检测血清中15种胆汁酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测血清中15种胆汁酸的方法，该方法包括以下步骤：1)样本处理：取待测样品，向其中加入沉淀剂，涡旋混匀，离心；取上清液，氮气下吹干，再使用复溶液复溶，涡旋震荡，离心，取上清液作为测试样本；其中，复溶液为乙腈和水的混合液；2)采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
检测血清中15种胆汁酸的方法


[0001]本专利技术涉及体外检测
，特别涉及一种检测血清中15种胆汁酸的方法。

技术介绍

[0002]胆汁酸的常规检测方法是循环酶法，操作较为简单，然而酶法测定的是总胆汁酸水平而无法测定不同亚型之间的差异，胆汁酸与其结合物的结构差别大，在某些基质中浓度水平较低以及可能同时存在多个同分异构体，对其同时分离和检测难度大；GC
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MS分析胆汁酸异构体时具备高的选择性和分辨率，但样品制备复杂，衍生化，尤其是需将结合型胆汁酸水解成非结合形式才能进行分析；高效液相色谱可串联荧光检测器使用，但荧光检测法需复杂的衍生化技术而不能推广应用。
[0003]所以，现在有必要提供一种更可靠的方案。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种检测血清中15种胆汁酸的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种检测血清中15种胆汁酸的方法，该15种胆汁酸包括：胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA、牛磺胆酸TCA、牛磺脱氧胆酸TDCA、牛磺鹅脱氧胆酸TCDCA、牛磺熊脱氧胆酸TUDCA、石胆酸LCA、甘氨石胆酸GLCA、牛磺石胆酸TLCA，该方法包括以下步骤：
[0006]1)样本处理：取待测样品，向其中加入沉淀剂，涡旋混匀，离心；取上清液，氮气下吹干，再使用复溶液复溶，涡旋震荡，离心，取上清液作为测试样本；其中，复溶液为乙腈和水的混合液；
[0007]2)采用液相色谱
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串联质谱设备对测试样本进行检测。
[0008]优选的是，其中，所述沉淀剂为甲醇和乙腈的混合液。
[0009]优选的是，所述沉淀剂中甲醇和乙腈的体积比为1:1。
[0010]优选的是，复溶液中乙腈的体积分数为20
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40％。
[0011]优选的是，复溶液中乙腈的体积分数为30％。
[0012]优选的是，所述步骤1)具体为：取100μL待测血清样品，向其中加入10μL内标工作液和200μL沉淀剂，2500rpm涡旋混匀5min，于4℃下14000rpm离心10min；取上清液200μL，40℃氮气下吹干，再使用100μL复溶液复溶，涡旋震荡5min；于4℃下14000rpm离心10min，取上清液100μL作为测试样本。
[0013]优选的是，所述步骤2)中，液相色谱中的流动相A为水溶液；流动相B为乙腈溶液；洗针液为体积分数50％的乙腈水溶液。
[0014]优选的是，所述步骤2)中，采用的梯度洗脱程序为：0
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1min，10％B，1
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1.5min，17％B，1.5
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3.5min，25％B，3.5
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4.6min，30％B，4.6
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6.5min，30％B，6.5
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6.6min，35％B，6.6
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8.5min，35％B，8.5
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8.6min，10％B，8.6
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10min，10％B；流速0.6mL/min。
[0015]优选的是，所述步骤2)中，色谱柱为Kinetex C18。
[0016]优选的是，所述步骤2)中，质谱条件为：负离子模式，采用ESI源，碰撞气12psi，气帘气16psi，雾化气50psi，辅助加热气60psi，喷雾电压
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4500V，雾化温度500℃。
[0017]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的检测血清中15种胆汁酸的方法，在样本处理中通过增加氮吹后复溶再离心的步骤，并配合以甲醇乙腈为沉淀剂、乙腈为水复溶液的方案，极大的提高了测试前样本的纯净度和色谱柱使用寿命，同时还能有效提高目标物质的响应，降低定量限，提高检测准确度；本专利技术可一次进样同时精确检测不同类型的胆汁酸，分析时间短，分析速度快。
附图说明
[0018]图1为本专利技术中的胆汁酸标品图；
[0019]图2
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16为本专利技术中构建的15种胆汁酸的标准曲线；
[0020]图17A
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17B、18A
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18C为本专利技术实施例2中氮吹步骤的优化对比结果；
[0021]图19A
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19B、20A
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20E、21A
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21B为本专利技术实施例2中复溶液的优化对比结果；
[0022]图22A
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22C为本专利技术实施例2中沉淀剂优化的优化对比结果。
具体实施方式
[0023]下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0024]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0025]实施例1
[0026]本实施例提供一种检测血清中15种胆汁酸的方法。
[0027]一、试剂、仪器说明
[0028](1)标准品(胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA、牛磺胆酸TCA、牛磺脱氧胆酸TDCA、牛磺鹅脱氧胆酸TCDCA、牛磺熊脱氧胆酸TUDCA、石胆酸LCA、甘氨石胆酸GLCA、牛磺石胆酸TLCA)均购自上海甄准生物科技有限公司；
[0029](2)内标品(胆酸
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d4 CA
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d4、脱氧胆酸
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d4 DCA
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d4、鹅脱氧胆酸
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d4 CDCA
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d4、熊脱氧胆酸
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d4 UDCA
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d4、甘氨胆酸
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d4 GCA
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d4、甘氨脱氧胆酸
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d4 GDCA
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d4、甘氨鹅脱氧胆酸
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d4 GCDCA
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d4、甘氨熊脱氧胆酸
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d4 GUDCA
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d4、牛磺胆酸
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d4 TCA
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d4、牛磺脱氧胆酸
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d4 TDCA
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d4、牛磺鹅脱氧胆酸
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d4 TCDCA
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d4、牛磺熊脱氧胆酸
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d4 TUDCA
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d4、石胆酸
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d4 LCA
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d4、甘氨石胆酸
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d4 GLCA
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d4、牛磺石胆酸
‑
d4 TLCA
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血清中15种胆汁酸的方法，该15种胆汁酸包括：胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA、牛磺胆酸TCA、牛磺脱氧胆酸TDCA、牛磺鹅脱氧胆酸TCDCA、牛磺熊脱氧胆酸TUDCA、石胆酸LCA、甘氨石胆酸GLCA、牛磺石胆酸TLCA，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)样本处理：取待测样品，向其中加入沉淀剂，涡旋混匀，离心；取上清液，氮气下吹干，再使用复溶液复溶，涡旋震荡，离心，取上清液作为测试样本；其中，复溶液为乙腈和水的混合液；2)采用液相色谱
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串联质谱设备对测试样本进行检测。2.根据权利要求1所述的检测血清中15种胆汁酸的方法，其特征在于，其中，所述沉淀剂为甲醇和乙腈的混合液。3.根据权利要求2所述的检测血清中15种胆汁酸的方法，其特征在于，所述沉淀剂中甲醇和乙腈的体积比为1:1。4.根据权利要求3所述的检测血清中15种胆汁酸的方法，其特征在于，复溶液中乙腈的体积分数为20
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40％。5.根据权利要求4所述的检测血清中15种胆汁酸的方法，其特征在于，复溶液中乙腈的体积分数为30％。6.根据权利要求1所述的检测血清中15种胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：取100μL待测血清样品，向其中加入10μL内标工作液和200μL沉淀剂，2500rpm涡旋混匀5min，于4℃下14000rpm离心10min；取上清液200μL，40℃氮气...

【专利技术属性】
技术研发人员：周传贵，李艳，李艳杰，覃素姿，周玉松，胡玮，程文播，
申请(专利权)人：天津国科医工科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：