乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法及应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，首先使用注射器从小鼠第5对乳头的单侧乳头进针，然后向同侧第4对乳头方向皮下行针至小鼠后腿根部后注入乳腺癌细胞溶液，构建得到乳腺癌细胞株原位移植模型。本发明专利技术依据小鼠乳腺组织解剖图的结构特征，设计特殊的皮下接种方式，既能实现无创伤口的皮下注射式原位接种，又能保证精准的原位成瘤，提高了原位模型的成功率。本发明专利技术的构建方法操作简单，解决了目前市场上常用接种模式的局限性，为大规模、可重复构建乳腺癌小鼠模型，提供了更大可能。提供了更大可能。提供了更大可能。

【技术实现步骤摘要】
乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，占所有女性癌症的近四分之一，其发病率和死亡率均高居第一，并趋于年轻化。动物模型是开展肿瘤研究不可替代的重要支撑工具，随着乳腺癌发病机制及临床治疗的研究越来越深入，乳腺癌动物模型的构建及应用也越来越成为关注的热点。其中，乳腺癌小鼠模型能够较好模拟人乳腺癌发生发展，在乳腺癌疾病机理研究和临床前药效学评估等方面具有重要的应用价值。乳腺癌小鼠模型可分为原发性和移植性两种，其中原发性包括自发型乳腺癌模型、诱导型乳腺癌模型和基因工程鼠乳腺癌模型。移植性包括原位移植型乳腺癌模型和异位移植型乳腺癌模型。
[0003]乳腺癌移植模型，相对于原发性模型而言，具备成本低、周期短的特点，是研究乳腺癌治疗及药物评估的优势模型，目前应用最广。根据移植物的来源，可以分为同种移植和异种移植。异种移植多采用人源的乳腺癌细胞或组织接种到不同程度的免疫缺陷鼠上，其中原位的异种移植模型鼠肿瘤微环境最接近人体肿瘤特性。
[0004]异种原位乳腺癌模型是目前研究乳腺肿瘤致病机理和研发药物评估的优势模型，主要是将人源的肿瘤细胞株接种免疫缺陷的小鼠体内成瘤。目前市场多采用开创式接种，以保证原位，例如，剪开表皮找到小鼠第四对乳房垫位置，用镊子挑起乳房垫组织，向乳房垫接种肿瘤细胞或组织。然而，该操作对小鼠本身的治愈能力提出了更高挑战，同时，操作耗时、无菌要求高。<br/>[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，该构建方法操作简单，采用无创式注射乳腺癌细胞的方法，解决了目前市场上常用接种模式的局限性。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法在乳腺癌药物药效评估中的应用。
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，包括以下步骤：
[0009]使用注射器从小鼠第5对乳头的单侧乳头进针，然后向同侧第4对乳头方向皮下行针至小鼠后腿根部后注入乳腺癌细胞溶液，构建得到乳腺癌细胞株原位移植模型；
[0010]所述第5对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第5对乳头；
[0011]所述第4对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第4对乳头。
[0012]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞包括MDA
‑
MB
‑
231乳腺癌细胞株或PY8119乳
腺癌细胞株。
[0013]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞采用对数生长期的MDA
‑
MB
‑
231乳腺癌细胞株。
[0014]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞溶液的细胞量为0.8
×
106～1.2
×
106个细胞，优选为1
×
106个细胞。
[0015]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞溶液的体积为100～200μL，优选为200μL。
[0016]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞溶液中乳腺癌细胞密度为4
×
106～6
×
106细胞/mL，优选为5
×
106细胞/mL。
[0017]作为进一步技术方案，所述乳腺癌细胞溶液中还包括基质胶。
[0018]作为进一步技术方案，所述小鼠包括NSG小鼠；
[0019]优选地，所述小鼠的周龄为5～7周龄，优选为6周龄。
[0020]作为进一步技术方案，注入乳腺癌细胞溶液之后抽出注射器；
[0021]在注射器针头即将离开小鼠皮下时，旋转注射器后再拔出。
[0022]第二方面，本专利技术提供了一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法在乳腺癌药物药效评估中的应用。
[0023]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0024]本专利技术提供的乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，首先使用注射器从小鼠第5对乳头的单侧乳头进针，然后向同侧第4对乳头方向皮下行针至小鼠后腿根部后注入乳腺癌细胞溶液，构建得到乳腺癌细胞株原位移植模型。本专利技术依据小鼠乳腺组织解剖图的结构特征，设计特殊的皮下接种方式，既能实现无创伤口的皮下注射式原位接种，又能保证精准的原位成瘤，提高了原位模型的成功率。本专利技术的构建方法操作简单，解决了目前市场上常用接种模式的局限性，为大规模、可重复构建乳腺癌小鼠模型，提供了更大可能。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为本专利技术实施例1提供的小鼠乳腺位置及注射位置图；
[0027]图2为本专利技术实施例1提供的带红色荧光标记的MDA
‑
MB
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231乳腺癌细胞株，左图为细胞明场图，右图为细胞荧光图；
[0028]图3为本专利技术实施例1提供的小动物活体成像图；
[0029]图4为本专利技术实施例1提供的原位模型解剖图；
[0030]图5为本专利技术实施例1提供的成瘤乳腺组织解剖图；
[0031]图6为本专利技术实施例2提供的小鼠乳腺原位成瘤图；
[0032]图7为本专利技术实施例2提供的小鼠肿瘤生长曲线图；
[0033]图8为对比例2提供的小鼠乳腺成瘤图；
[0034]图9为对比例2提供的小鼠肿瘤组织解剖图；
[0035]图10为对比例3提供的小鼠成瘤乳腺组织解剖图；
[0036]图11为对比例3提供的小鼠肿瘤组织解剖图。
具体实施方式
[0037]下面将结合实施方式和实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0038]第一方面，本专利技术提供了一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，包括以下步骤：
[0039]使用注射器从小鼠第5对乳头的单侧乳头进针，然后向同侧第4对乳头方向皮下行针至小鼠后腿根部后注入乳腺癌细胞溶液，构建得到乳腺癌细胞株原位移植模型；
[0040]所述第5对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第5对乳头；
[0041]所述第4对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第4对乳头。
[0042]小鼠五对乳腺位置及注射位本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：使用注射器从小鼠第5对乳头的单侧乳头进针，然后向同侧第4对乳头方向皮下行针至小鼠后腿根部后注入乳腺癌细胞溶液，构建得到乳腺癌细胞株原位移植模型；所述第5对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第5对乳头；所述第4对乳头为将小鼠从头至尾方向数的第4对乳头。2.根据权利要求1所述的乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，其特征在于，所述乳腺癌细胞包括MDA
‑
MB
‑
231乳腺癌细胞株或PY8119乳腺癌细胞株。3.根据权利要求2所述的乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，其特征在于，所述乳腺癌细胞采用对数生长期的MDA
‑
MB
‑
231乳腺癌细胞株。4.根据权利要求1所述的乳腺癌细胞株原位移植模型的构建方法，其特征在于，所述乳腺癌细胞溶液的细胞量为0.8
×
106～1.2
×
106个细胞，优选为1
×
106个细胞。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡金芳，李文德，关业枝，陈思羽，蔡嘉怡，蔡女略，
申请(专利权)人：广东省实验动物监测所，
类型：发明
国别省市：