【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、一些癌症的治疗选项可能非常有限，特别是当癌症发生转移且无法切除时。尽管在诸如手术、化疗和放疗等治疗方面取得了进展，但许多癌症，诸如胰腺癌、结直肠癌、肺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和前列腺癌的预后可能很差。因此，对于癌症的额外治疗存在未满足的需求。
技术实现思路
1、本申请的一方面提供了对人p53c135y、人p53r175h或人p53m237i氨基酸序列具有抗原特异性的经分离的或经纯化的t细胞受体(tcr)，其中所述tcr包含氨基酸序列：(1)seq idno:2-4的全部；(2)seq id no:5-7的全部；(3)seq id no:2-7的全部；(4)seq id no:17-19的全部；(5)seq id no:20-22的全部；(6)seq id no:17-22的全部；(7)seq id no:32-34的全部；(8)seq id no:35-37的全部；(9)seq id no:32-37的全部；(10)seq id no:47-49的全部；(11)seq id no:50-52的全部；(12)seq id no:47-52的全部；(13)seq id no:62-64的全部；(14)seq id no:65-67的全部；或(15)seq id no:62-67的全部。
2、本申请的其他方面提供了与本申请的tcr有关的多肽、蛋白质、核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群和药物组合物。
3、本申请的又一方面提供了检测哺乳动物中癌症的存在
4、本申请的另外的方面提供了产生表达tcr的宿主细胞的方法以及产生tcr、多肽或蛋白质的方法。
5、附图的若干视图的简要说明
6、图1a是显示来自肿瘤片段编号f1-f24的患者4316til与靶细胞共培养后测量的ifn-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。靶细胞是自体树突状细胞(dc)，其(i)用包含p53 c135y的肽池(pp)脉冲；(ii)用编码p53 c135y的串联小基因(tmg)rna或无关tmg转染；或(iii)用dmso处理(对照)处理。用pms/离子霉素处理的til作为阳性对照。带有p53反应性突变体的片段22被加框。
7、图1b显示了将来自患者4316的til与用dmso(载体)、无关肽kiaa1328 k386r或所指示的p53-c135y突变体肽脉冲的自体dc共培养后，通过流式细胞术测量的表达4-1bb和cd4的til百分比。用pma/离子霉素处理的til作为阳性对照。
8、图1c是显示用4316-d tcr转导的pbl与用系列稀释的25聚体肽p53-c135y或wtp53-c135脉冲的自体未成熟dc共培养后，表达4-1bb的表达鼠源tcr恒定区t细胞(mtcr+)的百分比的图。
9、图2显示了在针对p53 r175h的体外致敏(ivs)(右列)或不ivs(左列)后，将来自患者4141的til与靶细胞共培养后，通过流式细胞术测得的表达ox40和4-1bb的t细胞的百分比。靶细胞是用dmso、p53 r175h突变体肽或相应的wt p53 r175肽脉冲的自体dc。t细胞活化标记物4-1bb和ox40上调的活化t细胞以粗体标出。me，最小表位。图3a是显示来自肿瘤片段编号f1-f24的患者4304 til与靶细胞共培养后测量的ifn-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。靶细胞是自体dc，其(i)用包括p53 m237i的pp脉冲；(ii)用编码p53 m237i的tmg rna或无关tmg转染；或(iii)用dmso处理(对照)。用pms/离子霉素处理的til作为阳性对照。
10、图3b显示了通过流式细胞术测量的从患者4304的肿瘤消化物中分选的表达cd39和cd103的cd4+t细胞的百分比。
11、图3c是显示靶细胞与效应细胞共培养后测量的ifn-γ斑点数量(每2e4细胞)的图。效应细胞是从4304号患者的肿瘤中分选的cd4+cd103+cd39+(正方形)、cd4+cd103-cd39+(三角形)或cd4+cd103-cd39-(圆圈)细胞。靶细胞是自体dc，其(i)用包括p53 m237i的pp脉冲；(ii)用编码p53 m237i的tmg rna或对照tmg转染；或(iii)用dmso处理(对照)。单独培养的til(仅til)作为对照。
12、图3d-3f是显示在用连续稀释的25聚体肽p53-m237i或wtp53-m237脉冲的自体未成熟dc与效应细胞共培养之后，表达鼠源tcr恒定区、表达4-1bb的cd3+cd4+t细胞(mtcr+)的百分比的图。所述效应细胞是用编码4304 tcr-2(图3d)、4304 tcr-4(图3e)或4304t cr-k(图3f)的重组表达载体独立转导的pbl。
13、图4a-4b显示4141 ivs tcr转导细胞与肿瘤细胞系sk-mel-5(4a)、saos2(4a)、saos2 r175h(4a)、cem/c1(4b)、tyk-nu(4b)、或kle(4b)共培养后表达4-1bb和ox40的4141ivs tcr转导细胞的百分比。所述细胞系被标示为p53 r175h和hla-a*02:01表达呈阳性(+)或阴性(-)。
14、图5a-5b显示九个p53剪接变体的氨基酸序列的比对。sp|p04637|p53_human(seqid no:1)；sp|p04637-2|p53_human(seq id no:81)；sp|p04637-3|p53_human(seq id no:82)；sp|p04637-4|p53_human(seq id no:83)；sp|p04637-5|p53_human(seq id no:84)；sp|p04637-6|p53_human(seq id no:85)；sp|p04637-7|p53_human(seq id no:86)；sp|p04637-8|p53_human(seq id no:87)；和sp|p04637-9|p53_human(seq id no:88)。比对从图5a中所示的n末端开始，并继续通过图5b中所示的c末端。
15、图6显示了通过流式细胞术测量的4316-d tcr转导细胞与靶细胞共培养后表达4-1bb和ox40的4316-d tcr转导细胞的百分比。靶细胞是4316自体患者来源的异种移植(pdx)肿瘤细胞，在不存在ifn-γ(顶行)或存在ifn-γ(底行)的情况下，用dmso(左列)、wtp53(中列)或p53突变体肽(右列)脉冲。
16、图7a是说明临床前期异种移植小鼠的产生和治疗方案的示意图。免疫受损的雌性nsg(nod scid gamma)小鼠被注射了200万个天然表达p53r175h突变和hla-a*02:01的tyk-nu卵巢细胞。两周后，这些小鼠接本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经分离的或经纯化的T细胞受体(TCR)，其对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
2.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
3.根据权利要求1或2所述的TCR，其中所述TCR包含以下氨基酸序列:
4.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53C135Y氨基酸序列是TCTYSPALNKMFYQLAKTCPVQLWV(SEQ ID NO:90)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列TCTYSALNKMFCQLAKTCPVQLWV(SEQ ID NO:89)不具有抗原特异性。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53R175H氨基酸序列是HMTEVVRHC(SEQ ID NO:92)。
7.根据权利要求1-3和6中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列HMTEVVRRC(SEQ ID NO:91)
8.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述人p53M237I氨基酸序列是VGSDCTTIHYNYICNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:94)。
9.根据权利要求1-3和8中任一项所述的TCR，其中所述TCR对野生型人p53氨基酸序列VGSDCTTIHYNYMCNSSCMGGMNRR(SEQ ID NO:93)不具有抗原特异性。
10.一种经分离的或经纯化的多肽，其包含权利要求1-9中任一项所述的TCR的功能性部分，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
11.根据权利要求10所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
12.根据权利要求10或11所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
13.一种经分离的或经纯化的蛋白质，其包含第一和第二多肽链，其中:
14.根据权利要求13所述的蛋白质，其中:
15.根据权利要求13或14所述的蛋白质，其中:
16.一种经分离或经纯化的核酸，其包含编码权利要求1-9中任一项所述的TCR、权利要求10-12中任一项所述的多肽、或权利要求13-15中任一项所述的蛋白质的核苷酸序列。
17.一种经分离或经纯化的核酸，其从5'至3'包含第一核酸序列和第二核苷酸序列，其中所述第一和第二核苷酸序列分别编码下述氨基酸序列：SEQ ID NO:8和9；9和8；10和11；11和10；12和13；13和12；14和15；15和14；23和24；24和23；25和26；26和25；27和28；28和27；29和30；30和29；38和39；39和38；40和41；41和40；42和43；43和42；44和45；45和44；53和54；54和53；55和56；56和55；57和58；58和57；59和60；60和59；68和69；69和68；70和71；71和70；72和73；73和72；74和75；或75和74。
18.根据权利要求17所述的经分离或经纯化的核酸，其进一步包含插入所述第一和第二核苷酸序列之间的第三核苷酸序列，其中所述第三核苷酸序列编码可切割的接头肽。
19.根据权利要求18所述的经分离或经纯化的核酸，其中所述可切割的接头肽包含氨基酸序列RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVENPGP(SEQ ID NO:80)。
20.根据权利要求19所述的经分离或经纯化的核酸，其编码选自SEQ ID NO:16、31、46、61和76的氨基酸序列。
21.一种重组表达载体，其包含根据权利要求16-20中任一项所述的核酸。
22.根据权利要求21所述的重组表达载体，其为转座子或慢病毒载体。
23.一种经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质，其由根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述的载体编码。
24.一种经分离的或经纯化的TCR、多肽或蛋白质，其由根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述的载体在细胞中表达而产生。
25.一种产生表达对人p53C135Y、人p53R175H或人p53M237I氨基酸序列具有抗原特异性的TCR的宿主细胞的方法，所述方法包括使细胞在体外与根据权利要求21或22所述的载体在允许将所述载体引入所述细胞的条件下接触。
26.一种经分离的或经纯化的宿主细胞，其包含根据权利要求16-20中...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经分离的或经纯化的t细胞受体(tcr)，其对人p53c135y、人p53r175h或人p53m237i氨基酸序列具有抗原特异性，其中所述tcr包含以下氨基酸序列:
2.根据权利要求1所述的tcr，其中所述tcr包含以下氨基酸序列:
3.根据权利要求1或2所述的tcr，其中所述tcr包含以下氨基酸序列:
4.根据权利要求1-3中任一项所述的tcr，其中所述人p53c135y氨基酸序列是tctyspalnkmfyqlaktcpvqlwv(seq id no:90)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的tcr，其中所述tcr对野生型人p53氨基酸序列tctysalnkmfcqlaktcpvqlwv(seq id no:89)不具有抗原特异性。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的tcr，其中所述人p53r175h氨基酸序列是hmtevvrhc(seq id no:92)。
7.根据权利要求1-3和6中任一项所述的tcr，其中所述tcr对野生型人p53氨基酸序列hmtevvrrc(seq id no:91)不具有抗原特异性。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的tcr，其中所述人p53m237i氨基酸序列是vgsdcttihynyicnsscmggmnrr(seq id no:94)。
9.根据权利要求1-3和8中任一项所述的tcr，其中所述tcr对野生型人p53氨基酸序列vgsdcttihynymcnsscmggmnrr(seq id no:93)不具有抗原特异性。
10.一种经分离的或经纯化的多肽，其包含权利要求1-9中任一项所述的tcr的功能性部分，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
11.根据权利要求10所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
12.根据权利要求10或11所述的多肽，其中所述多肽包含以下氨基酸序列:
13.一种经分离的或经纯化的蛋白质，其包含第一和第二多肽链，其中:
14.根据权利要求13所述的蛋白质，其中:
15.根据权利要求13或14所述的蛋白质，其中:
16.一种经分离或经纯化的核酸，其包含编码权利要求1-9中任一项所述的tcr、权利要求10-12中任一项所述的多肽、或权利要求13-15中任一项所述的蛋白质的核苷酸序列。
17.一种经分离或经纯化的核酸，其从5'至3'包含第一核酸序列和第二核苷酸序列，其中所述第一和第二核苷酸序列分别编码下述氨基酸序列：seq id no:8和9；9和8；10和11；11和10；12和13；13和12；14和15；15和14；23和24；24和23；25和26；26和25；27和28；28和27；29和30；30和29；38和39；39和38；40和41；41和40；42和43；43和42；44和45；45和44；53和54；54和53；55和56；56和55；57和58；58和57；59和60；60和59；68和69；69和68；70和71；71和70；72和73；73和72；74和75；或75和74。
18.根据权利要求17所述的经分离或经纯化的核酸，其进一步包含插入所述第一和第二核苷酸序列之间的第三核苷酸序列，其中所述第三核苷酸序列编码可切割的接头肽。
19.根据权利要求18所述的经分离或经纯化的核酸，其中所述可切割的接头肽包含氨基酸序列rakrsgsgatnfsllkqagdvenpgp(seq id no:80)。
20.根据权利要求19所述的经分离或经纯化的核酸，其编码选自seq id no:16、31、46、61和76的氨基酸序列。
21.一种重组表达载体，其包含根据权利要求16-20中任一项所述的核酸。
22.根据权利要求21所述的重组表达载体，其为转座子或慢病毒载体。
23.一种经分离的或经纯化的tcr、多肽或蛋白质，其由根据权利要求16-20中任一项所述的核酸或根据权利要求21或22所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·金，N·查克莱基斯，S·A·罗森博格，F·J·洛维利三世，M·R·帕克赫斯特，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部的部长所代表，
类型：发明
国别省市：
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