一种恩格列净中间体及其有关物质的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种恩格列净中间体及其有关物质的高效液相色谱检测方法。该检测方法包括：采用辛烷基硅烷键合硅胶或五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以pH值为2.5～6.5的磷酸水溶液或磷酸盐缓冲液为流动相A，以乙腈

【技术实现步骤摘要】
一种恩格列净中间体及其有关物质的高效液相色谱检测方法


[0001]本专利技术涉及药物化学分析领域，具体涉及一种恩格列净中间体及其有关物质的高效液相色谱检测方法。

技术介绍

[0002]恩格列净(Jardiance)是由勃林格殷格翰和礼来公司联合开发的一款钠
‑
葡萄糖协同转运蛋白
‑
2(SGLT
‑
2)抑制剂类药物，能够阻断肾脏中葡萄糖的再吸收作用，将过多的葡萄糖排泄到体外，从而达到降低血糖水平的效果，而且该降糖效果不依赖于β细胞功能和胰岛素抵抗。
[0003]恩格列净的关键中间体为恩格列净中间体A(CAS号：915095
‑
94
‑
2)，分子式：C
17
H
16
ClIO2，分子量：414.67，结构式如下：
[0004][0005]恩格列净中间体A
[0006]根据专利文献CN101193903B，恩格列净中间体A的合成路线如下：
[0007]通常情况下，经过上述合成路线的反应，所得恩格列净中间体A中会含有未反应完全的起始原料、中间体以及降解产物等有关物质，其中，
[0008]恩格列净有关物质A1为合成工艺起始原料，分子式：C
13
H7ClFIO，分子量：360.55，化学结构式如下：
[0009][0010]恩格列净有关物质A2为合成工艺起始原料的位置异构体，分子式：C
13
H7ClFIO，分子量：360.55，化学结构式如下：
[0011][0012]恩格列净有关物质A3为第一步反应产生的中间体，分子式：C
17
H
14
ClIO3，分子量：428.65，化学结构式如下：
[0013][0014]恩格列净有关物质A6为第一步反应中有关物质A2的衍生杂质，分子式：C
17
H
14
ClIO3，分子量：428.65，化学结构式如下：
[0015][0016]恩格列净有关物质A7为第一步反应的工艺杂质，由中间体A脱碘产生，分子式：C
17
H
15
ClO3，分子量：302.75，化学结构式如下：
[0017][0018]恩格列净有关物质A8为第一步反应的工艺杂质，由起始原料A1与两分子(S)
‑3‑
羟基四氢呋喃反应产生，分子式：C
21
H
21
IO5，分子量：480.29，化学结构式如下：
[0019][0020]恩格列净有关物质A5为第二步反应中有关物质A7的衍生杂质，分子式：C
17
H
17
ClO2，分子量：288.77，化学结构式如下：
[0021][0022]恩格列净有关物质A4为第二步反应中有关物质A6的衍生杂质，分子式：C
17
H
16
ClIO2，分子量：414.67，化学结构式如下：
[0023][0024]CN112986456A公开了一种恩格列净中间体的分析检测方法，但是该方法不能有效地分离上述合成路线的恩格列净中间体A及其有关物质。
[0025]CN106706768B公开了一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，同样，该方法不能有效地分离上述合成路线的恩格列净中间体A及其有关物质。
3C18
‑
PFP，150
×
4.6mm，3μm；Agilent ZORBAX RX
‑
C8，250
×
4.6mm，5μm。
[0038]进一步地，优选pH值为2.5～3.5的磷酸水溶液或磷酸盐缓冲液，更优选pH值为3的磷酸水溶液。
[0039]进一步地，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢铵和磷酸氢二铵，磷酸盐缓冲液的浓度为0.005～0.01mol/L。
[0040]进一步地，所述流动相B中乙腈与甲醇或乙腈与四氢呋喃的体积比为100:0～70:30；优选乙腈与甲醇的体积比为80:20，或者，优选乙腈与四氢呋喃的体积比为90:10。
[0041]进一步地，所述梯度洗脱程序见表1。
[0042]表1
[0043][0044]优选梯度洗脱程序见表2。
[0045]表2
[0046][0047]进一步地，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min；优选为1.0ml/min。
[0048]进一步地，所述色谱柱的柱温为20～40℃；优选为25～35℃，更优选为30℃。
[0049]进一步地，检测波长为210～230nm；优选为220nm。
[0050]进一步地，稀释剂为有机溶剂和纯化水的混合溶液；所述有机溶剂与纯化水的体积比为40：60～60：40，优选有机溶剂与纯化水的体积比为50：50。
[0051]进一步地，所述有机溶剂为乙腈、甲醇，或者乙腈和甲醇的混合有机溶剂，其中所述混合有机溶剂中乙腈与甲醇的体积比为30～50：5～15，优选40：10。
[0052]进一步地，所述供试品溶液的浓度为0.3～0.8mg/ml，优选为0.5mg/ml。
[0053]进一步地，所述进样体积为5～10μl。
[0054]进一步地，在检测步骤之前进行溶液配制：
[0055]空白溶液：稀释剂
[0056]杂质对照品贮备液：分别取有关物质A1对照品、有关物质A2对照品、有关物质A3对照品、有关物质A4对照品、有关物质A5对照品、有关物质A6对照品、有关物质A7对照品和有关物质A8对照品，先用乙腈溶解，再用稀释剂配制成各杂质对照品贮备液；各杂质对照品贮备液中有关物质的浓度均为0.3～0.8mg/ml，优选为0.5mg/ml；
[0057]系统适应性溶液：取恩格列净中间体A对照品和所述各杂质对照品贮备液，先用乙腈溶解，再用稀释剂配制成系统适应性溶液；系统适应性溶液中恩格列净中间体A的浓度为0.3～0.8mg/ml，优选为0.5mg/ml，各有关物质的浓度均为3～8μg/ml，优选为5μg/ml；
[0058]供试品溶液：取恩格列净中间体A，先用乙腈溶解，再用稀释剂配制成供试品溶液；供试品溶液中恩格列净中间体A的浓度为0.3～0.8mg/ml，优选为0.5mg/ml。
[0059]本专利技术中使用的恩格列净中间体A对照品经结构确证，纯度＞99％；本专利技术中使用的恩格列净中间体A为随机抽取的生产批次。
[0060]进一步地，本专利技术按照峰面积归一化法计算恩格列净中间体A的纯度及其有关物质A1
‑
A8的含量；以满足信噪比S/N不小于10，样品浓度的0.03％为定量限；以满足信噪比S/N约为3，样品浓度的0.01％为检测限。更进一步地，恩格列净中间体A及其有关物质A1
‑
A8之间的分离度均大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种恩格列净中间体A及其有关物质A1
‑
A8的高效液相色谱检测方法，其中所述恩格列净中间体A及其有关物质A1
‑
A8的结构式如下：所述检测方法的特征在于，1)色谱条件：采用辛烷基硅烷键合硅胶或五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以pH值为2.5～6.5的磷酸水溶液或磷酸盐缓冲液为流动相A，以乙腈
‑
甲醇溶液或乙腈
‑
四氢呋喃溶液为流动相B，进行梯度洗脱；2)检测步骤：分别将空白溶液、系统适应性溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测，并记录色谱图。2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述色谱柱的柱长为150～250mm，填料粒径3～5μm，柱内径为4.6mm；优选选自Thermo Accucore XL C8，150mm
×
4.6mm，4μm；Phenomenex Kinetex F5，250
×
4.6mm，5μm；ACE 3C18
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PFP，150
×
4.6mm，3μm；Agilent ZORBAX RX
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C8，250
×
4.6mm，5μm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述流动相A为pH值为2.5～3.5的磷酸水溶液或磷酸盐缓冲液，优选pH值为3的磷酸水溶液；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢铵和磷酸氢二铵；磷酸盐缓冲液的浓度为0.005～0.01mol/L。4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述流动相B中乙腈与甲醇或乙腈与四氢呋喃的体积比为100:0～70:30；优选乙腈与甲醇的体积比为80:20，或者，优选乙腈与四氢呋喃的体积比为90:10。5.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述梯度洗脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐定洪，唐梓杰，石岳崚，赵富录，陈明龙，徐丹萍，李金涛，
申请(专利权)人：浙江海翔川南药业有限公司上海海翔医药科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：