糖巨肽的制造方法技术

提供一种能够以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量低的高纯度的糖巨肽的方法。详细地说，提供一种糖巨肽的制造方法，其包含：(A)使包含糖巨肽的乳清蛋白混合物与活性碳接触的工序、以及(B)将糖巨肽从活性碳中分离的工序。以及(B)将糖巨肽从活性碳中分离的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖巨肽的制造方法


[0001]本专利技术涉及糖巨肽的制造方法，详细地说，涉及以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量低的高纯度的糖巨肽的方法。

技术介绍

[0002]苯酮尿症是参与苯丙氨酸代谢的苯丙氨酸羟化酶的功能先天缺陷的疾病，苯酮尿症患者需要限制苯丙氨酸的摄取。因此，需要开发苯酮尿症患者易于摄取的蛋白质源。
[0003]糖巨肽是分子量为约8000(无糖链修饰的情况)、分子量为25000～30000(包含糖链修饰的情况)的、氨基酸序列中不包含苯丙氨酸残基的蛋白质。糖巨肽存在于作为制造奶酪等乳制品时的副产品的乳清中。糖巨肽由于在氨基酸序列中不含有苯丙氨酸残基，可以作为苯酮尿症患者易于摄取的蛋白质源而利用。乳清在乳制品的制造中大量地作为副产物而产生，因此可以认为可以从乳清中获得的糖巨肽适合工业生产。
[0004]但是，工业性地从乳清中得到的糖巨肽包含苯丙氨酸成分(例如，游离苯丙氨酸、以及包含苯丙氨酸残基的肽和蛋白质)作为杂质，难以将苯丙氨酸成分完全除去。因此，需要开发一种能够从乳清中制造将苯丙氨酸成分尽可能除去了的糖巨肽的方法。
[0005]作为这样的方法，已经报道了几种使用离子交换树脂(离子交换色谱)的方法，其是基于亲水性相互作用的方法的一种。
[0006]非专利文献1中记载了，通过数个循环的基于阳离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。
[0007]非专利文献2中记载了，通过基于酸沉淀和阴离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。
[0008]非专利文献3中记载了，通过基于阴离子交换树脂等的分离，而制造除去了苯丙氨酸成分的糖巨肽的方法。
[0009]但是，在这些方法中，需要使用离子交换树脂，由于使用盐溶液(经常包含高浓度的盐类)进行溶出操作，因此溶出的糖巨肽溶液中会混入盐类。盐类会影响食品的风味，因此盐类的混入是不优选的，但是在混入盐类后进行透析这样的盐类的交换操作是繁杂的，成本面上较为不利，因此需要开发不需要使用了盐溶液的溶出操作的方法。此外，使用离子交换树脂的方法在成本面上较为不利，并且，由于处理能力不一定高，并不适合工业上的大量生产。
[0010]此外，作为苯丙氨酸含量低的肽混合物的制造方法，已经报道了：作为基于疏水性相互作用的方法的一种的使用活性碳的方法、和作为基于分子量的分离法的一种的使用凝胶过滤剂(凝胶过滤色谱)的方法。
[0011]例如，专利文献1中记载了一种苯丙氨酸含量低的肽混合物的制造方法(实施例1、2)，其包含：用1种或2种蛋白酶(内肽酶和外肽酶)水解乳白蛋白而得到肽混合物的工序、使肽混合物与活性碳接触而使芳香族氨基酸(苯丙氨酸)吸附到活性碳上的工序、以及除去吸附了芳香族氨基酸的活性碳的工序。
[0012]此外，专利文献2中记载了通过包含以下一系列的操作(实施例2)而制造苯丙氨酸含量低的肽混合物的方法：1)用多种蛋白酶(内肽酶和外肽酶)水解乳清蛋白浓缩物，将得到的水解肽混合物以凝胶过滤剂(凝胶过滤色谱)进行回收的工序(实施例1、3)；以及2)用多种蛋白酶水解牛奶酪蛋白，使得到的水解肽混合物与活性碳粉末接触，使苯丙氨酸吸附到活性碳上的工序；以及除去吸附了苯丙氨酸的活性碳的工序。
[0013]然而，一般而言，糖巨肽等可溶性蛋白质(也称为分泌蛋白)具有分子内部包含疏水性氨基酸残基(例如，苯丙氨酸)、分子表面包含亲水性氨基酸残基的蛋白质折叠结构。这是因为，可溶性蛋白质要在乳清等的水溶液中可溶化，需要在作为与水溶液接触的区域的分子表面上露出亲水性氨基酸残基。因此，即使在可溶性蛋白质包含疏水性氨基酸残基(例如，苯丙氨酸)的情况下，疏水性氨基酸残基也难以在作为与水溶液接触的区域的分子表面上露出，难以与疏水性载体相互作用，因此通常在可溶性蛋白质的分离中不利用基于疏水性相互作用的方法。不如说，基于疏水性相互作用的方法一般都用于类固醇激素等高疏水性低分子化合物的分离，而非可溶性蛋白质的分离。例如，与活性碳同样为碳质的木炭用于制备木炭条血清。在木炭条血清的制备中，为了在尽量使生长因子等可溶性蛋白质残留在血清中的同时，将高疏水性低分子化合物从血清中除去，而使血清与木炭接触，接下来，通过将吸附了血清中的高疏水性低分子化合物的木炭从血清中分离，而能够制备残留有可溶性蛋白质、并且高疏水性低分子化合物被除去了的血清。即，就作为碳质的木炭而言，其在木炭条血清的制备中，是以高疏水性低分子化合物的吸附
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分离为主要目的而使用的，而非以可溶性蛋白质的吸附
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分离为目的。如上所述，就现状而言，在可溶性蛋白质的分离中通常不利用基于疏水性相互作用的方法。
[0014]因此，在所述专利文献1、2中记载的使用活性碳的方法中，通过水解的工序，而人为地使包含疏水性氨基酸残基的肽混合物处于易于吸附到活性碳上的状态。即，可以考虑通过使由于在分子内部包含疏水性氨基酸残基(例如，苯丙氨酸)而难以与活性碳通过疏水性相互作用进行吸附的可溶性蛋白质水解而低分子化，将其变换为无法采取如上所述的蛋白质折叠结构的肽混合物，而使疏水性氨基酸残基在作为与水溶液接触的区域的分子表面上露出。但是，根据专利文献1、2中记载的使用活性碳的方法，则在苯丙氨酸含量低的肽混合物的制造方法中，水解的工序是必须的，会变的繁杂，通过水解使蛋白质等分解也可能对风味等的要素造成影响。此外，就专利文献2中记载的使用凝胶过滤剂的方法而言，存在难以分离分子量类似的物质的问题。
[0015]现有技术文献
[0016]专利文献
[0017]专利文献1：特公平2
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54070号公报
[0018]专利文献2：日本专利第3682994号公报
[0019]非专利文献
[0020]非专利文献1：J Food Sci.2009；74(4)：E199
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E206
[0021]非专利文献2：Nakano and Ozimek，J Food Process Technol 2015，7：1
[0022]非专利文献3：Journal of Dairy Research(2018)85 110
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113

技术实现思路

[0023]本专利技术所要解决的技术问题
[0024]本专利技术的目的在于提供一种能够以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量低的高纯度的糖巨肽的方法。
[0025]解决技术问题的技术手段
[0026]本专利技术者们经过深入研究的结果，发现：通过在选择包含糖巨肽的乳清蛋白混合物、和糖巨肽的组合作为原料和纯化对象物的组合的基础上，使用活性碳，能够以工业规模简便地制造苯丙氨酸含量极少的高纯度的糖巨肽。
[0027]本专利技术的方法能够使用可以容易且大量获得的便宜的活性碳，对样品进行大量处理，因此与使用离子交换树脂的非专利文献1～3的方法相比，更适合工业性的大量生产。此外，本专利技术的方法与以在使用离子交换树脂的方法中采用的使用了盐溶液的溶出操作为必要步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种糖巨肽的制造方法，其包含：(A)使包含糖巨肽的乳清蛋白混合物与活性碳接触的工序、以及(B)将糖巨肽从活性碳中分离的工序。2.根据权利要求1所述的方法，其中，乳清蛋白混合物为来源于乳清的粗糖巨肽。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，活性碳的细孔容积为0.50mL/g以上。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，活性碳来源于植物类的碳前体。5.根据权利要求1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：远藤裕太，岸野光广，金子雅哉，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：