一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，所述分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13

【技术实现步骤摘要】
一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术属于免疫化学
，涉及一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]癌症是目前世界上危害人类健康的最严重的疾病之一，在全球范围内，癌症的发病率处于逐年高发的态势，且呈现出年轻化趋势。早预防，早发现，早治疗，能够显著减少癌症的发病率，延长患者的生存期。因此对癌症相关抗原检测的诊断试剂开发尤为重要。
[0003]淋巴细胞活化基因3（Lymphocyte
‑
activation gene 3 protein，LAG3），又称为CD233。LAG3基因定位于12号染色体（12p13）。LAG3是一个Ⅰ型跨膜蛋白，属于免疫球蛋白（Ig）超家族，由胞外区、跨膜区和胞质区3个部分组成，主要表达在活化T细胞、NK细胞、B细胞和浆细胞样DC中。LAG3的胞质尾由三个部分组成：一个丝氨酸磷酸化位点、一个“KIEELE”模体（motif）和一个谷氨酸脯氨酸二肽重复序列（EP repeat）。其中“KIEELE”模体高度保守，并可能参与了LAG3下游抑制信号的转导，缺乏该结构的LAG3蛋白不能发挥对T细胞的抑制作用（Shan C,Li X,Zhang J.Progress of immune checkpoint LAG
‑
3 in immunotherapy[J].Oncology letters,2020,20(5):207.）。
[0004]LAG3是免疫负调节因子，主要结合MHC
ꢀⅡ
类分子，调节树突状细胞的功能。LAG3能选择性地与稳定的抗原肽
‑
MHC II分子复合物（pMHC II）结合，因此，LAG3能优先抑制稳定的pMHC II的CD4
+
T细胞的活化。LAG3的表达与特异性T细胞的免疫调节功能呈负相关，抑制LAG3的功能，能够让T细胞重新获得细胞毒性，增强特异性CD8
+
T细胞的抗肿瘤作用，从而增强对肿瘤的杀伤效果。在人CD4
+
细胞中封闭LAG3能促进细胞增殖，并提高IL2、IL4、IFN
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γ和TNF
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α的表达水平。
[0005]LAG3参与调节性T细胞的抑制性作用。当处于肿瘤环境或慢性感染时，长期的抗原刺激会导致LAG3持续高表达，引起T细胞耗竭。此外，PD
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1/PD
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L1途径和LAG3阻断剂的联合抑制作用产生了抗肿瘤功效，因此，阻断LAG3信号通路能促进耗竭T细胞恢复功能。
[0006]LAG3目前是免疫检查点二代靶点中临床数据较多、成药性相对确定的靶点。目前以LAG3为靶点的临床在研药物较多，其中Bristol Myers Squibb（BMS）公司公布LAG3单抗relatlimab联合抗PD
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1单抗Opdivo（nivolumab）的组合疗法，在评估未经治疗的转移性或不可切除性黑色素瘤患者的II/III期临床试验RELATIVITY
‑
047（CA224
‑
047）中，相比于Opdivo单独用药可显著改善患者的无进展生存期，试验达到主要终点。这是全球首个抗LAG3抗体的临床III期数据。以LAG3为靶点的药物主要治疗领域包括癌症和自身免疫性疾病。
[0007]免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原
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抗体的相互作用来显示组织切片中抗原的分布和定位的原位检测技术。这种方法的原理是通过抗体识别靶标抗原完成的，抗体具有高特异性，只与组织切片中的目标抗原结合，随后利用化学显色或荧光检测使抗原
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抗体的相互作用可视化，或在化学显色中，将酶偶联到抗体上，酶会催化底物在
抗原位置产生有色沉淀。免疫组化常用的组织切片技术对组织内抗原的构象及抗原表位的暴露有一定影响。为了提高免疫组化的检测效率和一致性，需要筛选出高特异性的单克隆抗体，且要求这些抗体在组化检测工作中的灵敏度、特异性和准确度等指标达到一定的标准，因此筛选出各项指标均较好的抗体对病理诊断具有重要的意义。
[0008]目前，市场上能够特异性并高灵敏度地检测LAG3的抗体数量极少，尤其是能够应用于免疫组织化学的抗LAG3单克隆体。所以制备特异性强、灵敏度高、应用范围广的抗LAG3单克隆抗体，具有重要的现实意义和应用价值。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，所述杂交瘤细胞分泌的抗LAG3单克隆抗体与LAG3蛋白具有较高的亲和力，能够特异性地识别真核表达的LAG3蛋白及原核表达的LAG3蛋白，在制备LAG3检测试剂盒中具有重要的应用前景。以抗LAG3单克隆抗体构建的LAG3检测试剂盒灵敏度高、特异性好，在包括酶联免疫吸附、蛋白免疫印迹、免疫组织化学、流式细胞术和免疫荧光等在内的多种检测方法中应用效果较好。
[0010]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13
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15，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45003，保藏日期为2021年12月3日。
[0011]第二方面，本专利技术提供一种抗LAG3单克隆抗体，所述抗LAG3单克隆抗体由第一方面所述的鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13
‑
15产生。
[0012]本专利技术中，所述抗LAG3单克隆抗体以人LAG3重组蛋白作为免疫原免疫小鼠，取免疫后的小鼠脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选能产生高灵敏度和高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。
[0013]本专利技术中所述抗LAG3单克隆抗体的抗原为人源LAG3蛋白，所述人源LAG3蛋白包括SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，相应的蛋白胞外区位于第23~450位氨基酸。
[0014]SEQ ID No.1：LQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13
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15，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45003，保藏日期为2021年12月3日。2.一种抗LAG3单克隆抗体，其特征在于，所述抗LAG3单克隆抗体由权利要求1所述的鼠抗人LAG3单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ13
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15产生。3.根据权利要求2所述的抗LAG3单克隆抗体，其特征在于，所述抗LAG3单克隆抗体的重链为IgG1型。4.根据权利要求2或3所述的抗LAG3单克隆抗体，其特征在于，所述抗LAG3单克隆抗体还含有修饰缀合物，所述修饰缀合物包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素或荧光基团中的任意一种。5.一种权利要求2~4任一项所述的抗LAG3单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：培养权利要求1所述的分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株MJ13
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15，纯化，获得所述抗LAG3单克隆抗体。6.权利要求1所述的分泌抗LAG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株和/或权利要求2~4任一项所述的抗LAG3单克隆抗体在制备LAG3蛋白表达检测产品中...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜威，于永娟，张亚飞，谭佳佳，陆雯，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：