用于治疗肢体缺血的激活的间充质干细胞制造技术

本发明专利技术提供了用于治疗人患者的肢体缺血的安乃近处理的间充质干细胞。本发明专利技术提供了药物产品，所述药物产品用于血管生成生长，以取代闭塞的血管，以避免肢体截肢。通过激活间充质干细胞(MSC)来刺激血管生成生长因子VEGFA、HGF、bFGF、TEK的分泌并降低促炎症细胞因子IF6、CXCF8、CCF2、IL1

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肢体缺血的激活的间充质干细胞


[0001]细胞疗法的进展和成功依赖于使我们能够通过刺激增殖、分化和整合到再生组织和器官来操纵干细胞的技术。可以在细胞疗法程序的不同阶段(包括细胞分离、细胞繁殖、移植和移植后的预处理(conditioning))操纵分离的干细胞。本专利技术涉及使用临床批准的抗炎药以调节从脂肪组织分离的间充质干细胞的活性。可以将包括血管生成因子和细胞因子的不同生长因子的分泌调节以及代谢活性调节用于开发用于治疗各种健康病症的高效的基于MSC的药物产品。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSC)的特征在于它们以下的能力：在体外分化成各种各样细胞谱系，以及在再生过程中具有免疫调节功能(Augello&De Bari,2010)，(Shi et al.,2010)。与以特定剂量递送特定活性组分的药物治疗不同，MSC通过响应于外部刺激分泌各种生物活性化合物而发挥治疗作用(Ma et al.,2014)。由MSC产生的可溶性因子参与抗炎和新生血管形成过程，对组织损伤和再生具有深远影响。可以使用MSC治疗的疾病为例如免疫和非免疫疾患，诸如心肌梗死、糖尿病、移植物抗宿主病和肝硬化(Wei et al.,2013)(Shi et al.,2010)。了解MSC的免疫调节特性以及炎性微环境如何影响其功能的方式，对于以创建局部和/或全身条件以刺激愈合和组织再生的目标，开发更好的策略以提高MSC的治疗效率具有巨大的重要性。
[0003]周围动脉疾病是以归因于血管功能障碍而氧气和葡萄糖供应受限为特征的病症。周围血管疾病通常影响动脉，并且在最晚期会引起严重肢体缺血(CLI)。迄今为止，最常见的治疗选择包括药物治疗和手术(Norgren et al.,2007)，(Hamdy et al.,2013)，(Cull et al.,2014)。非甾体抗炎药和合成糖皮质激素注射被广泛用于降低CLI患者的疼痛和炎症。然而，在许多情况下，疾病进展的结果是坏疽和断肢。开发新的先进疗法可以改进临床结果，并提高患者的生活水平。在若干个动物模型和早期人临床试验中已经描述了MSC治疗缺血性病症的临床潜力(Liew&O'Brien,2012)。给药MSC以治疗急性缺血性疾患的效率和安全性示出极大的潜力。MSC的治疗效率取决于它提供免疫调节和血管生成因子以抑制炎症并刺激血管生成的能力。未激活的MSC表达低水平的免疫抑制因子，但注射部位的局部条件影响其功能性。为了改进MSC的治疗作用，已开发了不同的策略。通过IFNγ或TNFα刺激MSC已经被用于诱导免疫调节因子的分泌(Crop et al.,2010)。此外，与未改性的细胞相比，MSC中CXCR4的过表达导致MSC更有效地归巢到缺血性组织中(Cheng et al.,2008)。因此，MSC的免疫抑制和血管生成作用可以通过改变受影响/病变组织的条件或移植前MSC的预处理来刺激。由于用不同的抗炎药治疗具有肢体缺血的患者，因此了解这些药对MSC的抗炎和血管生成功能的结果是非常重要的。大多数NSAID的功能是通过经由抑制环氧合酶来阻断前列腺素合成。已知前列腺素PGE2是由MSC分泌的重要化合物之一，其负责炎症的调节。然而，NSAID在MSC抗炎疗法中对代谢响应的复合物以及抗炎和血管生成因子分泌的作用尚不清楚。
[0004]NSAID(对乙酰氨基酚、安乃近(analgin)、酮洛芬和双氯芬酸)和糖皮质激素泼尼松龙在临床实践中用于治疗缺血性疾患，以治疗剂量对细胞周期、代谢活性以及对通过AdMSC的血管生成和炎症细胞因子表达的作用已被分析并将在下文中描述。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供了一种药物产品，用于血管生成生长，以取代闭塞的血管，以避免肢体截肢。
[0006]专利技术人已经开发了刺激间充质干细胞以分泌调节剂的方案，所述调节剂影响缺血性肢体的再生并改进新生血小管新生和动脉生成。用安乃近(analgin)处理MSC，其活性成分是安乃近，改变细胞周期，刺激血管生成营养因子VEGF、HGF、TEK和bFGF的合成，降低炎症细胞因子和趋化因子诸如IL6、IL1RN、CCL2、IL8/CXCL8的表达。
[0007]使用肢体缺血的大鼠模型表明，在移植前用安乃近(analgin)处理MSC刺激手术肢体的新生血小管新生和动脉生成。
[0008]根据以下研究实例，AdMSC是细胞疗法以治疗严重肢体缺血(CLI)的前景和有希望的细胞来源。尽管将MSC应用于治疗CLI患者的初步研究很有希望，但MSC的潜力并不是很有效，并且关于它们在临床中的可行性使用存在许多问题。最近表明，MSC预处理和预激活显著改进了它们的免疫和治疗潜力。本专利技术提出了通过经由NSAID安乃近(analgin)预激活AdMSC来治疗CLI的新策略。安乃近对AdMSC的引发影响AdMSC的增殖和代谢活性，改变细胞周期，动态调节炎症细胞因子和趋化因子的表达谱，并诱导血管生成标志物的表达，这在疾病治疗的情况下是重要的。在大鼠上的临床前实验证明，由安乃近(analgin)激活的AdMSC通过它们的加速且可靠的新生动脉生成和新生血管生成，对于它们的治疗肢体缺血的治疗应用是更有效的。
[0009]在本专利技术中，通过激活间充质干细胞(MSC)来刺激血管生成生长因子VEGFA、HGF、bFGF、TEK的分泌并降低促炎症细胞因子IL6、CXCL8、CCL2、IL1
‑
RN的水平。
[0010]本专利技术提供了用于治疗人患者的肢体缺血的安乃近处理的间充质干细胞。该专利技术的药物产品包括安乃近处理的间充质干细胞。本产品为可注射形式，并且优选包括100万个细胞/kg患者。将细胞以75
‑
150万/kg患者体重的量给药。安乃近处理的细胞是微量浓度。
[0011]本专利技术还公开了生产包括安乃近处理的间充质干细胞的产品的方法。所述方法包括以下步骤：
[0012]·
收集脂肪组织
[0013]·
从脂肪组织分离间充质干细胞
[0014]·
MSC的复制
[0015]·
用活性成分影响MSC
[0016]根据研究，用安乃近处理MSC为所述产品的有效性提供了优势和假设。
[0017]作为治疗的结果，MSC为新血管的生长产生蛋白质和信号传导分子，从而加速新动脉的生长。已经研究了不同药对MSC的作用以及本专利技术中使用的药，安乃近对MSC的作用，并将在下文中描述。该专利技术的产品已经在动物上成功测试。
[0018]已知干细胞参与新生血管生成和新生动脉生成，并且先前的实验室研究和动物实验的目的是找到最有效的细胞药物组合。由于时间对具有严重腿部缺血的患者至关重要，
找到能尽快发挥作用的细胞药物是重要的。尽管迄今为止，该专利技术的产品仅在动物上测试，但根据现有技术，它被认为对人患者具有相同的作用。
附图说明
[0019]示出以下附图：
[0020]图1.用抗炎药(AID)处理的MSC的W本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用安乃近处理的间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞，用于治疗肢体缺血。3.一种包括安乃近处理的间充质干细胞的产品，用于治疗患者的肢体缺血。4.根据权利要求3所述的产品，其中，所述产品以100万个细胞/kg患者的剂量注射。5.根据权利要求3和4所述的产品，其中，细胞以75
‑
150万/kg患者体重的量给药。6.根据权利要求3至5所述的产品，其中，安乃近处理的细胞为微量浓度。7.根据权利要求3至6所述的产品，其中，所述患者是人。8.一种生产权利要求4所述的产品的方法，其中，所述方法包括以下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁斯，
申请(专利权)人：塔斯塔瓦临床外科有限公司，
类型：发明
国别省市：