结合EGFRVIII的单克隆抗体及其应用制造技术

所公开的是特异性结合表皮生长因子受体(EGFR)变体(v)III的单克隆抗体和抗原结合片段、其偶联物和嵌合抗原受体。还公开了编码抗体的重链和轻链结构域和嵌合抗原受体(CAR)的核酸分子，以及表达该核酸分子的宿主细胞。此外，公开了这些单克隆抗体、抗原结合片段、偶联物和表达CAR的T细胞的用途，例如用于治疗表达EGFRvIII的肿瘤。还公开了用于检测表达EGFRvIII的肿瘤的方法。EGFRvIII的肿瘤的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合EGFRVIII的单克隆抗体及其应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年7月2日提交的美国临时申请No.62/869,956的权益，通过引用将其全文并入本文。
[0003]政府支持声明
[0004]本专利技术是在政府支持下由美国国立卫生研究院国家癌症研究所在项目编号Z01#：Z1A BC 008757下完成的。美国政府对本专利技术拥有某些权利。


[0005]本申请涉及癌症生物学领域，特别涉及特异性结合人表皮生长因子受体(EGFR)变体III(vIII)的单克隆抗体及其抗原结合片段。

技术介绍

[0006]EGFR经常参与人类癌症的致癌进展。包括基因扩增和激活突变在内的各种表达改变促进了肿瘤发生。这种大受体具有621个氨基酸的外部结构域(ECD)、23个氨基酸的单跨膜结构域(TM)和542个氨基酸的酶活性胞内结构域(ICD)。EGFR是受体酪氨酸激酶家族的成员，是第一个证实与人类癌症正相关的受体。配体结合导致受体二聚体形成和激酶结构域的激活，其向可促进哺乳动物细胞生长、存活和扩散的几种途径之一发出信号。激活突变可以发生在ECD或ICD中；还有基因扩增和大缺失，例如丢失外显子2
‑
7以产生EGFR变体(v)III或丢失外显子19以产生组成型活性的酶突变体。仅对于癌细胞报告了EGFRvIII表达或外显子19的缺失。仍然需要可以结合EGFRvIII但不能结合野生型EGFR的抗体。

技术实现思路

[0007]所公开的是分离的单克隆抗体及其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体特异性结合EGFRvIII。在一些实施方案中，该单克隆抗体或其抗原结合片段，包括a)分别包括SEQ ID NO:1和2所示重链可变区(V
H
)和轻链可变区(V
L
)的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3以及轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；b)分别包括SEQ ID NO:11和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；c)分别包括SEQ ID NO:13和14所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；或d)分别包括SEQ ID NO:15和16所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
。
[0008]在一些实施方案中，权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括：a)分别包括SEQ ID NO:17和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；b)分别包括SEQ ID NO:26和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；c)分别包括SEQ ID NO:29和30所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；d)分别包括SEQ ID NO:39和40所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；e)分别包括SEQ ID NO:43和44所
示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；或f)分别包括SEQ ID NO:53和54所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
。
[0009]在其他实施方案中，公开了这些抗体和抗原结合片段的偶联物。在其他实施方案中，公开了包括这些抗体或抗原结合片段的嵌合抗原受体。在更多实施方案中，公开了表达这些嵌合抗原受体的T细胞。
[0010]在一些实施方案中，公开了编码这些单克隆抗体的V
H
和/或V
L
的核酸分子、包括这些核酸的载体以及用这些核酸分子和/或载体转化的宿主细胞。
[0011]在进一步的实施方案中，公开了这些单克隆抗体用于抑制受试者中表达EGFRvIII的肿瘤的用途。在其他实施方案中，公开了这些单克隆抗体用于检测EGFRvIII的用途。
[0012]本专利技术的上述和其他特征和优点将从以下参照附图进行的几个实施方案的详细描述中变得更加明显。
[0013]附图简要说明
[0014]图1A
‑
1B.(1A)EGFR、(1B)与KLH偶联的EGFRvIII肽抗原(aa 286
‑
303)的示意图。此外，还显示了环的位置和ma528在EGFR结构域III上的大致结合位点。SEQ ID NO:69显示在图1A和1B中。
[0015]图2.单个杂交瘤上清液对wtEGFR
‑
His和EGFRvIII
‑
His(ELISA)的酶联免疫吸附测定(ELISA)反应性结果的条形图，包括作为阳性对照的528。
[0016]图3.杂交瘤上清液与细胞：MDA
‑
MB
‑
468、A431、F98
EGFR
和F98
npEGFRvIII
细胞的反应性的条形图。结果显示抗体特异性结合。ma528是对照。
[0017]图4.SDS
‑
PAGE凝胶显示从A/G柱洗脱的七种单克隆抗体的纯度。
[0018]图5.ELISA方式中纯化的单克隆抗体与wtEGFR
‑
His和EGFRvIII
‑
His的反应性。
[0019]图6A
‑
6C.使用流式细胞仪检测的纯化单克隆抗体对完整细胞的反应性。A.MDA
‑
MB
‑
468；A431 B.F98
EGFR
；F98
npEGFRvIII
；C.WI
‑
38。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括：a)分别包括SEQ ID NO:1和2所示V
H
和V
L
的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3以及轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3的重链可变区(V
H
)和轻链可变区(V
L
)；b)分别包括SEQ ID NO:11和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；c)分别包括SEQ ID NO:13和14所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；或d)分别包括SEQ ID NO:15和16所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
，其中所述单克隆抗体特异性结合表皮生长因子受体(EGFR)变体III(vIII)。2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括a)分别包括SEQ ID NO:17和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；b)分别包括SEQ ID NO:26和12所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；c)分别包括SEQ ID NO:29和30所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；d)分别包括SEQ ID NO:39和40所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；e)分别包括SEQ ID NO:43和44所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
；或f)分别包括SEQ ID NO:53和54所示V
H
和V
L
的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的V
H
和V
L
。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中a)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:5、6、7、8、9和10所示氨基酸序列；b)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:20、21、22、23、24和25所示氨基酸序列；c)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:20、28、22、23、24和25所示氨基酸序列；d)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:33、34、35、36、37和38所示氨基酸序列；e)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:47、48、49、50、51和52所示氨基酸序列；或f)所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:47、57、49、58、51和52所示氨基酸序列。4.如前述权利要求任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中a)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:1和2所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；
b)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:17和12所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；c)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:26和12所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；d)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:29和30所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；e)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:39和40所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；f)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:43和44所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列；或g)所述V
H
和V
L
分别包括与SEQ ID NO:53和54所示氨基酸序列有至少90％一致性的氨基酸序列。5.如前述权利要求任一项所述的抗体或其抗原结合片段，包括人框架区。6.如权利要求1
‑
4所述的抗体或其抗原结合片段，其中：a)所述V
H
和V
L
分别包括SEQ ID NO:1和2所示氨基酸序列；b)所述V
H
和V
L
分别包括SEQ ID NO:17和12所示氨基酸序列；c)所述V
H
和V
L
分别包括SEQ ID NO:26和12所示氨基酸序列；d)所述V
H
和V
L
分别包括SEQ ID NO:29和30所示氨基酸序列；e)所述V

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部的部长所代表，
类型：发明
国别省市：