一种基于AAV8-PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于AAV8

【技术实现步骤摘要】
一种基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型及构建方法


[0001]本专利技术涉及小鼠模型
，具体涉及一种基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型及构建方法。

技术介绍

[0002]单纯性高胆固醇血症即血浆总胆固醇(TC)升高(TC≥190mg/dL)，而血浆甘油三酯(TG)处于正常水平。目前，载脂蛋白E敲除小鼠(ApoE
‑
/
‑
)或低密度脂蛋白受体敲除小鼠(LDLR
‑
/
‑
)是动脉粥样硬化研究的经典基因修饰模型。另外，腺相关病毒血清型8(AAV8)介导的前蛋白转化酶枯草杆菌素9型(PCSK9)(AAV8
‑
PCSK9)过表达也是诱导野生型小鼠产生动脉粥样硬化的常用方法。
[0003]动脉粥样硬化饮食即可诱导上述模型高胆固醇血症，同时伴随着高甘油三脂血症(TG≥150mg/dL)。这表明，以上小鼠模型仅能够诱导混合型高脂血症，而不是单纯高胆固醇血症。由于动物模型的缺乏，单纯性高胆固醇血症在动脉粥样硬化形成中扮演何种角色还不清楚；因此，构建单纯性高胆固醇血症模型十分必要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型及构建方法，该构建方法能够构建得到单纯性高胆固醇血症小鼠模型，即TC呈高水平，而TG呈正常水平。
>[0005]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面提供一种基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
[0007](a)将纯合子小鼠yap1
Flox/Flox
与Alb
‑
Cre
+
小鼠进行杂交获得yap1
Flox/
‑
‑
Alb
‑
Cre
+
的F1小鼠；F1代小鼠自交，获得雄性yap1
Flox/Flox
‑
Alb
‑
cre
+
小鼠，记为yap1
ΔHep
小鼠；
[0008](b)通过尾静脉向yap1
ΔHep
小鼠体内注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9；
[0009](c)以动脉粥样硬化饲料饲养注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的yap1
ΔHep
小鼠，即得所述基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型。
[0010]本专利技术中对步骤(a)中纯合子小鼠yap1
Flox/Flox
的构建方法不作严格限制，例如，可以采用本领域的常规的得到；优选地，采用专利申请号为202010654534.1中的方法得到(具体可参见具体实施方式)。
[0011]优选地，所述步骤(b)中，yap1
ΔHep
小鼠为2～6周龄小鼠。
[0012]优选地，所述AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的注射量为1
×
10
11
vg/只。
[0013]优选地，所述纯合子小鼠yap1
Flox/Flox
的yap1基因的第3个外显子两端分别插入有loxp位点。
[0014]优选地，所述纯合子小鼠yap1
Flox/Flox
与Alb
‑
Cre
+
小鼠的雄雌比例为1∶(1～5)。
[0015]优选地，所述F1代小鼠自交中雌雄比例为1∶(1～5)。
[0016]优选地，所述饲养时间不低于5周。
[0017]优选地，所述饲养时间为12周。
[0018]本专利技术第二方面提供一种上述构建方法构建得到的基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
[0020]本专利技术在构建yap1基因(该基因编码共转录激活子：yes相关蛋白即YAP)肝细胞特异性敲除小鼠(yap1
ΔHep
)的基础上，通过尾静脉单次注射过表达PCSK9功能获得性突变体的AAV8(AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9)以及动脉粥样硬化饲料饲养，成功诱导出单纯性高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型(即血浆TC呈高水平，而血浆TG呈正常水平)；为探讨TG或其他心血管危险因子在动脉粥样硬化中作用机制提供理想模型。
[0021]本专利技术构建方法规避了YAP
ΔHep
与经典的基因修饰动脉粥样硬化模型(包括ApoE
‑
/
‑
和LDLR
‑
/
‑
小鼠)合笼繁殖工作，有助于降低繁殖成本，缩短了实验周期。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
[0023]图1为yap1
ΔHep
小鼠基因型检测电泳图；
[0024]图2为yap1
ΔHep
小鼠肝细胞YAP蛋白western Blotting检测结果；
[0025]图3为yap1
ΔHep
小鼠肝细胞YAP蛋白免疫荧光检测结果；
[0026]图4为注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的Yap1
flox/flox
小鼠和yap1
ΔHep
小鼠经胆固醇饲料喂养12周的血浆TC和TG水平；
[0027]图5为注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的Yap1
flox/flox
小鼠和yap1
ΔHep
小鼠经胆固醇饲料喂养12周后，肝脏切片油红“O”染色和肝脏TG水平；
[0028]图6为注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的Yap1
flox/flox
小鼠和yap1Δ
Hep
小鼠经胆固醇饲料喂养12周后，主动脉树油红“O”染色及大体动脉粥样硬化斑块面积分析；
[0029]图7为注射AAV8
‑
D377Y
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)将纯合子小鼠yap1
Flox/Flox
与Alb
‑
Cre
+
小鼠进行杂交获得yap1
Flox/
‑
‑
Alb
‑
Cre
+
的F1小鼠；F1代小鼠自交，获得雄性yap1
Flox/Flox
‑
Alb
‑
cre
+
小鼠，记为yap1
ΔHep
小鼠；(b)向yap1
ΔHep
小鼠体内注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9；(c)以动脉粥样硬化饲料饲养注射AAV8
‑
D377Y
‑
mPCSK9的yap1
ΔHep
小鼠，即得所述基于AAV8
‑
PCSK9诱导的高胆固醇血症和动脉粥样硬化小鼠模型。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯颖，陈玉龙，孙霞，张欣，陈镝，贾敏，秦巧红，苏兴利，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：