一种酶标抗溶菌酶金抗体、检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酶标抗溶菌酶金抗体及检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用。该酶标抗溶菌酶金抗体同时具有结合溶菌酶能力及辣根过氧化物酶的特性，并将其应用于酶联免疫中检测鸡蛋清溶菌酶。该酶联免疫试剂盒包括：酶标抗溶菌酶金抗体、酶标板、溶菌酶标准品、标准品稀释液、包被有溶菌酶特异性抗体的酶标板、显色液、样品稀释液、洗涤液和终止液。本发明专利技术还公开了利用该试剂盒进行样品检测的方法。本试剂盒采用酶链免疫分析法中的直接法原理，可以对鸡蛋清中的溶菌酶进行定量检测。本试剂盒使用金抗体代替天然抗体进行检测，既降低了生产成本，也避免了交叉反应，且兼具酶联免疫试剂盒的其他优点。的其他优点。的其他优点。

【技术实现步骤摘要】
一种酶标抗溶菌酶金抗体、检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其是涉及一种酶标抗溶菌酶金抗体及检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用，应用于溶菌酶定量检测


技术介绍

[0002]溶菌酶是一种具备很强杀菌能力的碱性酶，通过水解细菌细胞壁肽聚糖层中存在的N
‑
乙酰基
‑
d
‑
葡萄糖胺和N
‑
乙酰基尿酸残基之间的β
‑
1,4键达到杀菌的效果。鸡蛋清溶菌酶(Hen Egg
‑
White Lysozyme，HEWL)是目前研究和应用最广的一类溶菌酶，存在范围广，目前在食品、化妆品和医疗领域都有广泛应用。且鸡蛋清溶菌酶作为一种常见的食物过敏原，据统计，有1.6％的儿童对蛋制品过敏。
[0003]目前已有的测定溶菌酶的方法有高效液相色谱或液相色谱
‑
质谱法等，这些方法均有所使用仪器价格昂贵、复杂，检测成本高等缺点，酶联免疫吸附测定法具有良好的灵敏度和准确性，且兼具检测成本相对较低的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：利用金纳米粒子结合多肽，形成抗溶菌酶金抗体，同时投加标记了巯基聚乙二醇(HS
‑
PEG)的辣根过氧化物酶(HRP)，通过一步法合成酶标抗溶菌酶金抗体。2.根据权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：将标记了巯基聚乙二醇(HS
‑
PEG)的辣根过氧化物酶(HRP)与多肽同时投加，使HRP
‑
PEG上的
‑
SH基与金纳米粒子形成Au
‑
S键，在形成金抗体的同时，将金抗体结合HRP，形成酶标抗溶菌酶金抗体，HRP接在单个金纳米粒子上的数量为1
‑
20个。3.根据权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：将HS
‑
PEG
‑
COOH与辣根过氧化物酶(HRP)通过EDC
‑
NHS反应，使PEG上的羧基与HRP的氨基反应，形成HS
‑
PEG
‑
HRP。4.一种检测溶菌酶酶联免疫试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体、空白酶标板、溶菌酶标准品、稀释液、显色液、洗涤液和终止液。5.根据权利要求1所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒，其特征在于：使用酶标抗溶菌酶金抗体，以酶联免疫直接法对溶菌酶进行检测，具体方法步骤为：将溶菌酶预先包被在空白酶标板上，加入酶标抗溶菌酶金抗体，孵育设定时间后将溶菌酶和酶标抗溶菌酶金抗体两者结合后，通过加入辣根过氧化物酶的底物产生显色反应，反应设定时间后，加入终止液终止反应，并将...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹傲能，许艳娇，李文浩，王海芳，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：