一种提高有效微珠比例的dELISA样品及其制备与检测方法技术

本发明专利技术公开了一种提高有效微珠比例的数字化酶联免疫吸附分析(dELISA)样品及其制备与检测方法。其制备与检测包括将容器内壁的活化、捕获物(Cp)的固定、生物素包被的磁性微珠(MMS)表面固定检测抗体(Ab2)和报告物酶分子(EZ)、(检测抗体

【技术实现步骤摘要】
一种提高有效微珠比例的dELISA样品及其制备与检测方法


[0001]本专利技术属于免疫分析领域，是一种酶联免疫测定技术，具体涉及一种提高有效微珠比例的数字化酶联免疫吸附分析(Digital Enzyme
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linked immunosorbent assay，dELISA)样品，以及该样品的制备与检测方法。

技术介绍

[0002]ELISA是在特异性免疫反应的基础上结合了酶反应的高效分析检测手段，广泛应用于肿瘤、传染病等疾病以及食品、环境等检测。Rissin等人在2010年提出了数字化ELISA(dELISA)方法(Rissin et al.,Single
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molecule enzyme
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linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations.Nature Biotechnology,28:595
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599,2010)，在直径为2.7微米的微珠表面附着特异性捕获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高有效微珠比例的数字化酶联免疫吸附分析样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将捕获物固定于容器内表面的活化位点，并用钝化剂封阻剩余的活化位点，再加入待检测的标志物，与捕获物结合形成捕获物
‑
标志物免疫复合物；(2)使亲和素变体结合于生物素包被的磁性微珠表面，然后使之与生物素标记的检测抗体结合，使亲和素标记的报告物酶分子与磁性微珠表面的生物素结合，形成(检测抗体
n
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)复合物；其中所述生物素与所述亲和素变体通过可逆的方式结合；(3)将(检测抗体
n
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)复合物与步骤(1)中固定在容器内表面的捕获物
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标志物免疫复合物特异性结合，洗去未发生特异性结合的游离态(检测抗体
n
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)复合物，得到(捕获物
‑
标志物
‑
检测抗体
n
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)免疫复合物；(4)解离(捕获物
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标志物
‑
检测抗体
n
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)免疫复合物中亲和素变体与检测抗体和/或磁性微珠上与生物素的连接，得到游离态的(磁性微珠
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报告物酶分子
m
)和/或(检测抗体
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磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)报告复合物；(5)将步骤(4)中游离态的(磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)和/或(检测抗体
‑
磁性微珠
‑
报告物酶分子
m
)报告复合物装载到微米坑阵列中，使得每个微米坑中只容纳一个(磁性微珠
‑
报告物酶分子
m

【专利技术属性】
技术研发人员：崔玉峰，王志民，陈夏敏，
申请(专利权)人：上海北昂医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：