绵马酸ABA的对照品的制备方法技术

本发明专利技术提供一种绵马酸ABA的对照品的制备方法，其依次包括以下步骤：正相色谱纯化工序、粗品溶剂处理工序、高压反相色谱纯化工序、固体化工序。本发明专利技术的制备方法是一种具有高通量，能提供高纯度绵马酸ABA，且适合大量制备的绵马酸ABA对照品制备方法，并且该方法的绵马酸ABA的提取率也比较高。本发明专利技术能迅速获得纯度大于99.5％的绵马酸ABA。度大于99.5％的绵马酸ABA。度大于99.5％的绵马酸ABA。

【技术实现步骤摘要】
绵马酸ABA的对照品的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种绵马酸ABA的制备方法，尤其涉及能够制备高纯度的绵马酸 ABA的固体对照品的制备方法。

技术介绍

[0002]绵马贯众为鳞毛蕨科植物，粗茎鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai的干燥根茎及叶柄残基，主要分布于我国东北3省。临床上常见绵马贯众单方或复方用于治疗癌症肿瘤、流感病毒等疾病。绵马贯众在抗疟、抗肿瘤、抗菌活性是药学研究的热点，是很有前景的药用资源植物。绵马贯众的炮制品绵马贯众炭，收录于2015 版《中国药典》，有收涩止血的功效，临床用于崩漏下血，其鉴别和质量标准的确立对于中药现代化非常重要。
[0003]绵马酸ABA(filixic acid ABA,英文别名:trisalbaspidin ABA)是间苯三酚类化合物，是中药材绵马贯众、中药绵马贯众炭的特征成分，其具体化学结构如下：
[0004][0005]虽然是中药材绵马贯众、中药绵马贯众炭的特征成分，但是目前市场上能够采购获得的标准品的渠道并不丰富，而且很难找到99％以上高纯度的标准品提供商。这可能与绵马酸ABA的提取或者制备效率不高有关，吴寿金等在《绵马贯众化学成分研究》(中草药,1996,27(8):458
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459)中报道，以乙醚热回流提取绵马贯众，总提取物经反复硅胶柱色谱以及结晶的方法获得绵马酸ABA，其得率和纯度未见报道；Laura Dom
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nguez等同样以乙醚提取绵马贯众138g，而后通过硅胶、LHr/>‑
20以及中压和高压制备出27.5mg绵马酸ABA，得率0.02％(Phytochemistry,2012, 80:115
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122)。以上两种方法均采用乙醚进行提取，但乙醚沸点较低，热回流提取不适合大量提取制备。祁燕在《绵马贯众中间苯三酚的分离及其抑菌活性研究》(. 中草药,2017,48(23):4860
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4864.)中，以50％乙醇提取后经反复硅胶柱和制备液相纯化获得绵马酸ABA，但是其得率较低，40kg绵马贯众仅获得11mg绵马酸ABA(不到百万分之零点三的得率)。然而现有的方式，都是难以快速的获得纯度达到99％以上的对照品的提取方法。
[0006]总之，现实情况是，仍然需要开发足够简便快速、提取率高、纯度达到99％以上的绵马酸ABA的提取方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种高通量、能提供高纯度绵马酸ABA，且适合大量制备的绵马酸ABA的对照品的制备方法，并且该方法的绵马酸ABA的提取率也比较高。
[0008]具体而言，本专利技术提供一种绵马酸ABA的对照品的制备方法，其能够以较高的效率
和收率获得纯度很高的绵马酸ABA，依次包括以下步骤：
[0009]正相色谱纯化工序：将含有绵马酸ABA的原料提取物粗品上样至正相色谱柱，用包含石油醚、卤代烷烃类溶剂、醇类溶剂的混合洗脱液进行洗脱，石油醚：卤代烷烃类溶剂的比例为100～50:1，卤代烷烃类溶剂：醇类溶剂的比例为20～5：1，其中，根据TLC或者HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液浓缩、干燥，得到第一粗品粉末；
[0010]粗品溶剂处理工序：将第一粗品粉末利用以质量比计2～6倍的分子内碳数为 3～6的酮类溶剂，在60℃以下的温度加热使其溶解，在10℃以下静置1～24小时，过滤沉淀，将沉淀干燥，得到第二粗品粉末；
[0011]反相色谱纯化工序：将第二粗品粉末上样至反相色谱，用乙腈或甲醇，与pH3～6 的酸性水溶液的混合洗脱剂，以1～15.0Mpa压力进行洗脱，其中，乙腈或甲醇：酸性水溶液的比例为5.5～3.5:1，根据TLC或者HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液在50℃以下的温度减压浓缩，去除其中的乙腈或甲醇，得到含有绵马酸ABA的水溶液；
[0012]固体化工序，将含有绵马酸ABA的水溶液利用等体积的有机溶剂萃取，取有机溶剂层，在20～80℃去除有机溶剂，得到绵马酸ABA对照品。
[0013]在本专利技术的优选实施方式中，上述绵马酸ABA对照品还优选利用选自乙腈、甲醇或乙醇中的溶剂形成分散液，过滤沉淀，再将沉淀干燥得到。
[0014]在本专利技术的优选实施方式中，所述含有绵马酸ABA的原料提取物粗品的制备方法如下：将原料绵马贯众粉碎，利用醇系的水溶液浸泡，过滤，滤液，在30～80℃的温度下避光浓缩至无醇味，在其中加入有机溶剂，按照体积比计有机溶剂：浓缩液为0.5～3：1进行萃取，重复2～5次萃取，合并有机溶剂，除去有机溶剂，得到绵马酸ABA的原料提取物粗品。
[0015]在本专利技术的优选实施方式中，正相色谱纯化工序中，石油醚：卤代烷烃类溶剂的比例为80～60:1，并且在其中，添加总溶剂量的0.05wt％～0.2wt％的酸性pH调节剂。
[0016]在本专利技术的优选实施方式中，正相色谱纯化工序中，正相色谱纯化工序中，添加的酸性pH调节剂为有机酸，优选为乙酸或者甲酸；所述卤代烷烃类溶剂为二氯甲烷，所述醇类溶剂为甲醇。
[0017]在本专利技术的优选实施方式中，醇系的水溶液为80％～95％的甲醇水溶液或者 80％～95％的乙醇水溶液，有机溶剂为乙酸乙酯。
[0018]在本专利技术的优选实施方式中，反相色谱纯化工序中，用乙腈：酸性水溶液的比例为4.5～4:1进行洗脱，所述酸性水溶液为0.004～0.01mol/L的Na2HPO4‑
柠檬酸缓冲盐溶液。
[0019]在本专利技术的优选实施方式中，正相色谱纯化工序中，正相色谱柱的填料为粒径为100～300目的硅胶，反相色谱柱的填料为粒径为5
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10μm的十八烷基硅烷键合硅胶。
[0020]在本专利技术的优选实施方式中，粗品溶剂处理工序中，在第一粗品粉末加入以质量比计3～5倍的丙酮，在45℃的温度条件以下进行加热溶解。
[0021]本专利技术还提供一种纯度为99％以上的绵马酸ABA的固体对照品，其本专利技术的制备方法制备得到。
[0022]本专利技术制备的绵马酸ABA纯度较文献及以往的专利技术报导提高很多，能迅速获得纯度达到99％以上的绵马酸ABA，提取率和通量上有较大改进。具体而言，本专利技术具有如下特点：
[0023]1、本专利技术首次提供了制备绵马酸的高通量的方法，能够从绵马贯众中制备大量绵
马酸ABA纯品，为中药绵马贯众、绵马贯众炭的鉴别及药材质量标准提供坚实的物质基础，具有较高的经济价值。
[0024]2、相较于现有的提取方法的乙醚热提取，本专利技术中采用醇溶剂提取更加经济、安全；同时本专利技术中制备绵马酸ABA的得率能够高达0.066％，纯度能够实现大于 99％，甚至高于99.5％，效率高、成本低。
[0025]3、本专利技术发现绵马酸ABA提取方法中难以提高纯度的原因，并克服了绵马酸ABA在水溶液中不稳定的技术难题，解决了难以利用高压柱色谱分离系统提高绵马酸ABA的问题。
附图说明
[0026]图1为本专利技术实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种绵马酸ABA的对照品的制备方法，其特征在于，其依次包括以下步骤：正相色谱纯化工序：将含有绵马酸ABA的原料提取物粗品上样至正相色谱柱，用包含石油醚、卤代烷烃类溶剂、醇类溶剂的混合洗脱液进行洗脱，石油醚：卤代烷烃类溶剂的比例为100～50:1，卤代烷烃类溶剂：醇类溶剂的比例为20～5：1，根据TLC或者HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液浓缩、干燥，得到第一粗品粉末；粗品溶剂处理工序：利用以质量比计2～6倍的分子内碳数为3～6的酮类溶剂，将第一粗品粉末在60℃以下的温度加热使其溶解，在10℃以下静置1～24小时，过滤沉淀，将沉淀干燥，得到第二粗品粉末；反相色谱纯化工序：将第二粗品粉末上样至反相色谱，用乙腈或甲醇，与pH3～6的酸性水溶液的混合洗脱剂，以1～15.0Mpa压力进行洗脱，其中，乙腈或甲醇：酸性水溶液的比例为5.5～3.5:1，根据TLC或者HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液在50℃以下的温度减压浓缩，去除其中的乙腈或甲醇，得到含有绵马酸ABA的水溶液；固体化工序，将含有绵马酸ABA的水溶液利用等体积的有机溶剂萃取，取有机溶剂层，在20～80℃去除有机溶剂，得到绵马酸ABA对照品。2.根据权利要求1所述的绵马酸ABA的对照品的制备方法，其特征在于，所述含有绵马酸ABA的原料提取物粗品的制备方法如下：将原料绵马贯众药材粉碎，利用醇系的水溶液浸泡，过滤，滤液在30～80℃的温度下避光浓缩至无醇味，在其中加入有机溶剂，按照体积比计有机溶剂：浓缩液为0.5～3：1进行萃取，重复2～5次萃取，合并有机溶剂，除去有机溶剂，得到绵马酸ABA的原料提取物粗品。3.根据权利要求1所述的绵马酸ABA的对照品的制备方法，其特征在于，正相...

【专利技术属性】
技术研发人员：房强强，余德洋，舒亚平，李雪松，卢宗元，营雪，
申请(专利权)人：上海诗丹德标准技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：