～30℃；流动相流速为0.3～1.0mL/min；
[0017]2)供试品及系统适应性溶液的配制：将样品用乙腈水溶液溶解；
[0018]3)测定：精密量取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0019]所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自OD
‑
3R 250mm
×
4.6mm,3μm或OD
‑
RH150mm
×
4.6mm,5μm。
[0020]优选的，所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自OD
‑
3R 250mm
×
4.6mm,3μm或两根串联的OD
‑
RH 250mm
×
4.6mm,5μm。
[0021]本专利技术实施例，所述磷酸水溶液的浓度为0.05～0.10％；所述磷酸水溶液
‑
有机相的比例为60～65∶40～35。
[0022]本专利技术实施例，所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自OD
‑
3R 250mm
×
4.6mm,3μm；采用浓度为0.05％磷酸水溶液
‑
乙腈为流动相，其比例为60∶40。所述流动相流速为0.5mL/min。
[0023]本专利技术实施例，所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自两根串联的OD
‑
RH 250mm
×
4.6mm,5μm；采用浓度为0.05％磷酸水溶液
‑
乙腈为流动相，其比例为65∶35。所述流动相流速为0.8mL/min。
[0024]本专利技术实施例，所述检测波长为210nm。
[0025]本专利技术实施例，所述柱温为20～25℃。
[0026]分离度，用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标，用R表示，R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1.0时，两峰有部分重叠，当R＝1.0时，分离度可达98％，当R＝1.5时，分离度可达99.7％。
[0027]有益效果：本专利技术的高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法可实现米洛巴林中间体及其对映异构体完全分离，进样重复性良好，方法耐用性好，且灵敏度高、成本低、中控检测时样品含水分可直接稀释进样，后处理简单方便和安全性高，可用于米洛巴林中间体的质量控制。
附图说明
[0028]图1、实施例1
‑
d液相色谱图。
[0029]图2、实施例2
‑
f液相色谱图。
[0030]图3、实施例2
‑
i液相色谱图。
[0031]图4、实施例2
‑
m液相色谱图。
[0032]图5、原研CN104245951B(载气为氮气)方法的气相色谱图。
[0033]图6、原研CN104245951B(载气为氦气)方法的气相色谱图。
具体实施方式
[0034]实施例1：色谱条件的筛选(正相柱)
[0035]通过色谱柱、流动相、波长、流速等进行筛选确定色谱条件。
[0036]实施例1
‑
a
[0037]色谱柱：AD
‑
H柱250mm
×
4.6mm,5μm；
[0038]检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：0.5mL/min；
[0039]流动相为正己烷∶乙醇＝80∶20，按照0min、40min等度洗脱；
[0040本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法，其特征在于：1)色谱条件：色谱柱采用多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有纤维素
‑
三(3,5
‑
二甲基苯基氨基甲酸酯)；采用浓度为0.02～0.10％磷酸水溶液
‑
乙腈为流动相，其比例为55～70∶45～30；检测波长为205nm～215nm；柱温为15～30℃；流动相流速为0.3～1.0mL/min；2)供试品及系统适应性溶液的配制：将样品用乙腈水溶液溶解；3)测定：精密量取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法，其特征在于：所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自OD
‑
3R 250mm
×
4.6mm,3μm或OD
‑
RH 150mm
×
4.6mm,5μm。3.根据权利要求2所述的高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法，其特征在于：所述多糖衍生物反相涂敷型手性色谱柱选自OD
‑
3R 250mm
×
4.6mm,3μm或两根串联的OD
‑
RH 250mm
×
4.6mm,5μm。4.根据权利要求3所述的高效液相色谱法分离米洛巴林中间体及其对映异构体的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：嵇俊晔，丁文涛，梁兆娟，周西朋，刘永强，龚彦春，杨尚彦，
申请(专利权)人：南京威凯尔生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：