一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，对人或模型动物脂肪组织注射装载有siRNA的病毒载体，病毒为腺相关病毒、慢病毒或腺病毒。还公开一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的应用，将上述方法，应用于治疗阿尔兹海默症。本发明专利技术通过利用宿主自身的器官分泌的外泌体作为载体，克服siRNA靶向递送中的血脑屏障的制约，有效的将靶向BACE1的siRNA运送至神经元中，降低了Aβ沉积改善阿尔兹海默症的认知损伤，解决了传统siRNA递送载体具有的免疫原性和毒性问题；方法灵活可变，可实现不同siRNA的同时递送，不需经过复杂的体外外泌体预组装过程，极大降低成本及风险，便于规模化临床应用。便于规模化临床应用。便于规模化临床应用。

【技术实现步骤摘要】
一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法及应用。

技术介绍

[0002]老龄化进程进一步加重，伴随而来的是一个不可忽视的问题：中枢神经系统相关疾病，如老年痴呆(阿尔兹海默病)、帕金森、脑肿瘤等发病率的升高。老年痴呆症是继心血管病、脑血管病和癌症之后，成了老人健康的“第四大杀手”，且目前尚无有效治疗或逆转疾病进展的药物。中枢神经系统由于血脑屏障的存在，目前大多数的药物无法穿过，这使得对中枢神经系统疾病的治疗成为一大挑战。因此，研发高效、安全的中枢药物递送方法成为治疗神经系统疾病的关键。
[0003]小干扰RNA(siRNA)特异性抑制致病靶向基因的表达，起到治疗疾病的作用。外泌体可以包裹小RNA(包括miRNA和siRNA)并分泌至循环系统，而分泌出来的外泌体可靶向受体细胞，将siRNA递送到受体细胞并发挥生物学功能。由于外泌体是细胞自身分泌的囊泡，与其他载体相比，其具有低免疫原性和低毒性的特点，是一种良好的小RNA天然载体。而为了让外泌体更好的靶向中枢，现有技术通过脑靶向肽(狂犬病毒糖蛋白RVG) 对外泌体进行修饰，但是这可能增加免疫反应。此外，传统的基于外泌体 siRNA递送的策略中，siRNA需要在体外培养环境与外泌体进行预组装，该方法成本较高，过程复杂且风险不易控制，得到的外泌体难以达到临床需求，这很大程度上限制了其大规模的应用。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术期望提供一种基于脂肪组织靶向神经元递送siRNA 药物的方法及应用，能够有效的将靶向BACE1的siRNA运送至神经元中，降低了Aβ沉积改善阿尔兹海默症的认知损伤，提供了低免疫原性和低毒性的靶向神经元的给药方式；而且，本专利技术方法不需经过复杂的体外外泌体预组装过程，极大降低成本及风险，便于规模化临床应用。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，对人或模型动物脂肪组织注射装载有siRNA的病毒载体，所述病毒为腺相关病毒、慢病毒或腺病毒。
[0007]这里，可装载不同siRNA，实现不同siRNA的同时递送，操作简便，不需经过复杂的体外外泌体预组装过程，极大降低成本及风险，便于规模化临床应用。
[0008]进一步地，所述腺病毒为rAAV
‑
siRNA腺相关病毒。
[0009]进一步地，所述病毒为rAAV
‑
siBACE1腺相关病毒。
[0010]进一步地，所述病毒为rAAV
‑
palm
‑
mCherry腺相关病毒。
[0011]进一步地，所述模型动物为小鼠。
[0012]这里，所述小鼠可以为AAP/PS1小鼠或C57小鼠，AAP/PS1小鼠为AD 老年痴呆小鼠。
[0013]进一步地，所述脂肪组织为内脏脂肪组织、皮下脂肪组织、臀股脂肪组织、肌间脂
肪组织、心外脂肪组织、性腺脂肪组织或棕色脂肪组织。
[0014]这里，向上述任意一种脂肪组织注射装载siRNA的病毒载体，均有中枢靶向递送siRNA的功能。
[0015]本专利技术还另外提供了一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的应用，将上述一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，应用于治疗阿尔兹海默症。
[0016]这里，病毒注射进脂肪组织后，以宿主自身分泌的外泌体为载体，将 siRNA靶向递送至目的区域并发挥生物学功能，解决传统siRNA递送载体具有的免疫原性和毒性问题。
[0017]本专利技术有益效果如下：1)本专利技术方法通过利用宿主自身的器官分泌的外泌体作为载体，克服siRNA靶向递送中的血脑屏障的制约，有效的将靶向 BACE1的siRNA运送至神经元中，降低了Aβ沉积改善阿尔兹海默症的认知损伤，解决了传统siRNA递送载体具有的免疫原性和毒性问题；2)本专利技术方法灵活可变，可实现不同siRNA的同时递送，操作简便，不需经过复杂的体外外泌体预组装过程，极大降低成本及风险，便于规模化临床应用。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例1中小鼠海马区palm
‑
mCherry荧光蛋白分布图；
[0019]图2为本专利技术实施例1中小鼠主要脑区mCherry分布的荧光强度统计图；
[0020]图3为本专利技术实施例2中小鼠脂肪组织提取外泌体镜检图；
[0021]图4为本专利技术实施例2中小鼠脂肪组织提取外泌体Nanosight分析图；
[0022]图5为本专利技术实施例2中脂肪组织外泌体中siBACE1的含量检测结果图；
[0023]图6为本专利技术实施例3中小鼠海马siBACE1的含量检测结果图；
[0024]图7为本专利技术实施例3中siBACE1 mRNA含量检测结果图；
[0025]图8为本专利技术实施例3中siBACE1表达蛋白检测及含量统计图；
[0026]图9为本专利技术实施例3中小鼠水迷宫上台潜伏时间对照图；
[0027]图10为本专利技术实施例3中小鼠水迷宫处于目的象限时间对照图；
[0028]图11为本专利技术实施例3中水迷宫实验小鼠脑组织免疫荧光染色及Aβ蛋白检测图；
[0029]图12为本专利技术实施例4中小鼠脑中小胶质细胞的染色及统计图；
[0030]图13为本专利技术实施例4中炎症因子浓度检测结果图。
具体实施方式
[0031]为了能够更加详尽地了解本专利技术的特点与
技术实现思路
，下面结合附图对本专利技术的实现进行详细阐述，所附附图仅供参考说明之用，并非用来限定本专利技术。
[0032]实施例1
[0033]脂肪组织外泌体体内靶向中枢检测与验证
[0034]1、制备rAAV
‑
palm
‑
mCherry腺相关病毒
[0035]rAAV
‑
palm
‑
mCherry病毒为rAAV
‑
CMV
‑
palm
‑
mCherry
‑
WPRE
‑
hGH pA，由武汉枢密脑科学技术有限公司构建，palm
‑
mCherry序列如下：
[0036]AtgctgtgctgtatgagaagaaccaaacagATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGGATAACATG GCCATCATCAAGGAGTTCATGCGCTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCGTGAACGGCC ACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACC GCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCGCCT
GGGACATCCTGTCCC CTCAGTTCAT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，其特征在于，对人或模型动物脂肪组织注射装载有siRNA的病毒载体，所述病毒为腺相关病毒、慢病毒或腺病毒。2.根据权利要求1所述的一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，其特征在于，所述腺病毒为rAAV
‑
siRNA腺相关病毒。3.根据权利要求1所述的一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，其特征在于，所述病毒为rAAV
‑
siBACE1腺相关病毒。4.根据权利要求1所述的一种基于脂肪组织的中枢靶向递送siRNA的方法，其特征在于，所述病毒为rAAV...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕艳，王进，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：