本发明专利技术提供一种高纯度甘草查尔酮A的制备及检测方法，本发明专利技术提供的方法制备的甘草查尔酮A纯度可达到98.5％以上，纯度符合化学对照品要求，同时提供了甘草查尔酮A化学对照品完整的基础化学依据、化学信息和分析测试方法，有利于甘草查尔酮A的进一步开发。此外，采用薄层色谱和高效液相色谱进行纯度检查、含量测定及质量控制，从而建立甘草查尔酮A化学对照品的技术标准，确保产品质量，为甘草及其相关制品的质量控制及高技术、高附加值的产品的开发提供科学基础和保证。本发明专利技术采用大孔树脂结合高速逆流色谱制备高纯度甘草查尔酮A，样品纯度高，分离速度快，生产周期短，适合工业化生产，有较好的应用前景。有较好的应用前景。有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种高纯度甘草查尔酮A的制备及检测方法
[0001]本专利技术属于化合物单体制备
，具体涉及一种高纯度甘草查尔酮A的制备及检测方法。
技术介绍
[0002]甘草查尔酮A是从豆科植物甘草的根中提取的黄酮类化合物，被视为胀果甘草的种属特异性成分。现代药理学表明，甘草查尔酮A 具有抑制激素非依赖性PC
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3前列腺癌细胞增殖，诱导凋亡，抗寄生性疾病疟疾，抗菌消炎，抗氧化等作用，在食品和医药工业中有广泛的用途。
[0003]然而，由于甘草查尔酮A在甘草中含量极低(0.4％左右)，制备工艺繁复，成本昂贵。截至目前，我国尚无甘草查尔酮A标准样品，市场上销售的甘草查尔酮A对照品纯度也参差不齐。因此，为满足药材及成药分析检测及质量控制工作的需求，亟待开发研制甘草查尔酮A标准样品及其质量控制技术研究，为以此为原料的功能食品、保健食品提供坚实的物质基础。
[0004]公开号为101117311A的中国专利技术专利以甘草为原料，经冷渗法提取，有机溶剂萃取后再利用大孔树脂纯化，重结晶得到纯度大于 90％的甘草查尔酮A。公开号为112898146A的中国专利技术专利中利用 DNA甲基转移酶抑制剂培育甘草毛状根，激活有利于甘草查尔酮A 积累的沉默基因，通过甲醇提取甘草查尔酮A。公开号为106431877A 的中国专利技术专利将甘草渣用饱和石灰水回流提取，大孔树脂吸附，所得洗脱液NaOH溶解后加酸沉淀，重结晶得到浓度大于95％的样品。但已公开的方法中制备得到的甘草查尔酮A的纯度均未达到中药化学对照品的要求，即纯度大于98.5％。且已公开的方法也没有纯度与质量控制方法，无法满足甘草查尔酮A化学对照品的需要。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种高纯度甘草查尔酮A的制备及检测方法，本专利技术的方法以甘草渣为原料，制备得到纯度高于98.5％的甘草查尔酮A，从而满足甘草查尔酮A国家标准品的申报要求。
[0006]本专利技术首先一种高纯度甘草查尔酮A的制备方法，所提供的方法包括有如下的步骤：
[0007]1)在甘草渣中加入体积浓度为60％～90％的乙醇溶液，加热回流提取，再将提取的浸膏采用AB
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8大孔树脂纯化，分别用水、30％乙醇、75％乙醇洗脱，收集75％乙醇的洗脱部分，洗脱液加入氢氧化钠溶液溶解后，再加入盐酸溶液获得沉淀，沉淀干燥得到甘草查尔酮A 粗提物；
[0008]2)将甘草查尔酮A粗提物通过高速逆流色谱进行分离纯化，其中溶剂系统为正己烷、氯仿、甲醇和水的混合溶液，上相为固定相，下相为流动相，检测波长为254nm，收集含甘草查尔酮A组分，减压真空干燥，收集含甘草查尔酮A馏分，将含甘草查尔酮A馏分进行减压
浓缩，得到纯度＞96％的甘草查尔酮A样品，最后采用甲醇进行重结晶，得到纯度＞98.5％甘草查尔酮A。
[0009]甘草渣与乙醇溶液的料液比为1：10～1：20；
[0010]所述的氢氧化钠溶液的浓度为2％；盐酸溶液的浓度为5％。
[0011]所述的溶剂系统中正己烷：氯仿：甲醇：水的体积比为2～5：5～9： 2～10：2。
[0012]本专利技术还提供一种甘草查尔酮A纯度的检测方法，是采用分析型高效液相色谱进行检测，其中色谱柱为C18，4.6
×
250mm,5μm，流速0.8
‑
1.0mL/min，记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量。
[0013]其中流动相(体积比)乙腈:0.1％磷酸水＝47:53，检测波长为 254～372nm。
[0014]另一种条件下，流动相(体积比)乙腈：0.1％磷酸水＝25:75～90:10。检测波长为254～372nm。
[0015]本专利技术提供的方法制备的甘草查尔酮A纯度可达到98.5％以上，纯度符合化学对照品要求，同时提供了甘草查尔酮A化学对照品完整的基础化学依据、化学信息和分析测试方法，有利于甘草查尔酮A 的进一步开发。此外，采用薄层色谱和高效液相色谱进行纯度检查、含量测定及质量控制，从而建立甘草查尔酮A化学对照品的技术标准，确保产品质量，为甘草及其相关制品的质量控制及高技术、高附加值的产品的开发提供科学基础和保证。本专利技术采用大孔树脂结合高速逆流色谱制备高纯度甘草查尔酮A，样品纯度高，分离速度快，生产周期短，适合工业化生产，有较好的应用前景。
附图说明
[0016]图1
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1、1
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2、1
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3分别是甘草查尔酮A三种展开系统薄层色谱图：
[0017]其中，图1
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1中展开剂为石油醚:乙酸乙酯:甲醇(5:4:1,v/v/v)，图1
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2中展开剂为石油醚:乙酸乙酯:甲醇(4:5:1,v/v/v)，图1
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3中展开剂为二氯甲烷:甲醇(8:1,v/v)。
[0018]图2是本专利技术甘草查尔酮A分离纯化后的HPLC图谱，图中保留时间为11min的色谱图，图中峰为甘草查尔酮A。
具体实施方式
[0019]本专利技术所提供的方法，其基本步骤如下：
[0020]1)取胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)提取甘草酸后所得甘草渣，加入体积浓度为60％～90％乙醇，料液比1：10～1：20，加热回流提取3
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5次，每次1～2h，提取浸膏采用AB
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8大孔树脂纯化，分别用水、30％乙醇、75％乙醇洗脱，富集75％乙醇洗脱部分，加入2％氢氧化钠溶液溶解后，加入5％盐酸酸化至无再沉淀生成，所得沉淀干燥得到甘草查尔酮A粗提物。进一步通过高速逆流色谱技术对其进行分离纯化，溶剂系统为正己烷:氯仿:甲醇:水，上相为固定相，下相为流动相，检测波长为254nm，收集含甘草查尔酮A组分，减压真空干燥，收集含甘草查尔酮A馏分，减压浓缩，得到纯度＞96％的甘草查尔酮A样品，最后采用甲醇进行重结晶，得到纯度＞98.5％甘草查尔酮A。
[0021]所述的溶剂系统正己烷
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氯仿
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甲醇
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水体积比为2～5：5～9：2～10：2。
[0022]2)采用分析型高效液相色谱测定步骤(1)收集的甘草查尔酮A 产品纯度，最高可达99.85％以上。色谱柱：C18，4.6
×
250mm,5μm，流速0.8
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1.0mL/min，面积归一法定量；系统
条件为以下两个条件的其中之一。
[0023]条件一：流动相(体积比)乙腈：0.1％磷酸水＝47：53。检测波长为254～372nm。
[0024]条件二：流动相(体积比)乙腈：0.1％磷酸水＝25:75～90:10。检测波长为254～372nm。
[0025]3)本专利技术对于产品甘草查尔酮A的质量控制方法如下：
[0026]含量与纯度检验：分别用2个流动相溶剂系统和2个检测波长，记录色谱图至主成分的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高纯度甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：1)在甘草渣中加入体积浓度为60％～90％的乙醇溶液，加热回流提取，再将提取的浸膏采用AB
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8大孔树脂纯化，分别用水、30％乙醇、75％乙醇洗脱，收集75％乙醇的洗脱部分，洗脱液加入氢氧化钠溶液溶解后，再加入盐酸溶液获得沉淀，沉淀干燥得到甘草查尔酮A粗提物；2)将甘草查尔酮A粗提物通过高速逆流色谱进行分离纯化，其中溶剂系统为正己烷、氯仿、甲醇和水的混合溶液，上相为固定相，下相为流动相，检测波长为254nm，收集含甘草查尔酮A组分，减压真空干燥，收集含甘草查尔酮A馏分，将含甘草查尔酮A馏分进行减压浓缩，得到纯度＞96％的甘草查尔酮A样品，最后采用甲醇进行重结晶，得到纯度＞98.5％甘草查尔酮A。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的1)中甘草渣与乙醇溶液的料液比为1：10～1：20。3.如权利要求1所述的制备方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晗，邸多隆，裴栋，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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