一种测定依折麦布中脱氟杂质的高效液相色谱方法技术

本发明专利技术公开了一种依折麦布中脱氟杂质有关物质检测方法。采用苯基己基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇

【技术实现步骤摘要】
一种测定依折麦布中脱氟杂质的高效液相色谱方法


[0001]本专利技术涉及一种依折麦布中脱氟杂质有关物质检测方法，属于药物分析


技术介绍

[0002]依折麦布,英文名Ezetimibe，化学名为1
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(4
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氟苯基)
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3(R)
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[3
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(4
‑
氟苯基)
‑
3(S)
‑
羟丙基]‑
4(S)
‑
(4
‑
羟苯基)
‑2‑
氮杂环丁烷酮。化学结构式如下：
[0003][0004]依折麦布是由先灵葆雅(Schering
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Plough)公司和默克(Merck)公司共同研制开发的选择性胆固醇吸收抑制剂，它对胆固醇吸收的选择性抑制靶点为空肠刷状缘Ni
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emann
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Pick C1样蛋白(NPC1L1)。多项研究表明依折麦布与他汀类药物联合使用，可进一步提高降脂效能，其独特的作用机制与他汀药物的作用机制具有互补效应。
[0005]目前报道的依折麦布合成路线有多条，多条路线中最后一步反应均采用了催化氢化反应，此步反应中会产生脱氟杂质A及脱氟杂质B两个副反应产物，参考延边大学岳磊医学硕士学位论文《依折麦布生产中杂质研究与控制的工艺设计方案》中相关研究，这两个杂质的产生与反应体系是否含水及催化剂使用量有关。这两个杂质为同分异构体，结构式与依折麦布仅有一个氟原子的差别，因此很难将其进行完全分离，论文中对两个杂质的熔点、1H
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NMR、1C
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NMR及在依折麦布片进口注册标准有关物质条件下的保留时间均进行了比较，均一致。依折麦布及依折麦布片被USP收载后，分别采用依折麦布有关物质及依折麦布片有关物质项下的色谱条件对这两个杂质进行分离，发现脱氟杂质A及脱氟杂质B的保留时间均一致，上述条件均无法分离脱氟杂质A及脱氟杂质B。
[0006][0007]本专利技术采用苯基己基键合硅胶为填充剂的色谱柱，能够将依折麦布中降解产物环醚、脱氟杂质A、脱氟杂质B和依折麦布同时分离，专属性更强。方法开发过程中发现依折麦布降解产物环醚与脱氟杂质保留时间非常接近甚至一致，因此本方法开发过程中加入了降
解产物环醚，本专利技术中的方法可将降解产物环醚、脱氟杂质A、脱氟杂质B和依折麦布同时分离，准确检测依折麦布中的脱氟杂质A及脱氟杂质B的含量，灵敏度高，操作简便，对其工艺研究和生产中这两个杂质的控制具有重要的意义。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种可行性高、操作简便的依折麦布中脱氟杂质的分析方法，该方法能够同时达到依折麦布中降解产物环醚、脱氟杂质A、脱氟杂质B与依折麦布的完全分离和采用外标法准确测定依折麦布中脱氟杂质A及脱氟杂质B的含量。
[0009]本专利技术一种依折麦布中脱氟杂质的高效液相色谱方法的实现包括以下步骤：
[0010](1)色谱条件：
[0011]色谱柱：选用苯基己基键合硅胶为填充剂的色谱柱。
[0012]流动相：以甲醇
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乙醇
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0.05％三氟乙酸溶液为流动相，等度洗脱。
[0013]酸溶液中采用的酸的种类为三氟乙酸、磷酸、甲酸及乙酸中的一种或多种。
[0014]酸溶液的浓度为0.05％～0.10％。
[0015]苯基己基硅烷键合硅胶粒度为3～5μm。
[0016]流速为0.7～0.9ml/min。
[0017]柱温为25～38℃。
[0018]采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为230～240nm。
[0019]进样体积5～10μl。
[0020](2)系统适用性溶液：
[0021]取脱氟杂质A及脱氟杂质B对照品各适量，加乙腈
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水
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冰醋酸(60:40:0.1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含脱氟杂质A及脱氟杂质B各约50μg的溶液，作为脱氟杂质A及脱氟杂质B对照品贮备液。取依折麦布对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，分别加入脱氟杂质A及脱氟杂质B对照品贮备液各1ml，加乙腈
‑
水
‑
冰醋酸(60:40:0.1)超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0022](3)混合溶液：取降解产物杂质环醚对照品适量，加乙腈
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水
‑
冰醋酸(60:40:0.1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含环醚50μg的溶液，作为杂质环醚对照品贮备液。取依折麦布对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，分别加入脱氟杂质A、脱氟杂质B及环醚对照品贮备液各1ml，加乙腈
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水
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冰醋酸(60:40:0.1)超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合溶液。
[0023](4)供试品溶液的制备：取依折麦布适量，精密称定，加乙腈
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水
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冰醋酸(60:40:0.1)超声使溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液。
[0024](5)测定方法：取系统适用性溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如有与系统适用性溶液中脱氟杂质A及脱氟杂质B保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，脱氟杂质A及脱氟杂质B均不得过0.1％。
[0025]本专利技术的积极效果在于：
[0026](1)本专利技术提供的分析方法已完成方法学验证，包括专属性、线性、精密度、检测限、定量限、脱氟杂质A及脱氟杂质B回收率、供试品溶液稳定性、耐用性，可以准确测定依折麦布中脱氟杂质A及脱氟杂质B的含量。
[0027](2)本专利技术提供的分析方法灵敏度高。经试验，脱氟杂质的最小检测浓度为0.06μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.006％。
[0028](3)本专利技术提供的分析方法专属性强，能够同时将保留时间较近的杂质(依折麦布降解杂质环醚、脱氟杂质B及脱氟杂质A)分离。有机相改为单纯的乙腈或者甲醇时均不能将其完全分离，因此本方法的专属性更强。
[0029](4)本专利技术提供的分析方法使用普通的仪器设备及色谱柱，流动相简单易得，操作过程简便，可行性高。
附图说明
[0030]图1空白溶剂的高效液相色谱图
[0031]图2系统适用性溶液的高效液相色谱图
[0032]图3供试品溶液的高效液相色谱图
[0033]图4混合溶液的高效液相色谱图
具体实施方式
[0034]以下结合附图对本专利技术实施方式作进一步详细描述。所举实施例是为了更好地对本专利技术的内容进行说明，但并不是本专利技术的内容仅限于所举实施例，所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0035]实施例一
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定依折麦布中脱氟杂质的高效液相色谱方法，其特征在于包括以下步骤：(1)色谱条件：选用苯基己基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇
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乙醇
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酸的水溶液为流动相，等度洗脱，采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为230～240nm，进样体积5～10μl；(2)系统适用性溶液：取依折麦布、脱氟杂质A及脱氟杂质B各适量，制成每1ml约含依折麦布、脱氟杂质A及脱氟杂质B分别为1mg、5μg及5μg的溶液，作为系统适用性溶液；(3)供试品溶液的制备：取依折麦布适量，制成每1ml约含依折麦布1mg的溶液，作为供试品溶液；(4)测定方法：取系统适用性溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如有与系统适用性溶液中脱氟杂质A及脱氟杂质B保留时间一致的色...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延新，王帆，杨海霞，廉贞霞，刘敏，任文杰，李霞，袁晓如，汤漩，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：