半乳糖凝集素-3鼠杂交瘤细胞、单克隆抗体、检测试剂盒及检测方法技术

本申请涉及免疫学检测的技术领域，具体涉及半乳糖凝集素

【技术实现步骤摘要】
半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞、单克隆抗体、检测试剂盒及检测方法


[0001]本申请涉及免疫学检测的
，具体涉及半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞、单克隆抗体、检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]Galectin
‑
3也称半乳糖结合蛋白
‑
3(Gal
‑
3)，是Galectin家族的一员。Gal
‑
3在人类基因组中由LGALS3编码，位于14号染色体，q21
‑
q22，总长约17kb，包含6个外显子和5个内含子。Gal
‑
3含有一个富于脯氨酸和甘氨酸重复序列的氨基端以及一个带有CRD的球形羧基端，分子量为29
‑
35000，含251个氨基酸残基，有3个不同的结构域，分别为由12个氨基酸残基组成的N端结构域，其中丝氨酸Ser6磷酸化位点具有调节细胞靶向的作用；富含甘氨酸，酪氨酸，脯氨酸串联重复序列的类胶原结构，作为基质金属蛋白酶的底物；C端的CRD包含Bcl
‑
2家族同源序列BH1中的保守基序NWGR。
[0003]血清Gal
‑
3能促进心肌巨噬细胞和肥大细胞的活化和迁移，加速刺激纤维母细胞的活化，诱导成纤维细胞增殖，增加心肌间质如Ⅰ型胶原等在心脏及血管周围沉积，引起心肌肥厚、心肌顺应性减退，导致心脏重塑以及心肌纤维化，而心脏重塑和心肌纤维化正是影响慢性心力衰竭的重要决定性因素。经过多人研究表明，Gal<br/>‑
3在血清中的浓度水平是预测心力衰竭的重要标志，在临床应用上具有重要的意义。目前，用于检测Gal
‑
3浓度水平的试剂盒，其检测范围较小，检出限较高，灵敏度、特异性和稳定性均有待提高。

技术实现思路

[0004]为了提供一种用于高精度、高灵敏度、高检出限和高稳定性的半乳糖结合蛋白
‑
3的检测方法，本申请提供了半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞、单克隆抗体、检测试剂盒及检测方法。
[0005]首先，本申请提供了一种半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞，以半乳糖凝集素
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3重组蛋白作为抗原，对小鼠进行免疫反应后制备得到。
[0006]进一步地，本申请提供了一种半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No:23013，保藏时间为2021年7月16日。
[0007]同时，本申请还提供了另一种半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No:23014，保藏时间为2021年7月16日。
[0008]同时，本申请还涉及两种单克隆抗体，分别为上述两种半乳糖凝集素
‑
3鼠杂交瘤细胞分泌得到，分别编号为A80和B07。
[0009]本申请还提供了一种半乳糖凝集素
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3检测试剂盒，包括包被抗体和标记抗体，其中包被抗体为A80，标记抗体为B07。
[0010]上述试剂盒可以为化学发光免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒、胶体金免疫试剂盒、荧光免疫试剂盒中的任意一种。
[0011]最后，本申请还涉及血清半乳糖凝集素
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3的检测方法，通过上述试剂盒建立基于DAS
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ELISA的方法，并使用生物素放大系统，从而测得血清半乳糖凝集素
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3的含量。
[0012]根据上述技术方案，本申请的有益效果如下：通过本申请中提供的杂交瘤细胞分泌的到的单克隆抗体，均为IgG1亚型，免疫性能强，具有较强的活性和亲和力，稳定性高等优点。检上述单克隆抗体及试剂盒在运用于血清半乳糖凝集素检测的过程中，具有较强的特异性和较高的灵敏度，检测范围到达0.046
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33.333ng/mL。
[0013]上述检测方法可以能够有效推动Gal
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3检测的应用，促进Gal
‑
3检测纳入常规临床检测中，在临床诊断中具有重要的作用。说明书附图
[0014]图1是配对抗体线性检测的结果图。
具体实施方式
[0015]以下结合附图和实施例对本申请进行进一步说明。
[0016]生物保藏说明：半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞，标记为杂交瘤细胞株Gal
‑3‑
1，于2021年7月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏号为CGMCC No:23013。
[0017]在下文中，PBST洗涤液通过向PBS溶液中添加质量分数为0.5％吐温20配制而成。
[0018]半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞，标记为杂交瘤细胞株Gal
‑3‑
2，于2021年7月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏号为CGMCC No:23014。
[0019]实施例1，半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞的培养，通过Gal
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3重组蛋白对小鼠进行免疫反应后经筛选分离得到。本实施例中，所用的Gal
‑
3重组蛋白为毕赤酵母表达系统表达(44KD)，产自杭州博茵生物技术有限公司。小鼠选用选取6周龄，体重为18～20g的BALB/c的雌性小鼠，具体步骤如下。
[0020]免疫反应：将上述Gal
‑
3重组蛋与弗氏完全佐剂风体积混合并充分乳化，在小鼠的腹部进行多点注射免疫，Gal
‑
3的剂量为100μg/只，注射量为0.3ml/只。注射完毕后，两周后进行第二次免疫，Gal
‑
3的剂量为80μg/只，注射量为0.3mL/只。一周后，对小鼠进行眼眶采血、分离血清，采用间接ELISA法检测血清效价，取效价达到1:105及以上的小鼠进行脾脏加强免疫，加强免疫所用的Gal
‑
3重组蛋白的用量为50μg/只，加强免疫后继续正常饲养三天。
[0021]饲养层细胞的制备：取普通BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞和胸腺细胞作为饲养细胞，具体操作如下：取6周龄BALB/c小鼠，眼球放血致死，用消毒后的剪刀和镊子从后腹剪开腹部皮肤，暴露腹膜。用注射器取4ml IMDM培养基至腹腔，用手指轻轻挤压腹部，并进行反复冲洗，回收冲洗液。取出小鼠的胸腺，将其研磨后用IMDM培养基冲洗，回收洗液。将两次回收液混合后，以1300rpm的转速离心3min，弃上清，即得到饲养层细胞。
[0022]脾细胞的制备：以上述加强免疫后的小鼠，眼球放血致死，用消毒后的剪刀剪开小鼠加强部位的皮肤，用镊子和剪刀剥离脾脏，并去除脂肪和结缔本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞，其特征在于，以半乳糖凝集素
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3重组蛋白作为抗原，对小鼠进行免疫反应后制备得到。2.根据权利要求1所述的半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞，其特征在于，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No:23013，保藏时间为2021年7月16日。3.根据权利要求1所述的半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞，其特征在于，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No:23014，保藏时间为2021年7月16日。4.单克隆抗体，其特征在于，为IgG型抗体，由如权利要求2所述的半乳糖凝集素
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3鼠杂交瘤细胞分泌得到。5.单克隆抗体，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓春泉，陈建，陈慧，周旭一，
申请(专利权)人：杭州博茵生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：