分泌抗SVA抗体的杂交瘤细胞及其分泌的抗体与应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，具体公开了分泌抗SVA抗体的杂交瘤细胞及其分泌的抗体与应用。本发明专利技术的杂交瘤细胞包括杂交瘤细胞株SVA

【技术实现步骤摘要】
分泌抗SVA抗体的杂交瘤细胞及其分泌的抗体与应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，具体地说，涉及分泌抗SVA抗体的杂交瘤细胞及其分泌的抗体与应用。

技术介绍

[0002]猪塞尼卡病毒病是由塞尼卡病毒A(Senecavirus A，SVA)引起的一种猪水泡病。SVA最早被叫做塞内卡谷病毒A(Seneca Valley virus SVV)，2015年国际病毒分类委员会(ICTV)将其列入小RNA病毒科塞内卡病毒属，SVA与同科的心肌炎病毒属成员同源性最接近。SVA可引起仔猪腹泻，经产母猪和公猪鼻、上颚、口腔、唇部和蹄冠周围出现小泡和溃疡，偶发腹泻症状，1
‑
3天的新生仔猪死亡率可达30％
‑
70％。迄今为止，各国均报道发生过该病。但目前国内外对SVA的认识及研究较少，一旦大规模暴发必定会给养殖业带来严重的经济损失。
[0003]SVA是无囊膜的单股正链RNA病毒，结构呈二十面体，直径约为30nm，基因组全长约7.2～7.3kb，病毒基因具有1个开放阅读框(ORF)，编码有2181个氨基酸组成的多聚蛋白前体，之后被裂解为1个前导蛋白和3个主要多聚蛋白(P1、P2和P3)。P1基因区域主要编码4个结构蛋白(VP4、VP2、VP3和VP1)，形成病毒的核衣壳，而P2和P3基因区域编码7个非结构蛋白(2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D)。研究显示，VP2和VP3蛋白可诱导机体产生主要的中和抗体，用于清除体内的病毒，在抵御SVA感染和缓解临床症状中发挥着至关重要的作用。同时以其为检测抗原建立血清学方法，与血清中和试验有高度的一致性。
[0004]由于SVA感染猪以后引起的临床症状与口蹄疫、猪水泡病等难以区分，仅凭借临床症状和病理剖检难以诊断SVA。因此病毒分离鉴定是最常用的病原学检测方法，但该方法操作繁杂，检测周期长；PCR及荧光定量PCR检测方法成本较高，仪器设备价格高昂，难以在基层推广应用；ELISA方法具有操作简便、敏感性高、适于大规模样品检测的优点，是实验室常用的检测方法。目前已有基于单抗检测SVA抗体的阻断ELISA试剂，但过程相对繁琐，操作时长；也有一些其他关于SVA抗体检测阻断及竞争ELISA方法的研究，但均是基于特异性、敏感性均较低的多抗来建立的。
[0005]化学发光酶联免疫方法(Chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)是将化学发光体系与酶联免疫分析技术相结合，以化学发光强度与反应物浓度的正比关系，检测微量抗原或抗体的一种新型免疫测定技术。该技术与普通间接ELISA检测方法相比，操作简单，反应时间短；可通过绘制标准曲线实现定量分析；敏感性与精确度明显优于其他方法，标准阳性样本检出率可高达100％；检测范围很广，可达6个数量级。目前，该方法已被广泛应用于人体外诊断试剂如肿瘤标记物检测，丙型肝炎、艾滋病抗体检测，食品安全检测等项目，但在动物疫病检测领域应用尚不广泛。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的问题，本专利技术的目的在于建立一种敏感、快速、准确的SVA竞争
CLEIA检测方法。
[0007]为了实现该目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]第一方面，本专利技术提供一株杂交瘤细胞株，其命名为SVA
‑
VP2
‑
6D5，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021277；或者，命名为SVA
‑
VP3
‑
7A9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021276。
[0009]杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5于2021年9月30日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)，保藏编号为CCTCC NO:C2021277。
[0010]杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9于2021年9月30日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)，保藏编号为CCTCC NO:C2021276。
[0011]本专利技术研究获得了两株杂交瘤细胞SVA
‑
VP2
‑
6D5和SVA
‑
VP3
‑
7A9，它们分别能分泌抗SVA r
‑
VP2和SVAr
‑
VP3的单克隆抗体，在将上述抗体进行酶标后，可用于作为SVA竞争CLEIA检测中的竞争抗体，实现理想的SVA检测效果。
[0012]第二方面，本专利技术提供杂交瘤细胞，其包括杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5和杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9；所述杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021277，所述杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021276。
[0013]第三方面，本专利技术提供上述杂交瘤细胞株或杂交瘤细胞产生的单克隆抗体。
[0014]第四方面，本专利技术提供上述杂交瘤细胞株或杂交瘤细胞或单克隆抗体在制备检测A型塞内卡病毒的试剂或试剂盒中的应用。
[0015]第五方面，本专利技术提供一种检测A型塞内卡病毒的试剂或试剂盒，其含有上述的单克隆抗体。
[0016]优选，所述的试剂或试剂盒，含有酶标记的两种单克隆抗体，所述两种单克隆抗体分别为rVP2单克隆抗体和rVP3单克隆抗体，所述rVP2单克隆抗体由杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5产生，所述rVP3单克隆抗体有杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9产生；
[0017]更优选，所述rVP2单克隆抗体和所述rVP3单克隆抗体的质量比为1：(1.1
‑
1.8)，进一步优选为1:1.2，以获得更好的检测灵敏性；
[0018]以本专利技术的试剂盒检测时，利用的是竞争化学发光酶联免疫检测方法，具体以纯化的SVA灭活浓缩病毒蛋白为抗原，两种酶标单抗作为竞争酶标记物。
[0019]本专利技术发现当将两株杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5和SVA
‑
VP3
‑
7A9分泌的单克隆抗体进行酶标后共同作为检测试剂盒中的竞争抗体，将使得检测效果更佳。
[0020]和/或，所述试剂盒中还含有酶标单抗稀释液；所述酶标单抗稀释液为含有1.4
‑
1.6％，优选为1.5％酪蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株杂交瘤细胞株，其特征在于，命名为SVA
‑
VP2
‑
6D5，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021277；或者，命名为SVA
‑
VP3
‑
7A9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021276。2.杂交瘤细胞，其特征在于，包括杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5和杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9；所述杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021277，所述杂交瘤细胞株SVA
‑
VP3
‑
7A9保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021276。3.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的杂交瘤细胞产生的单克隆抗体。4.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的杂交瘤细胞或权利要求3所述的单克隆抗体在制备检测A型塞内卡病毒的试剂或试剂盒中的应用。5.一种检测A型塞内卡病毒的试剂或试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的单克隆抗体。6.根据权利要求5所述的试剂或试剂盒，其特征在于，含有酶标记的两种单克隆抗体，所述两种单克隆抗体分别为rVP2单克隆抗体和rVP3单克隆抗体，所述rVP2单克隆抗体由杂交瘤细胞株SVA
‑
VP2
‑
6D5产生，所述rVP3单克隆抗体有杂交瘤细胞株SVA
...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫若潜，马震原，王淑娟，班付国，柴茂，杨海波，刘梅芬，刘影，王东方，郭育培，谢彩华，王华俊，朱前磊，赵雪丽，王翠，刘敏，宋丹，
申请(专利权)人：河南省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：